雙抗檢測方法

㈠ 雙抗塗層檢測在哪裡

我單位可以做塗料檢測，有具體的標准嗎？

㈡ 核酸檢測與雙抗檢測，這兩者之間究竟有何區別

核酸檢測與雙抗檢測，這兩者之間究竟有何區別？

想要知道兩者之間的區別，首先我們要先從定義方面去區分一下！

核酸檢測——具有早期診斷、靈敏度和特異性高等特點，是確診新冠肺炎的“金標准”，目前使用最廣泛的是實時熒光定量RT-PCR技術。一般檢測位於病毒ORF1ab和N基因上的兩個靶標，同一份標本需滿足雙靶標陽性或重復檢測為單靶標陽性或兩種標本同時滿足單靶標才能確認SARS-CoV-2病毒核酸陽性。

核酸檢測與雙抗檢測兩者相比較，試劑原理與檢測樣本類型、檢測步驟方面都存在一些差別！這里我們就從它們的定義方面簡單介紹一下。

㈢ 自身抗體的檢測方法有哪些

1、抗核抗體檢測

抗核抗體是一組將自身真核細胞的各種細胞核成分作為靶抗原的自身抗體的總稱，主要是IgG，其次是IgM和IgA，無器官和種屬特異性。ANA在大多數自身免疫性疾病中均可呈陽性，正常老年人也可有低滴度的ANA。ANA檢測在臨床自身免疫病診斷與鑒別診斷中是一個重要的篩查試驗。

2、類風濕因子

類風濕因子是變性lgG刺激機體產生的一種自身抗體，主要存在於類風濕關節炎患者的血清和關節液內。主要為lgM型，也有lgG、lgA、lgD和IgE型。

3、抗中性粒細胞胞漿抗體

抗中性粒細胞胞漿抗體是指與中性粒細胞及單核細胞胞漿成分發生反應的抗體。當中性粒細胞受抗原刺激後，胞漿中的α-顆粒釋放蛋白酶-3、髓過氧化物酶等物質，刺激機體而產生ANCA。

(3)雙抗檢測方法擴展閱讀

自身抗體的產生原因：

人體的生長、發育和生存有完整的自身免疫耐受機制的維持，正常的免疫反應有保護性防禦作用，即對自身組織、成分不發生反應。—旦自身耐受的完整性遭到破壞，則機體視自身組織、成分為「異物」，而發生自身免疫反應，產生自身抗體。

正常人體血液中可以有低滴度的自身抗體，但不會發生疾病，但如果自身抗體的滴度超過某—水平，就可能對身體產生損傷，誘發疾病。自身免疫性疾病中有許多自身抗體，其中最重要的是抗核抗體。

㈣ 為什麼雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法

1）將特異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。 2） 加受檢標本，保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。 洗滌除去其他未結合物質。 3） 加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合 的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。 4） 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。通過比色，測知標本中抗原的量。 在臨床檢驗中，此法適用於檢驗各種蛋白質等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、 AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用於包被固相載體和制備酶結合 物而建立此法。如抗體的來源為抗血清，包被和酶標用的抗體最好分別取自不同種屬的動 物。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用於包被固相 載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標 抗體一起保溫反應，作一步檢測。 在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標 抗體結合，而不再形成夾心復合物。類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象，此時反應 後顯色的吸光值（位於抗原過剩帶上）與標准曲線（位於抗體過剩帶上）某一抗原濃度的 吸光值相同（參見1.3.2，圖1-4），如按常法測讀，所得結果將低於實際的含量，這種現 象被稱為鉤狀效應（hook effect），因為標准曲線到達高峰後呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重 時，反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常 增高的物質（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應注意可測范圍的最高值。用 高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。 假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可 用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型 問題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應 性，這也是用單抗作夾心法應注意的問題。 雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子（RF）的干擾。RF是一種自身抗體，多為IgM型，能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF，它可充當抗原成份，同時與固相抗體和酶標抗體結合，表現出假陽性反應。採用F（ab'）或Fab片段作酶結合物的試劑，由於去除了Fc段，從而消除RF的干擾。 雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為這類試劑的一項考核指標。 雙抗體夾心法適用於測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用於測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。

㈤ HIV-抗體檢測方法的確認實驗

免疫印跡試驗（WB）、條帶免疫試驗（LIATEK HIVⅢ）、放射免疫沉澱試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）。國內常用的確認試驗方法是WB。
(一_免疫印跡實驗(westernblot，WB)是廣泛用於許多傳染病診斷的實驗方法，就HIV的病原學診斷而言，它是首選的用以確認HIV抗體的確認實驗方法，WB的檢測結果常常被作為鑒別其他檢驗方法優劣的「金標准」。
確認試驗流程:
有HIV-1/2混合型和單一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型試劑進行檢測，如果呈陰性反應，則報告HIV抗體陰性；如果呈陽性反應，則報告HIV-1抗體陽性；如果不滿足陽性標准，則判為HIV抗體檢測結果不確定。如果出現HIV-2型的特異性指示條帶，需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確認試驗，呈陰性反應，報告HIV-2抗體陰性；呈陽性反應則報告HIV-2抗體血清學陽性,並將樣品送國家參比實驗室進行核酸序列分析，
WB的敏感性一般不低於初篩實驗，但它的特異性很高，這主要是基於HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化，能夠檢測針對不同抗原成分的抗體，因而能夠用WB方法鑒別初篩實驗的准確性。從WB確認試驗結果看出，初篩試驗盡管選擇質量較好的試劑，如第三代ELISA，仍會有假陽性出現，必須通過確認試驗才能得出准確結果。
(二)免疫熒光實驗(IFA)
IFA法經濟、簡便、快速，曾被FDA推薦用於WB不確定樣品的診斷。但需要昂貴的熒光顯微鏡，需要受過良好訓練的技術人員、觀察和解釋結果易受主觀因素的影響，結果不宜長期保存，IFA不宜在一般的實驗室開展和應用。
HIV抗體確證試驗結果報告
HIV抗體確證試驗結果用附表3報告。
（1）符合HIV-1抗體陽性判斷標准，報告「HIV-1抗體陽性（+）」，並按規定做好檢測後咨詢、保密和疫情報告工作。符合HIV-2抗體陽性判斷標准，報告「HIV-2抗體陽性（+）」，並按規定做好檢測後咨詢、保密和疫情報告工作。
（2）符合HIV抗體陰性判斷標准，報告「HIV抗體陰性（－）」。如疑似「窗口期」感染，建議進一步做HIV核酸檢測，盡早明確診斷。
（3）符合HIV抗體不確定判斷標准，報告「HIV抗體不確定（±）」，在備注中應註明等待「4周後復檢」。

㈥ 我是做ELISA實驗的初學者，最近在建立雙抗體夾心法的檢測方法，不知道如何確定包被濃度和抗原濃度，謝謝！

你是不知道包被的濃度還是不知道怎樣配治包被液啊？
我這里有份ELISA的實驗過程。不過是除掉前兩部的。
1、 加被檢抗原（重組蛋白或自然樣品）：用稀釋液（DS01、AS01、AS02、AS03、AS04）將被檢抗原按實驗設計稀釋，每孔100µl，同時用稀釋液作空白對照。封板膜封板，室溫放置兩小時。

2、 洗滌：到盡板孔中的液體，加滿洗滌液（WS03），靜止放十秒，洗四次，最後在毛巾或吸水紙上拍干板子：

3、 加檢測抗體：將生物素標記的檢測抗體稀釋適當濃度（稀釋液DS01），每孔100 µl封板膜封板，室溫放置一小時：

4、 洗滌：到盡板孔中的液體，加滿洗滌液（WS03），靜止放十秒，洗四次，最後在毛巾或吸水紙上拍干板子：

5、 加親和素-辣根過氧化酶（HRP）稀釋適當濃度（稀釋液HD01）每孔100µl，封板膜封板，室溫放置30分鍾：

6、 加底物：新鮮配製的四甲基聯苯胺溶液（TMB），每孔100µl，室溫暗處放置30分鍾：

7、 加終止液（SS01）：每孔100µl，立即讀值：

8、 觀察結果：用酶標儀記錄450nm讀數.

㈦ 雙抗檢測非陰是什麼意思

雙抗是一種治療措施，指的是用兩種葯物聯合抗血小板治療，相對於雙抗治療還有一種治療措施，就是單抗，指的是單一用一種葯物抗血小板治療。臨床上建議抗血小板葯物治療的選擇，以單一的一種葯物治療為主，不建議常規應用兩種葯物聯合抗血小板治療。

㈧ 為什麼雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法

雙抗體夾心法適用於測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用於測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。那麼，為什麼雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法?
1、將特異性抗體與固相載體聯結，形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。
2、加受檢標本，保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合，形成固相抗原抗體復合物。 洗滌除去其他未結合物質。
3、加酶標抗體，保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合 的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。
4、 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。

㈨ 抗體效價的檢測方法

多采免疫雙向擴散法
【基本原理】
*指抗原和抗體在同一凝膠內都擴散，彼此相遇後形成特異性的沉澱線。
-將抗原與抗體分別加入同一凝膠板中兩個相隔一定間距的小孔內，使兩者進行相互擴散，當抗原抗體濃度之比相適宜時，彼此相遇形成一白色弧狀沉澱線。
*優缺點：簡便，但敏感性較低，易出現假陰性結果。
免疫雙向擴散法的操作步驟
*將玻璃板用水洗凈後用75%乙醇沖洗，晾乾後放在水平台上備用。
*將1%agar 融化後，置56℃水浴。
*在玻璃板上鋪膠，約1.5mm 厚，凝固後打孔(直徑 3rnm)，孔間距10mm。
l 抗血清(抗體預先作系列倍比稀釋即ml 抗原樣品，周圍孔內每孔加5m*中心孔加5 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
*凝膠板置濕盒內，室溫擴散24h。
*觀察結果。
凝聚胺法測定孕婦血清IgG抗-A（抗-B）效價的方法待檢血清與0.2 mol/L 2?硫基乙醇(2?Me)在試管內等量混合，放入37℃水浴1 h以破壞血清中的IgM抗體，吸取處理後的血清用生理鹽水倍比稀釋，稀釋度分別為2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024，然後每管加入相應的3%～5%紅細胞懸液，置37℃水浴30 min，觀察是否凝集，不凝集者用生理鹽水洗滌3次，然後加入低離子鹽水介質(LIM液)，混勻，滴入2滴凝聚胺，混勻後3 000 r/min離心30 s，扣搖肉眼可見明顯的凝集(無凝集者須重做)，再加入2滴重懸液，輕搖，觀察凝集是否消失，凝集1 min內不消失者表示受檢者血清中含有IgG型抗?A(抗?B)。
抗體效價檢測的其它方法
*環狀沉澱試驗，需較多的抗血清，現已很少用；
*對流免疫電泳，比瓊脂免疫雙擴散法敏感，較簡便、實用；
*酶聯免疫吸附試驗 (ELISA)。
通常抗體效價低於1：128是沒有問題的，有些孕婦高達1：256以上，而且抗體效價最好1個月查上一次，有時候會有所變化。

㈩ 疫情期間什麼是雙抗檢測

目的建立一種高特異性、敏感性的ELISA方法檢測人布魯氏菌抗原。方法應用研製的針對羊布魯氏菌O鏈M抗原的單克隆抗體2D10和牛布魯氏菌O鏈A抗原的單克隆抗體4B8建立了用於檢測人布魯氏菌抗原的雙抗夾心ELISA方法。結果經檢驗該方法不與大腸桿菌O157、小腸結腸炎耶爾森氏菌O9及鼠傷寒沙門氏菌發生交叉反應,具有較好的重復性,對陽性樣品的檢測ELISA與SAT、分離培養的符合率均為100%。結論建立了高特異性、敏感性的檢測人布魯氏菌抗原的ELISA方法