多肽檢測方法

㈠ 常用於蛋白質多肽鏈N端.C端測定的方法有幾種基本原理是什麼

(1)N-末端測定 A.二硝基氟苯法(FDNB，DNFB)：1945年Sanger提出此方法，是他的重要貢獻之一。DNP-氨基酸用有機溶劑抽提後，通過層析位置可鑒定它是何種氨基酸。Sanger用此方法測定了胰島素的N末端分別為甘氨酸及苯丙氨酸。B.氰酸鹽法：1963年Stank及Smyth介紹了一種測定N末端的新方法，步驟如下：由於乙內醯脲氨基酸不帶電荷，因此可用離子交換層析法將它與游離氨基酸分開，分離所得的乙內醯脲氨基酸再被鹽酸水解，重新生成游離的氨基酸，鑒別此氨基酸即可了解N-末端是何種氨基酸。C.二甲基氨基萘磺醯氯法：1956年Hartley等報告了一種測定N-末端的靈敏方法，採用1-二甲基氨基萘-5-磺醯氯，簡稱丹磺醯氯。它與游離氨基末端作用，方法類似於Sanger的DNFB法，產物是磺醯胺衍生物。丹磺醯鏈酸具有強烈的黃色熒光。此法優點為靈敏性較高(比FDNB法提高100倍，樣品量小於1毫微克分子)及丹磺醯氨基酸穩定性較高(對酸水解穩定性較DNP氨基酸高)，可用紙電泳或聚醯胺薄膜層析鑒定。(2)C-末端分析A.肼解法：這是測定C-末端最常用的方法。將多肽溶於無水肼中，100℃下進行反應，結果羧基末端氨基酸以游離氨基酸狀釋放，而其餘肽鏈部分與肼生成氨基酸肼。這樣羧基末端氨基酸可以採用抽提或離子交換層析的方法將其分出而進行分析。如果羧基末端氨基酸側鏈是帶有醯胺如天冬醯胺和谷氨醯胺，則肼解時不能產生游離的羧基末端氨基酸。此外肼解時注意避免任何少量的水解，以免釋出的氨基酸混淆末端分析。B.羧肽酶水解法：羧肽酶可以專一性地水解羧基末端氨基酸。根據酶解的專一性不同，可區分為羧肽酶A、B和C。應用羧肽酶測定末端時，需要事先進行酶的動力學實驗，以便選擇合適的酶濃度及反應時間，使釋放出的氨基酸主要是C末端氨基酸。

㈡ 常用於蛋白質多肽鏈N端.C端測定的方法有幾種

常用於蛋白質多肽鏈N端測定的方法：

1、二硝基氟苯法（FDNB法）

2、二甲基氨基萘磺醯氯法（DNS－Cl法）

3、異硫氰酸笨酯法（Edman法）

常用於蛋白質多肽鏈C端測定的方法

1、肼解法

2、還原法

3、羧肽酶法

(2)多肽檢測方法擴展閱讀：

多肽合成是一個固相合成順序，一般從N端即氨基端向C端即羧基端合成。過去的多肽合成是在溶液中進行的稱為液相合成法。

液相合成基於將單個N-α保護氨基酸反復加到生長的氨基成份上，合成一步步地進行， 通常從合成鏈的C端氨基酸開始，接著的單個氨基酸的連接通過用DCC，混合炭酐， 或N-carboxy酐方法實現。

㈢ 蛋白質多肽鏈N端測定的方法及基本原理

1 多肽鏈的拆分。由多條多肽鏈組成的蛋白質分子，必須先進行拆分。幾條多肽鏈藉助非共價鍵連接在一起，稱為寡聚蛋白質，如，血紅蛋白為四聚體，烯醇化酶為二聚體；可用8mol/L尿素或6mol/L鹽酸胍處理，即可分開多肽鏈(亞基).
2 測定蛋白質分子中多肽鏈的數目。通過測定末端氨基酸殘基的摩爾數與蛋白質分子量之間的關系，即可確定多肽鏈的數目。
3 二硫鍵的斷裂。幾條多肽鏈通過二硫鍵交聯在一起，可在8mol/L尿素或6mol/L鹽酸胍存在下，用過量的-巰基乙醇處理，使二硫鍵還原為巰基，然後用烷基化試劑保護生成的巰基，以防止它重新被氧化。
二硫鍵的切割與保護（元素後數字為下標）
a 過甲酸〔performic acid〕 不可逆
－CH2SO3H
b、還原＋氧化 不可逆
[ 巰基乙醇，DTT ] ＋ 碘乙酸等
－S-CH2-COOH
c、亞硫酸分解〔Sulfitolysis〕 可逆
－R1-S-S-R2 ＋ HSO3-
R1-S- + R2-S-SOH3
可以通過加入鹽酸胍的方法解離多肽鏈之間的非共價力；應用過甲酸氧化法或巰基還原法拆分多肽鏈間的二硫鍵。
巰基（-SH）的保護4 測定每條多肽鏈的氨基酸組成，並計算出氨基酸成分的分子比（如右圖）
5 分析多肽鏈的N-末端和C-末端
多肽鏈端基氨基酸分為兩類：N-端氨基酸(amino-terminal)和C-端氨基酸(Carboxyl-terminal) 。在肽鏈氨基酸順序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。N末端分析法（Sanger法；Edman法；DNS-Cl；酶降解法），C末端分析法（肼解法；酶降解法；硼氫化鋰法）。
6 多肽鏈斷裂成多個肽段。可採用兩種或多種不同的斷裂方法將多肽樣品斷裂成兩套或多套肽段或肽碎片，並將其分離開來。
7 測定每個肽段的氨基酸順序
8 確定肽段在多肽鏈中的次序。
利用兩套或多套肽段的氨基酸順序彼此間的交錯重疊，拼湊出整條多肽鏈的氨基酸順序。
9 確定原多肽鏈中二硫鍵的位置
一般採用胃蛋白酶處理沒有斷開二硫鍵的多肽鏈，再利用雙向電泳技術分離出各個肽段，用過甲酸處理後，將可能含有二硫鍵的肽段進行組成及順序分析，然後同其它方法分析的肽段進行比較，確定二硫鍵的位置。

㈣ 多肽含量的測定有哪些方法

多肽含量的測定方法與有些蛋白質含量的測定方法相同,但並非所有蛋白質含量的測定方法都適用於多肽的含量測定,本文介紹了幾種常見的多肽含量測定的方法:①雙縮脲法;②Folin—酚試劑法;③OPA法(鄰苯二甲醛法);④紫外吸收法,並且進行了比較。

㈤ 蛋白分中多肽含量測定方法有哪些不甚感激！

總分子量除平均分子質量.能估計個大概.
精確的測定方法:
1\測定初質量
2\蛋白酶,肽酶水解
3\提純氨基酸
4\測質量差量
5\除水的相對分子質量
6\乘以阿伏加德羅常數
(怎麼最後兩句好象廢話....)

㈥ 檢測多肽濃度有什麼方法

檢測多肽濃度有什麼方法
多肽的分離純化，一般有固定的思路。比如固相合成的多肽一般採用，XD7HP樹脂脫酸（THF）,然後SKP-10-1300層析填料層析純化，純度99%以上，然後脫酸脫鹽凍干就行了,如果純化不到想要的純度在想其他辦法,不過一般沒有問題。比如胸腺法新，奧曲肽，盧伐必定等。 如果是細菌產的多肽如胰島素 生長抑素等，那就得進行前處理，將產品進行粗提，得到粗品後。一般採用，破菌，離心沉澱，包涵體溶解,等電沉澱, 超濾 ,上XD7HP樹脂，除掉小分子多糖，緩沖鹽，,然後SKP-10-1300層析填料層析純化，純度99%以上，然後脫酸脫鹽凍干就行了。當然有的要用到到離子交換填料。

㈦ 測定多肽氨基酸的最好方法

是測氨基酸的序列吧…
1.先測一下有幾條鏈。根據N-末端/C-末端的數目和蛋白質的相對分子質量確定。
2.把多肽鏈拆開。
3.如果有二硫鍵就斷開二硫鍵。
4.把每條肽鏈的序列測出來。

你所說的最好方法應該具體到每一步吧，對不同的氨基酸
要具體情況具體分析啊

㈧ 多肽最好的檢測方法

抗原抗體雜交技術
將待檢測多肽視為抗原，選用特定的抗體，根據抗體的特異性結合，可檢測目的多肽是否存在。

㈨ 請教多肽結構確證的方法問題

化學的方法是埃德曼降解法,這種方法是瑞典科學家埃德曼創立的連續測定蛋白質或肽鏈N端氨基酸殘基序列的經典方法.用異硫氰酸苯酯(PTH)等與多肽反應,逐個水解N端氨基酸殘基,依次生成各種PTH-氨基酸,層析鑒定PTH-氨基酸就可從N端逐個確定被測肽段的氨基酸殘基排列順序. 對於含有氨基酸殘基較多的蛋白質,一般採用質譜的方法.質譜轟擊蛋白質是指稱為碎片,根據碎片在電場中的運動情況確定質荷比,在根據計算機分析和資料庫確定蛋白質的氨基酸序列.

㈩ 多肽分子量分布測定

一般檢測多肽的分子量可以用SDS-PAGE凝膠電泳或者色譜法.電泳比較簡單,便宜,但是范圍有限,而且對疏水,過大過小的肽段測不出.色譜可以測分子量還能測序,范圍更廣.