組胺檢測方法

㈠ 組織或細胞中組胺量如何檢測除了ELISA外的方法

熒光分析法 氣相色譜法

㈡ 組胺檢測中為什麼加入三氯乙酸

水產品中組胺用正戊醇提取，遇偶氮試劑顯橙色，與標准系列比較定量。組胺是水產品中游離的組氨酸在組氨酸脫羧酶作用下，發生脫羧反應而形成的一種胺類物質。脫羧酶來自一些含有組氨酸脫羧酶的微生物，如某些腸桿菌、弧菌屬等，其中最重要的是摩根變形桿菌和組胺無色桿菌。當水產品受到這些細菌污染後，會產生大量組胺，從而反映出水產品受微生物污染的程度。

㈢ 組胺的檢測方法除分光光度法之外還有哪些，試述其檢測原理

測定魚粉中的組胺含量通常有兩種方法。一是AOAC的偶氮試劑比色法，用正戊醇提取魚粉中的組胺，遇偶氮試劑（對硝基苯胺的鹽酸溶液）呈橙色，使用分光光度計，定量分析。二是熒光分光光度計或熒光檢測器法測定。這兩種方法均不同程度受魚粉中雜質的干擾，定量不準確，而採用高效液相色譜柱後衍生法，能准確定量檢測魚粉或肉骨粉的組胺含量。

㈣ 求魚粉中組胺的檢測方法

組胺檢測方法原理本測試盒的原理是是競爭性直接酶聯免疫吸附劑測定法(CD-ELISA), 可准確檢測出樣品中ppm級的組胺。樣品和標准對照液中游離的組胺與酶結合物中的組胺競爭抗體結合位置。清洗後，加入底物，底物與酶結合物反應出現蘭色，蘭色越深表明組胺越少。將其置於微型孔閱讀器中可讀出透光度，以對照標准液的透光度作標准曲線，將樣品的透光度與標准曲線比較計算出樣品中組胺的准確濃度。 已提供的材料1. 48個包被了抗體的孔。2. 48個紅色標記的混合孔。3. 6瓶黃色標記的組胺標准對照溶液：0、2.5、5、10、20、50ppm六個濃度，每瓶1 ml。4. 1瓶蘭色標志的組胺—HRP酶結合物溶液。5. 1包內含10mM PBS（丁苯橡膠）乾粉的稀釋試樣提取液的濃縮緩沖液。6. 1瓶 40ml沖洗緩沖濃縮液，內含10mM丁苯橡膠—Tween。7. 1瓶綠色標志的K—蘭色底物溶液。8. 1瓶紅色標志的終止液。未提供的必需材料1. 提取材料（Neogen公司的產品號為9510）a. 去離子水或蒸餾水b. 125ml的瓶子c. 1號Whatman濾紙，Neogen公司過濾注射器或其他相當品d. 樣品收集試管2. 100ml量筒。

㈤ 如何用葯理實驗鑒別組織胺和毛果雲香鹼

動物實驗研究
1.研究M3受體激動劑毛果芸香鹼對離體大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用.方法： 採用Langendorff灌注系統,建立離體大鼠心肌缺血再灌注損傷模型.觀察毛果芸香鹼5μmol·L-1對復灌後冠脈流量、心肌丙二醛(MDA)含量、心肌超氧化物歧化酶(SOD)活性和心肌梗死面積的影響.結果 毛果芸香鹼改善缺血再灌注後的冠脈流量,其中5 min(P<0.01)和10min(P<0.05)的冠脈流量增加顯著;降低心肌MDA含量(P<0.05)並提高心肌SOD活性(P<0.05);縮小心肌梗死面積(P<0.05).上述作用可被選擇性M3受體阻斷劑4-diphenylacetoxy-N-methylpiperidine-methiodide(4-DAMP)3 nmol·L-1所逆轉.結論： M3受體激動劑毛果芸香鹼通過激動心肌M3受體而對離體大鼠心肌缺血再灌注損傷起保護作用. 2.探討長期應用毛果芸香鹼對兔眼角膜內皮細胞有無影響及影響方式。方法： 用2%的毛果芸香鹼給兔滴眼1個月和3個月後，取下兔眼球迅速固定，分離角膜內皮組織，用蛋白印跡（Western?blot）法檢測兔眼角膜內皮細胞中抗凋亡基因bcl?2蛋白及凋亡基因bax蛋白的表達，流式細胞儀檢測角膜內皮細胞的凋亡率，透射電鏡下觀察各組角膜內皮細胞的超微結構變化。結果： 應用毛果芸香鹼1個月及3個月後，均呈現兔眼角膜內皮細胞凋亡基因bax蛋白表達增多，抗凋亡基因bcl?2蛋白表達減少，3個月組兔眼角膜內皮細胞凋亡率高於對照組（P<0.05），透射電鏡下觀察可見，1個月及3個月組細胞內空泡形成，線粒體腫脹，內質網擴張，細胞核固縮，染色質固縮周邊化等典型凋亡改變。結論： 長期應用2%的毛果芸香鹼可以誘導兔眼角膜內皮細胞發生凋亡。 3.對比研究1%毛果芸香鹼脂質體滴眼液與1%毛果芸香鹼滴眼液對兔眼的縮瞳作用。方法; 家兔18隻,隨機分為實驗組、陽性對照組、陰性對照組。實驗組應用1%毛果芸香鹼脂質體滴眼液，陽性對照組應用1%毛果芸香鹼滴眼液，陰性對照組應用空白脂質體滴眼液。各組家兔左眼滴人滴眼液，右眼滴人生理鹽水作為空白對照，分別在給葯前。給葯後0．25、0．5、1、2、3、4、5、7h測量瞳孔直徑。結果 :3組滴葯前瞳孔直徑左右眼比較，差異無顯著性(P>0．05)。滴葯後0．25h，陽性對照組縮瞳作用最大(P<0．01)，滴葯1h瞳孔開始散大，滴葯後5h差異無顯著性(P>0．05)；實驗組滴眼後0．5h瞳孔最小(P<0．01)，3h瞳孔開始散大，7h差異無顯著性(P>0．05)；陰性對照組在觀察的7h內無差異(P>0．05)。結論： 1%毛果芸香鹼脂質體滴眼液具有緩慢釋葯，延長作用時間的優點。 4.對2%毛果芸香鹼微乳滴眼劑與2%毛果芸香鹼滴眼液在兔房水中的葯代動力學進行對比研究。方法：健康白兔60隻，隨機分成20組，10個實驗組，10個對照組，每組3隻兔（6隻眼）。對各實驗組雙眼結膜囊內准確滴入2%毛果芸香鹼微乳滴眼劑50 μl，對各對照組雙眼同法滴入2%毛果芸香鹼滴眼液50 μl，分別於給葯後5、10、30、40、60、90、120、180、240及360 min時抽取房水。用二氯甲烷提取房水中的葯物，採用反相高壓液相色譜（high pressure liquid chromatography, HPLC）法測定房水中的葯物濃度。結果：用反相HPLC法可以將毛果芸香鹼與其它雜質分離，最低檢測濃度為0.01 mg/L。2%毛果芸香鹼微乳滴眼劑或滴眼液50 μl滴眼後，除5 min時間點外，其餘各時間點毛果芸香鹼微乳滴眼劑治療組的房水葯物濃度較毛果芸香鹼滴眼液治療組明顯增高（P=0.000 3～0.042)。微乳滴眼劑的葯-時曲線下面積是滴眼液的3倍，微乳滴眼劑的生物利用度比滴眼液高2倍。用微乳滴眼劑後6 h，房水中仍可測出毛果芸香鹼的濃度，而用滴眼液後3 h，房水中已測不出毛果芸香鹼的濃度。結論：將毛果芸香鹼滴眼液的劑型改為微乳滴眼劑可明顯提高毛果芸香鹼的生物利用度，增強療效，減少用葯頻率，提高青光眼的治療指數，具有較好的應用前景。
編輯本段應用
在動物醫學上，本品適用於大動物的不全栓塞性腸便秘、前胃弛緩、瘤胃不全麻痹、豬食道梗塞等。用1%~3%溶液滴眼，與擴瞳葯交替應用治療虹膜炎。 在人醫上，其吸收作用除用作抗膽鹼葯阿托品等中毒的搶救外，其它應用價值不大。臨床上主要局部用於治療青光眼。滴眼後易透過角膜進入眼房，作用迅速，10分鍾後出現作用，半小時達高峰。與毒扁豆鹼比較，毛果芸香鹼作用溫和而短暫，故用葯間隔時間宜短，水溶液比較穩定。吸收後的不良反應主要由其M膽鹼作用所致，可用阿托品對抗。 1，青光眼眼內壓增高是青光眼的主要特徵，可引起頭痛、視力減退等症狀，嚴重時可致失明。閉角型青光眼（急性或慢性充血性青光眼）患者前房角狹窄，眼內壓增高。毛果芸香鹼能使眼內壓迅速降低，從而緩解或消除青光眼症狀。 毛果芸香鹼也適用於開角青光眼（慢性單純性青光眼）的治療。這種青光眼無前房角狹窄和閉塞情況，而是由於小梁網本身及鞏膜靜脈竇發生變性或硬化，阻礙了房水循環，引起眼內壓升高。毛果芸香鹼可能的通過擴張鞏膜靜脈竇周圍的小血管以及收縮睫狀肌後，小梁網結構發生改變而使眼內壓下降。本葯口服可用於頸部放射後的口腔乾燥，但在增加唾液分泌的同時，汗液分泌也明顯增加。
編輯本段臨床研究
1.了解國產毛果芸香鹼治療精神葯物所致口乾的療效和不良反應。 方法： 精神葯物所致口乾75例， 前60例病人分為兩組， 每組男女病人各15例， 採用隨機雙盲對照方法分別給予毛果芸香鹼(2.5 mg/片)或外形相同的安慰劑(澱粉)2片， 口服tid， 連用28 d。 另15例病人同樣方法予毛果芸香鹼開放治療。 結果： 毛果芸香鹼總有效率為77.8%， 安慰劑組自然有效率為26.7%； 組間比較， P<0.01。 不良反應有竇緩， 出汗， 流淚和視物模糊。 結論： 本葯對精神葯物所致口乾安全有效。 2.研究1%毛果芸香鹼脂質體滴眼液對原發性閉角型青光眼的療效和不良反應. 方法:原發性閉角型青光眼60例60隻眼,其中對照組30例,30隻眼;試驗組30例,30隻眼.用葯前後,測量眼壓及瞳孔直徑,檢查房角以及視力、結膜、角膜、前房、虹膜、瞳孔、晶體、眼底,A型超聲測量前房深度、晶體厚度、眼軸,同時記錄患者的自覺症狀.1%毛果芸香鹼滴眼液(對照組):每次滴眼1滴,約50μL,1d 4次;1%毛果芸香鹼脂質體滴眼液(試驗組):每次滴眼1滴,約50μL,1d2次.結果 2組患者性別、年齡、用葯前眼壓、瞳孔直徑經統計學檢驗P>0.05,差異無顯著性.2組患者滴葯後各時間段的眼壓均下降與用葯前相比,差異有顯著性(配對t檢驗,P<0.05);滴葯後各時間段2組患者眼壓相比,試驗組眼壓下降明顯,差異有顯著性(獨立樣本t檢驗,P<0.05).2組患者滴葯後各時間段的瞳孔值與用葯前相比,瞳孔均有縮小,差異有顯著性(配對t檢驗,P<0.05)；滴葯後各時間段2組瞳孔值相比,試驗組瞳孔值小,差異有顯著性(獨立樣本t檢驗,P<0.05).每組用葯前後以及2組患者用葯前後前房深度、晶體厚度及眼軸長度,經統計學檢驗,無差異.脂質體組有7例發生滴葯後短暫的表面刺痛感,2組未發現其他眼部和全身的不良反應.結論: 毛果芸香鹼脂質體滴眼液應用於原發性閉角型青光眼的治療,能減少滴眼次數,有效地控制眼壓.

㈥ 組氨酸的測定方法

方法名稱： 組胺酸的測定—電位滴定法
應用范圍： 本方法採用滴定法測定組胺酸的含量。
本方法適用於組胺酸。
方法原理： 供試品加無水甲酸溶解，再加冰醋酸，照電位滴定法，用高氯酸滴定液滴定。讀出高氯酸滴定液使用量，計算組胺酸的量。
試劑： 1. 水（新沸放置至室溫）
2.高氯酸滴定液（0.1mol/L）
3. 無水甲酸
4. 冰醋酸
5. 醋酐
6.結晶紫指示液
7.基準鄰苯二甲酸氫鉀
儀器設備：
試樣制備： 1.高氯酸滴定液（0.1mol/L）
配製：取無水冰醋酸（按含水量計算，每1g水加醋酐5.22mL)750mL，加入高氯酸（70%-72%）8.5mL，搖勻，在室溫下緩緩滴加醋酐23mL，邊加邊搖，加完後再振搖均勻，放冷，加無水冰醋酸適量使成1000mL，搖勻，放置24小時。若所測供試品易乙醯化，則須用水份測定法測定本頁的含水量，再用水和醋酐調節至本液的含水量為0.01%-0.2%。
標定：取在105℃乾燥至恆重的基準鄰苯二甲酸氫鉀約0.16g，精密稱定，加無水冰醋酸20mL使溶解，加結晶紫指示液1滴，用本液緩緩滴定至藍色，並將滴定的結果用空白試驗校正。每1mL高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當於20.42mg的鄰苯二甲酸氫鉀。根據本液的消耗量與鄰苯二甲酸氫鉀的取用量，算出本液的濃度，即可。
貯藏：置棕色玻璃瓶中，密閉保存。
2.結晶紫指示液
取結晶紫0.5g，加冰醋酸100mL使溶解，即得。
操作步驟： 精密稱取供試品0.15g，加無水甲酸1002mL使溶解，加冰醋酸50mL，照電位滴定法用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，並將滴定的結果用空白試驗校正。記錄消耗氫氧化鈉滴定液的體積數（mL），每1mL高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當於15.52mg的組胺酸（C6H9N3O2）。
注1：「精密稱取」系指稱取重量應准確至所稱取重量的千分之一,「精密量取」系指量取體積的准確度應符合國家標准中對該體積移液管的精度要求。
參考文獻： 中華人民共和國葯典，國家葯典委員會編，化學工業出版社，2005年版，二部，p.370。

㈦ 組胺的組胺檢測

大量食物易殘留組胺類葯物，對人體有一定危害。目前對於普通政府質檢機構、獸葯監察所、商檢局等，以及食品企業：農畜產品加工出口企業、水產企業、蜂蜜企業等大眾基層實驗室，應用最多的是酶連免疫吸附試劑盒方法，即ELISA方法。
ELISA方法相比較於儀器檢測具有靈敏度高、檢測成本低、快速方便，可同時大批量篩選，操作簡單等優點，因此舉例： 1.1 儀器
(a)色譜管——200×7mm（內徑）聚丙烯管，配有Kontes No.K-422,372Kel-F卡套和約45cm聚四氟乙烯管，以調節與柱相連的出口管高度，控制流速大於3ml/min。或用二通閥 （生物實驗室產品）代替管子。
(b)熒光計——Perkin-Elmer型203或204,帶中壓汞燈。或帶有在350nm激發光和在444nm測量發射光的儀器。
(c)重換移液管——1和5ml。
1.2 試劑
(a)離子交換樹脂——Bio-Rad AG/-X8 50—100目。或Dowex 1-X8 50—100目，以約15ml 2M NaOH/g樹脂加入燒杯，使其轉變為—OH形式，旋搖混合，靜置30min。倒出液體並加鹼重復操作。用水洗透樹脂，糊狀物倒進折疊濾紙，再用水洗。每周制備新樹脂並浸在水中保存。
在管(a)底塞上玻璃棉，填入足以形成8cm樹脂床層的糊狀物，無論何時，都須使樹脂層上保留水層。再生樹脂，不在填充柱內進行，需要時，可在燒杯里分批再生，每次提取前，用約10ml水洗柱。
(b)磷酸——1.19M。稀釋121.8ml、85%的H3PO4至1L。如用其他濃度磷酸，配1L 1.19M的H3PO4所需體積V=17493/（密度H3PO4×%H3PO4)。標定；吸取5ml H3PO4,以酚酞為指示劑用1.00M NaOH滴定至終點。如需要，可調整濃度。
(c)鄰苯二甲酸二碳基乙醛(OPT)溶液——0.1%。100mg OPT溶於100ml、經玻璃容器蒸餾過的甲醇中，裝在棕色瓶中，於冰箱內貯存，每周新配。
(d)組胺標准溶液——冰箱里貯存。
⑴ 貯備液——1mg/ml。無鹼性。准確稱取約169.1mg組胺·2HCl(98%）於100ml容量瓶中，用0.1M HCl溶解並稀釋到刻度，每周新配。
⑵ 中間溶液——10μg/ml。吸取1ml貯備液放進100ml容量瓶，用0.1M HCl稀釋到刻度，每周新配。
⑶ 工作溶液——0.5,1.0和1.5μg/5m1。吸取1,2和3ml中間溶液，分別於100ml容量瓶中，各用0.1M HCl稀釋至刻度，每天新配。 （使用前，以HCl(1 3)和水洗滌全部塑料及玻璃容器）
2.1.標准曲線的繪制
吸取平行的各標准工作液5ml於50ml的玻璃或聚丙烯錐形瓶中，各瓶加10ml 0.1M的HCl並混勻。加入3ml 1M NaOH並混勻；在5min內，加入1ml OPT溶液並立即混合；准確於4min後，加入3ml 1.19M H3PO4並立即混勻。每次加液後，至少在OPT反應期間（順序加入試劑到一組錐型瓶里，可同時進行6—10個OPT反應），充分混勻是很重要。用5ml 0.1M HCl代替組胺溶液作為空白，在1.5h內，以水為參比記錄工作標准液的熒光強度(I)，用350nm吸收波長，和444nm發射波長，以(I)（經空白校正）對μg組胺/5ml試樣作圖。
2.2.測定
用甲醇萃取按17-28C,第一節中製得的樣品。用4—5ml水洗柱，(a)，棄流出液。吸1ml萃取液加進柱內並加4—5ml水。立即使柱流出液進入50ml、內含5.00ml 1.00M HCl的容量瓶中，當液面在樹脂上方約2mm處時，加入約5ml水洗脫，接著用大量水洗脫，直到約有35ml洗脫液為止。停止柱流，用水稀釋到瓶的刻度，塞上瓶蓋混勻，冷藏洗脫液。
吸5ml洗脫液於50ml錐型瓶中，吸取10ml 0.1M HC1加入，按C,自吸加3ml 1M NaOH開始進行。
如樣品含量大於15mg組胺/100g魚，吸取1ml樣品-OPT混合液於10ml、盛有準確2ml空白-OPT混合液的燒杯中，充分混勻。讀出新溶液的熒光強度，如想得到可測的讀數，就用空白-OPT的混合液稀釋試樣。這個近似值表明，為准確地定量樣品，進行第二次OPT反應前，要將洗脫液作適當稀釋。此外，調節熒光計的靈敏度范圍（如儀器有此裝置）來估計稀釋倍數。利用這些近似值，用0.1M HCl制備洗脫液的適當稀釋試樣。按C進行。
2.3.計算
繪制I對μg組胺/5ml溶液（用繞度（偏轉）計或記錄儀響應測量並經空白校正過的圖應是一條過原點的直線，斜率=m=[(Ia/1.5)十Ib十2Ic]/3mg組胺/100g魚=⑽(F)(1/m)(Is)
式中：Is、Ia、Ib、Ic分別為樣品、1.5、1.0和0.5mg組胺標準的熒光強度。F=稀釋倍數=ml洗脫液十ml 0.1M HCl/ml洗脫液，未稀釋的洗脫液F=1
如果校正圖形呈非線性，直接用標准曲線定量。橫坐標上每一分度應≤0.1μg組胺/5ml溶液，從曲線最靠近0.05μg組胺/5ml溶液處，讀出所有值。
mg組胺/100g魚=⑽(F)(W)
式中：W=μg組胺/100e魚（用標准曲線測得）

㈧ 怎麼檢查組胺和乙醯膽鹼值,

抽血。

㈨ 怎麼檢查組胺和乙醯膽鹼值;.

觀察急性DIC時血液學檢查結果的改變。...組胺加氨茶鹼、組胺加阿托品、乙醯膽鹼加阿托品、乙醯膽鹼加氨茶鹼對氣管片張...根據講義提供的實驗數據和計算方法,計算CCh的pD2值和atropine的pA2值;並畫出CCh的濃度-收縮效應曲線和Schild plot曲線...

㈩ 被動皮膚過敏反應是檢測什麼的方法

被動皮膚過敏反應亦稱RCA反應，是利用與同種或異種動物組織有結合性的抗體所引起的局部過敏反應，來檢驗抗體或抗原的高敏感度的方法。Prau－nitz－Kuestner反應就是利用人的抗體在正常人的皮內進行試驗的PCA反應的例子，但多數情況都是採用向豚鼠皮內注射其他動物或人的血清的方法。PCA的操作方法，一般是將血清注射於豚鼠皮內，經3～5小時後，有結合性的抗體便與組織的肥大細胞結合，而其他抗體則擴散掉。然後，向抗原液內混入伊文氏藍（Evans）等色素再注射到靜脈內，其抗原則在抗血清注射部位與附著在肥大細胞上的抗體起反應，於是組胺或其他葯物因子則游離出來而出現局部過敏反應。在該局部，由於血管透性升高，故含色素的血漿便滲漏到組織內，使皮膚出現藍斑。測定藍斑的直徑，可作為反應強度的指標，或者進行抗體稀釋試驗，用呈現陽性的最高稀釋度的倒數來作為抗體價。抗體一定時，用種種濃度的抗原液進行試驗，亦可進行抗原的定性和定量的測試。