賴氨酸檢測含量方法

㈠ 羥賴氨酸的檢查過程

取機體的樣本，經過一定的處理後，通過試劑或者儀器測得樣品中的羥賴氨酸的比例，從而得到人體羥賴氨酸的含量值。

㈡ 醋酸賴氨酸的含量測定

取本品約0.1g，精密稱定，加無水甲酸3ml溶解後，加冰醋酸30ml，照電位滴定法（附錄Ⅷ A），用高氨酸滴定液（0.1mol/L）滴定，並將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml高氨酸滴定液（0.1mol/L）相當於10.31mg的C6H14N2O2·C2H4O2。

㈢ 賴氨酸含氮量或者粗蛋白怎麼測要打官司

賴氨酸的含量為19.2%,折成粗蛋白質的含量應是120%,因系數6.25是按氨基酸的平均含氨量16%計算的,如是賴氨酸鹽酸鹽或硫酸鹽還得進行相應的換算

㈣ 測定蛋白質中氨基酸含量的主要步驟有哪些為什麼一般分析報告顯示17種氨基酸成分

一般來說人體必須的17種氨基酸，也較為重視

氨基酸的定性測定
一、氨基酸的一般顯色反應
本節介紹三種顯色反應：茚三酮法、吲哚醌法和鄰苯二甲醛法。前二種是經典的常用顯
色法，後一種是近年來發展起來的熒光顯色法，具有靈敏度高的特點。
1. 茚三酮法
顯色方法有下列數種：
①常用法：將點有樣品的層析或電泳完畢的濾紙充分除盡溶劑，用 5g/L 茚三酮無水丙
酮溶液噴霧，充分吹乾，置65℃烘箱中約30min（溫度不宜過高，避免空氣中氨，以免背
景泛紅色），氨基酸斑點呈紫紅色。
為了使各種氨基酸呈現不同顏色，可用下列方法：
②用 0.4g 茚三酮，10g 酚和90g 正丁醇的混合液顯色。
③用 1g/L 茚三酮無水丙酮溶液顯色完畢後，再用鹽酸蒸汽熏1min。
④用 1g 茚三酮，600mL 無水乙醇，200mL 冰醋酸及80mL2,4,6-三甲基吡啶混合液80
℃染色5～10min。
為了使顯色穩定，可用下列方法：
⑤配製含醋酸鎘 2g 加蒸餾水200mL 及冰醋酸40mL 的貯存液。將上述貯存液加200mL
丙酮及2g 茚三酮，即為顯色液。點有樣品的濾紙上浸有此顯色液後，放置於盛有一小杯濃
硫酸的密閉玻璃容器中，25℃，18h，或較高溫度下適當縮短時間。背景色淺，氨基酸斑點
也比較穩定。
⑥用含 2g/LCoCl2(或CuSO4)的4g/L 茚三酮異丙酮溶液顯色時，氨基酸斑點呈紅色，也
可在茚三酮顯色後噴以含鈷、鎘或銅等無機離子的異丙醇溶液，斑點自藍紫色變成紅色。
2．吲哚醌法
（1）原理
各種氨基酸與吲哚醌試劑能顯示不同顏色，因此可藉此辯認氨基酸。氨對吲哚醌顯色沒
有妨礙，但其靈敏度較茚三酮法稍差，顯色不穩定，顏色只有在絕對乾燥的環境中才能保存。
（2）試劑
①顯色劑：1g 吲哚醌溶於100mL 乙醇及10mL 冰醋酸中（若冰醋酸用量減少則靈敏度
稍差）。
②底色褪色劑：在 100mL 200g/L 碳酸鈉溶液中加入60g 硅酸鈉（Na2SiO3•9H2O）在水
浴（60～70℃）中加熱攪拌直至完全溶解，待溶液比較清澈為止。在溶解過程中，有時硅酸
鈉會結成凝膠，此時只需繼續攪拌即可溶解。配製時若硅酸鈉用量多則褪色較快，但背景容
易變黃，硅酸鈉用得少（40g），雖裉色較慢，但背景較為潔白。
顯色步驟
層析或電泳後濾紙烘乾後，仔細噴上或塗上顯色劑，用電吹風迅速吹乾，待醋酸氣味不
太刺鼻時移置100℃烘箱烘5～15min，直至顯色為止（溫度不要太高，以免引起減色）注
意觀察所顯出的顏色，然後均勻地塗上底色褪色劑，紙的背景即由黃色變為絳紅而後逐漸變
淺，待黃色背景幾乎褪盡時，迅速用電吹風吹乾，並隨時觀察顏色的變化。例如蘇氨酸在褪
色前為淺紅帶褐色，褪色後則呈橙黃色或黃色：脯氨酸在褪色前為藍色，吹乾時很快褪成無
色。室溫較低時，底色褪色很慢，此時可將褪色劑加溫到30～40℃。溫度過高也不宜，因
氨基酸斑點的褪色速度也同時加快，應該避免。
其他顯色步驟：顯色劑為 1g 吲哚醌，1.3g 醋酸鋅溶解於70～80mL 熱異丙醇中，冷卻
後加1mL 吡啶。或者1g 吲哚醌，1.5g 醋酸鋅溶解於95mL 熱異丙醇中，加3mL 水，冷卻
後加1mL 冰醋酸。點有樣品的濾紙仔細噴以顯色劑後，80～85℃放置10min，背景可用水
迅速浸洗去而不使氨基酸斑點退去
由於吲哚醌試劑配製方法不同，對同一種氨基酸所顯顏色往往也有差異。
3．鄰苯二甲醛法
鄰苯二甲醛法是目前紙上層析、硅膠薄層層析熒光顯色氨基酸最靈敏的方法之一，也可
用於氨基酸溶液定量，並推廣應用於乙內醯苯硫脲氨基酸、多肽和蛋白質的檢出和定量。根
據文獻報道，氨基酸紙上層析靈敏度達0.5μmoL，在硅膠薄層層析上為0.05～0.2μmoL。
這里介紹在紙上層析顯現氨基酸方法。（熒光胺是另一種常用的熒光試劑，由於熒光胺來源
比較困難，這里未作介紹）
（1）原理
鄰苯二甲醛在 2-巰基乙醇存在下，在鹼性溶液中與氨基酸作用產生熒光化合物，最適
的激發光和發射光波長分別為340nm 和455nm。
各種氨基酸顯現的熒光強度不同，其相對熒光強度由大到小大致順序如下：天門冬氨酸，
異亮氨酸，甲硫氨酸，精氨酸，組氨酸，亮氨酸，絲氨酸，纈氨酸，谷氨酸，蘇氨酸，甘氨
酸，色氨酸，丙氨酸，苯丙氨酸，賴氨酸，酪氨酸，NH3，脯氨酸和半胱氨酸。
（2）試劑
鄰苯二甲醛顯色液：取0.1g 鄰苯二甲醛，0.1mg 巰基乙醇，1mL 三乙胺，加丙酮+石油
醚（60℃～90℃）（1+1）的混合溶劑至100mL。放置0.5h 後使用。
顯色步驟
將含有氨基酸樣品的濾紙浸入鄰苯二甲醛顯色液中 1min，冷風吹乾，在溫度18℃以下，
濕度50%～90%之間顯色0.5h，於紫外燈下觀察熒光點。
說明
在濾紙上顯現氨基酸時，鄰苯二甲醛濃度以 0.1%為宜。顯色時必須有一定的濕度，以
便氨基酸溶解，提高分子碰撞機率，並使極性基團解離，促進反應趨於完全。濕度太低，顯
不出熒光。溫度對顯現的熒光延時有顯著影響，溫度高熒光延時短，溫度低熒光延時長。
二、個別氨基酸的顯色反應
利用個別氨基酸與某些試劑具有特殊的顯色反應定性氨基酸。可應用於紙層析和紙電
泳顯色，也可單獨應用。方法很多，僅將常用的方法介紹如下：
1．精氨酸的顯色——坂口（Sakaguchi）反應
(1)第一種方法
試劑：①5g 尿素溶解於100mL0.1g/Lα-萘酚乙醇中。使用前，每100mL 加約5g KOH。
②0.7mL 溴水溶解於100mL 5%NaOH 中。
顯色步驟：在點有樣品的濾紙上噴試劑①後，在空氣中吹幾分種，再噴試劑②。精氨
酸或含精氨酸的多肽顯紅色。此試劑對含精氨酸的蛋白質也適用。
(2)第二種方法：
試劑：①1g/L 8-羥基喹啉的丙酮溶液。②0.02mL 溴水溶解於100mL 0.5mol/LnaOH 溶
液中。
顯色步驟：將點有樣品的濾紙烘乾後，噴上試劑①，吹乾後，再噴試劑②。精氨酸或
其他胍類物質顯桔紅色。
2．胱氨酸和半胱氨酸的顯色
試劑：①1.5g 亞硝基鐵氰化鈉（Na2Fe(CN)5NO2•5H2O）溶於5mL 2mol/L H2SO 4 溶液
中，加95mL 甲醇。此時會有沉澱產生，可保存一個月以上。使用時在每100mL 上述溶液
中加10mL 28%氨水，過濾除去沉澱，清液僅能保持一天左右。②2g 氰化鈉溶於5mL 水中，
然後加95mL 甲醇。此時有沉澱產生，使用時只需搖勻即可。
顯色步驟：半胱氨酸的顯色：在濾紙上噴以試劑①的清液，5min 後半胱氨酸顯紅色。
胱氨酸的顯色：先將濾紙浸入試劑②，迅速取出，稍等片刻再噴試劑甲的清液，5min 後胱
氨酸顯紅色。也可以把試劑②配製的濃度增加一倍，在顯色前混和，再噴到濾紙上。
3．甘氨酸的顯色
試劑；0.1g 鄰苯二甲醛溶於100mL 77%乙醇中。
顯色步驟：點有樣品的濾紙噴上試劑，甘氨酸顯墨綠色，在汞燈（365nm）下顯巧克力
棕色。吲哚醌顯色後，再用此試劑仍有效。以甘氨酸為N 端的小肽也能顯色，但其N 端被
保護後，以及其他氨基酸均不顯色。
4．脯氨酸的顯色
試劑：1g 吲哚醌和1.5g 醋酸鋅，1mL 醋酸，5mL 蒸餾水混和，再加入95mL 異丙醇。
新鮮配製。
顯色步驟：層析濾紙除盡溶劑，噴上以上試劑，80℃～85℃烘箱內放置30min，脯氨酸
顯藍色，再以30℃溫水漂洗除去多餘的試劑後，背景為白色或淺黃色。
也可剪下脯氨酸斑點，在試管中加入5mL 水飽和酚，在黑暗中洗脫15min，間歇振搖，
於610nm 測定其吸光度。從已知標准曲線即可求得樣品內脯氨酸含量，測定范圍5～20μg。
5．絲氨酸和羥賴氨酸的顯色
試劑：①0.035mol/L 過碘酸鈉（748mgNaIO4 溶於數毫升甲醇中，加2 滴6mol/L 鹽酸，
再用甲醇稀釋至100mL）。②15g 醋酸銨加0.3mL 冰醋酸，加1mL 乙醯丙酮，用甲醇稀釋到
100mL。
顯色步驟：點有樣品的濾紙吹乾，先噴試劑①，近干後再噴試劑②，室溫放置 2h，紫
外燈下照射0.5h，絲氨酸和羥賴氨酸呈黃色斑點，在紫外線下都有熒光。
6．羥脯氨酸的顯色
試劑：①1g 吲哚醌溶於100mL 乙醇及10mL 冰醋酸。②1g 對二甲胺苯甲醛溶於100mL
的丙酮濃鹽酸（9＋1）混合液中。（此試劑不穩定，隔數日後溶液顏色增深發黑，靈敏度降
低，故用時新鮮少量配製。
顯色步驟：將待鑒定的溶液點於小方塊紙上，干後先點上試劑①，熱風吹乾。這時純
羥脯氨酸呈墨綠色，純脯氨酸呈深藍色（極靈敏），對其他氨基酸呈程度不同的紫紅色（不
太靈敏）；然後再點上試劑②吹乾，如溶液中含有羥脯氨酸即轉變為玫瑰紅色，而其他氨基
酸與吲哚醌所生成的顏色則褪去。
7．色氨酸的顯色
(1)第一種方法
試劑：1g 對二甲氨基苯甲醛加90mL 丙酮，10mL 濃鹽酸。新鮮配製。
顯色步驟：點有樣品的濾紙乾燥後，噴上以上試劑，在室溫下放置幾分鍾後，色氨酸
顯藍色或紫紅色。茚三酮顯色後，仍可使用本法。
(2)第二種方法：
試劑：10mL 35%甲醛加10mL25%鹽酸，20mL 無水乙醇。
顯色步驟：點有樣品的濾紙噴上以上試劑後，100℃烘5min，色氨酸在長波長紫外光下
呈現熒光（黃-橙-帶綠色）。
8．酪氨酸的顯色
試劑：①0.1%α-亞硝基β-萘酚的95%乙醇溶液。②10%硝酸水溶液。
顯色步驟：點有樣品的濾紙噴上試劑①後，吹乾，再噴試劑②，然後在100℃烘3min，
酪氨酸或含酪氨酸的多肽在淺灰綠色的背景上顯紅色，0.5h 後轉變為桔紅色，其後漸退去。
靈敏度1～2μg 酪氨酸。茚三酮顯色後，再用此試劑處理，仍能顯色，茚三酮所顯出的紫紅
色斑點變成紅色。
9．酪氨酸和組氨酸的顯色——pauly 反應
試劑：①4.5g 對氨基苯磺酸與45mL 12mol/L 鹽酸共熱溶解，以蒸餾水稀釋至500mL。
用時取出30mL，在0℃與等體積的5%亞硝酸鈉水溶液相混合。（室溫放置太長會失效）
②10%碳酸鈉水溶液。
顯色步驟：點有樣品的濾紙上噴試劑①，片刻後再噴試劑②。組氨酸及含組氨酸的多
肽顯桔紅色；酪氨酸及含酪氨酸的多肽顯淺紅色。
第六節 氨基酸定量測定
一、氨基酸的一般定量測定
（一）甲醛滴定法
1．原理
氨基酸具有酸性的-COOH 基和鹼性的-NH2 基。它們相互作用而使氨基酸成為中性的內
鹽。當加入甲醛溶液時，-NH2 基與甲醛結合，從而使其鹼性消失。這樣就可以用標准強鹼
溶液來滴定-COOH 基，並用間接的方法測定氨基酸總量。反應式（有三種不同的推論）如
下：
2．方法特點及應用
此法簡單易行、快速方便，與亞硝酸氮氣容量法分析結果相近。在發酵工業中常用此
法測定發酵液中氨基氮含量的變化，來了解可被微生物利用的氮源的量及利用情況，並以此
作為控制發酵生產的指標之一。脯氨酸與甲醛作用時產生不穩定的化合物，使結果偏低；酪
氨酸含有酚羧基，滴定時也會消耗一些鹼而致使結果偏高；溶液中若有銨存在也可與甲醛反
應，往往使結果偏高。
3．操作方法
吸取含氨基酸約 20mg 的樣品溶液於100mL 容量瓶中，加水至標線，混勻後吸取20.0mL
置於200mL 燒杯中，加水60mL，開動磁力攪拌器，用0.05mol/L 氫氧化鈉標准溶液滴定至
酸度計指示pH8.2，記錄消耗氫氧化鈉標准溶液mL 數，供計算總酸含量。
加入10.0mL 甲醛溶液，混勻。再用上述氫氧化鈉標准溶液繼續滴定至pH9.2，記錄消
耗氫氧化鈉標准溶液毫升數。
同時取 80mL 蒸餾水置於另一200mL 潔凈燒瓶中，先用氫氧化鈉標准溶液調至pH8．2，
（此時不計鹼消耗量），再加入10.0mL 中性甲醛溶液，用0.05mol/L 氫氧化鈉標准溶液滴定
至pH9.2，作為試劑空白試驗。
4．結果計算
氨基酸態氮質量分數（%）=
式中：V1——樣品稀釋液在加入甲醛後滴定至終點（pH9.2）所消耗氫氧化鈉標准溶液
的體積，mL；
V2——空白試驗加入甲醛後滴定至終點所消耗的氫氧化鈉標准溶液的體積，mL；
c——氫氧化鈉標准溶液的濃度，mol/L；
m——測定用樣品溶液相當於樣品的質量，g；
0.014——氮的毫摩爾質量，g/mmoL。
5．說明
①本法准確快速，可用於各類樣品游離氨基酸含量測定。②渾濁和色深樣液可不經處
理而直接測定。
(二)茚三酮比色法
1．原理
氨基酸在鹼性溶液中能與茚三酮作用，生成藍紫色化合物（除脯氨酸外均有此反應），
可用吸光光度法測定。
該藍紫色化合物的顏色深淺與氨基酸含量成正比，其最大吸收波長為 570nm，故據此
可以測定樣品中氨基酸含量。
2．操作方法
(1)標准曲線繪制
准確吸取 200μg /mL 的氨基酸標准溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL（相當於
0、100、200、300、400、500、600μg 氨基酸），分別置於25mL 容量瓶或比色管中，各加
水補充至容積為4.0mL，然後加入茚三酮溶液（20g/L）和磷酸鹽緩沖溶液（pH 為8.04）各
1mL，混合均勻，於水浴上加熱15min，取出迅速冷至室溫，加水至標線，搖勻。靜置15min
後，在570nm 波長下，以試劑空白為參比液測定其餘各溶液的吸光度A。以氨基酸的微克
數為橫坐標，吸光度A 為縱坐標，繪制標准曲線。
(2)樣品測定
吸取澄清的樣品溶液 1～4mL，按標准曲線製作步驟，在相同條件下測定吸光度A 值，
用測得的A 值在標准曲線上可查得對應的氨基酸微克數。
3．結果計算
氨基酸含量（mg/100g）=
式中：c——從標准曲線上查得的氨基酸的質量數，μg；
m——測定的樣品溶液相當於樣品的質量，g。
4．說明及注意事項
①通常採用的樣品處理方法為：准確稱取粉碎樣品 5～10g 或吸取樣液樣品5～10mL，
置於燒杯中，加入50mL 蒸餾水和5g 左右活性炭，加熱煮沸，過濾，用30～40mL 熱水洗
滌活性炭，收集濾液於100mL 容量瓶中，加水至標線，搖勻備測。
②茚三酮受陽光、空氣、溫度、濕度等影響而被氧化呈淡紅色或深紅色，使用前須進行
純化，具體操作可參閱黃偉坤等編著《食品檢驗與分析》。
(三)非水溶液滴定法
1．原理
氨基酸的非水溶液滴定法是氨基酸在冰醋酸中用高氯酸的標准溶液滴定其含量。根據酸
鹼的質子學說：一切能給出質子的物質為酸，能接受質子的物質為鹼；弱鹼在酸性溶劑中鹼
性顯得更強，而弱酸在鹼性溶劑中酸性顯得更強，因此本來在水溶液中不能滴定的弱鹼或弱
酸，如果選擇適當的溶劑使其強度增加，則可以順利地滴定。氨基酸有氨基和羧基，在水中
呈現中性，而在冰醋酸中就能接受質子顯示出鹼性，因此可以用高氯酸等強酸進行滴定。
本法適合於氨基酸成品的含量測定。允許測定的范圍是幾十毫克的氨基酸
2．測定
(1)直接法（適用於能溶解於冰醋酸的氨基酸）：精確稱取氨基酸樣品50mg 左右，溶解
於20mL 冰醋酸中，加2 滴甲基紫指示劑，用0.100mol/L 高氯酸標准液滴定（用10mL 體積
的微量滴定管），終點為紫色剛消失，呈現藍色。空白管為不含氨基酸的冰醋酸液，滴定至
同樣終點顏色。
(2)回滴法（適用於不易溶解於冰醋酸而能溶解於高氯酸的氨基酸）：精確稱取氨基酸樣
品30～40mg 左右，溶解於5mL0.1mol/L 高氯酸標准溶液中，加2 滴甲基紫指示劑，剩餘的
酸以醋酸鈉溶液滴定，顏色變化由黃，經過綠、藍至初次出現不褪的紫色為終點。
3．說明
(1)能溶解於冰醋酸的氨基酸，可以用直接法測定的有：丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、組
氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、纈氨酸、異亮氨酸和蘇氨酸。不易溶解於冰
醋酸，但能溶解於高氯酸可以回滴法測定的有：賴氨酸、絲氨酸、胱氨酸和半胱氨酸。
(2)谷氨酸和天冬氨酸在高氯酸溶液中也不能溶解，可以將樣品溶解於2mL 甲酸中，再
加20mL 冰醋酸，直接用標準的高氯酸溶液滴定。
(四)鄰苯二甲醛法(OPT 法)
1．原理
鄰苯二甲醛在 2-巰基乙醇存在下，於鹼性溶液中與氨基酸作用產生熒光化合物，最適
的激發光和發射光波長分別為340 和455nm。可能產物為：
各種氨基酸顯現的熒光強度不同，其相對熒光強度由大到小大致順序如下：天門冬氨酸，
異亮氨酸，甲硫氨酸，精氨酸，組氨酸，亮氨酸，絲氨酸，纈氨酸，谷氨酸，蘇氨酸，甘氨
酸，色氨酸，丙氨酸，苯丙氨酸，賴氨酸，酪氨酸，NH3，脯氨酸，和半胱氨酸。
本法可用於測定游離氨基酸的含量。靈敏度較茚三酮法約高 100 倍以上，可測到0.1～
1×10－4mol 氨基酸。如用於血清中α-氨基氮的測定，每次血清用量只需5～10μL。與另一
種熒光試劑（螢光胺）一樣，空白無熒光，只有與氨基酸結合才產生熒光。缺點是與脯氨酸
不產生熒光，鄰苯二甲醛與半胱氨酸熒光值太低。熒光胺已有用於氨基酸自動分析定量分析，
但由於試劑昂貴及個別氨基酸反應不滿意，目前還未普遍應用。
(五)三硝基苯磺酸法
三硝基苯磺酸（TNBS）是定量測定氨基酸的重要試劑之一。TNBS 在偏鹼性的條件下
與氨基酸反應，先形成中間絡合物，如下式所示：
中間絡合物在光譜上有二個吸收值相近的高峰，分別位於355nm 和420nm 附近。然
而溶液一旦酸化，中間絡合物轉化成三硝基苯-氨基酸（TNP-氨基酸），420nm 處的吸收值
顯著下降，而350nm 附近的吸收峰則移至340nm 處。
利用 TNBS 與氨基酸反應的這一特性，可在420nm 處（偏鹼性溶液中）或在340nm
（偏酸性溶液中）對氨基酸進行定量測定。下表列出各種氨基酸與TNBS 反應後在不同條
件下測定的吸光度。在340nm 處，各氨基酸的吸收度大致相近，而在420nm 處的吸光度
因氨基酸種類而異；在加入適量SO3
2－時，吸收值升高。
本法允許的測定范圍是 0.05～0.4μmol 氨基酸。
表 10-3 各種氨基酸與TNBS 反應後在不同條件下測定的吸光度
氨基酸種類 鹼性溶液① 酸性溶液加 SO3
①取不同含量氨基酸液1mL，加4%NaHCO3 1mL，0.1%TNBS 1mL，於40℃反應2h，用水補充至4mL，
在420nm 處測定。製作氨基酸濃度—吸光度坐標圖，從曲線中求得各氨基酸於1μmol 時的吸光度。
②條件同上，但在與TNBS 反應時加0.01mol/L Na2SO3 1mL，最後總體積也是4mL，同樣在420nm 處
測定。
③條件同①，但與 TNBS 反應後加1mol/L HCl 1mL 酸化，在340nm 處測定。
(六)乙醯丙酮和甲醛熒光法
1．原理
氨基酸與乙醯丙酮和甲醛反應，生成 N-取代基2,6-二甲基-3,5-二乙醯基1,4-二氫吡啶，
產生黃-綠色熒光，可用熒光分析法檢測。主要反應如下：
乙醯丙酮 甲醛 氨基酸 熒光物質
2．試劑
混合試劑：取1mol/L 乙酸鈉溶液10mL，加入乙醯丙酮溶液0.4mL 和30%甲醛溶液1mL，
用水稀釋至30mL。
3．測定
取氨基酸液 1mL，加入混合試劑1mL，用棉花塞滿試管口，避光於100℃下加熱10min，
冷卻，加水2mL，然後測定熒光值。
表 10-4 各種氨基酸的發射波長和檢測范圍
化合物（激發波長405nm） 發射波長（nm） 檢測范圍（mg/L）
甘氨酸 485 2～10
苯丙氨酸 490 8～40
絲氨酸 485 5～25
半胱氨酸（鹽酸鹽） 500 20～100
谷氨酸 485 20～100
與標准相比較求出樣品中的氨基酸含量。
二、個別氨基酸的定量測定
（一）賴氨酸的測定
1．原理
用銅離子阻礙游離氨基酸的α-氨基,使賴氨酸的ε-氨基可以自由地與1-氟-2,4 二硝基
苯(FDNB)反應,生成ε-DNP-賴氨酸。經酸化和用二乙基醚提取,在波長390nm 處有吸收峰,
從而求出樣品中游離賴氨酸的含量.
2．試劑
(1)氯化銅液：稱28.0g 無水氯化銅，用水稀釋至1000mL。
(2)磷酸三鈉溶液：稱68.5g 無水磷酸鈉,用水稀釋至1000mL。
(3)硼酸鹽緩沖液（pH9.1～9.2）：稱54.64g 帶有10 結晶水的四硼酸鈉，用水稀釋至
1000mL 。
(4)磷酸銅懸浮液：攪拌情況下，把氯化銅液200mL，緩慢倒入400 mL 的磷酸三鈉溶液
中，把懸浮液以2000r/min 速度離心5min ，用硼酸鹽緩沖液再懸浮沉澱物，洗滌離心3 次，
把最後的沉澱物懸浮在硼酸鹽緩沖液中，並用緩沖液稀釋至1L。
(5)1-氟-2，4 二硝基苯(FDNB)溶液：吸取FDNB10mL 用甲醇稀釋至100mL。
(6)賴氨酸-HCl 標准溶液：稱取一定量賴氨酸-HCl，用水配成200mg/L 的工作標准液。
(7)100g/L 丙氨酸溶液。
3．測定
(1)稱取通過40 目篩的均勻試樣1.00g，置於100mL 燒瓶中。另吸取賴氨酸-HCl 標准工
作液5mL（相當1mg 賴氨酸-HCl），連同試劑空白同時進行試驗。
(2)向各燒瓶中加入25mL 磷酸銅懸浮液，然後再加10%丙氨酸1.0mL,振搖15min。吸
取10%FDNB 溶液0.5mL.置於各處理燒瓶中,將燒瓶置沸水中加熱15min。
(3)取出燒瓶,立即加入1mol/LHCl 溶液25mL,並不斷搖動使之酸化和分散均勻。
(4)燒瓶中的溶液冷卻至室溫,用水稀釋至100mL.取約40mL 懸浮液進行離心。
(5)用25mL 二乙基醚提取上清液3 次，除去醚。並將溶液收集於有刻度試管中,於65℃
水浴中加熱15min，以除去殘留的醚。並記錄溶液的毫升數。
(6)吸取上述各處理液10mL，分別與95%乙醇溶液10mL 混合，用濾紙過濾。
(7)用試劑空白液凋零，測定樣液A390nm，與賴氨酸-HCl 標准液對照，求出樣品中賴氨
酸-HCl 的含量。
本法在 0～40mg/L 賴氨酸溶液范圍內呈良好線性關系。
4．說明
(1)添加一定量的中性氨基酸如丙氨酸，增加總氨基酸的濃度，有助於賴氨酸-HCl 濃度
具有良好的線性關系。
(2)用醚提取酸性溶液，可將所有中性或酸性的DNP-氨基酸衍生物除去，並把FDWB
的產物破壞，否則這些產物在390nm 處存在干擾。
（二）色氨酸的測定
1.原理
樣品中的蛋白質經鹼水解後，游離的色氨酸與甲醛和含鐵離子的三氯乙酸溶液作用，生
成哈爾滿化合物（norharman），具有特徵熒光值，可以進行定量測定。
2．試劑
(1)0.3mmol/L 三氯化鐵-三氯乙酸溶液：稱取三氯化鐵(FeCl3•6H2O)41mg，加入10%三
氯乙酸溶液溶解並定溶至500mL。
(2)2%甲醛：量取甲醛溶液(36%～38%)5.5mL，加水至100mL。
(3)色氨酸標准溶液：稱取10mg 色氨酸，用0.1mol/LNaOH 溶液溶解並定容至100mL,
置棕色瓶中備用,使用時用水稀釋成1mg/L 的標准溶液.
3．測定
稱取樣品粉末 100～200mg 於離心管中，加入4mL 乙醚,搖勻後過夜，以3000r/min 速
度離心。將乙醚提取液移入試管內,並用乙醚洗滌殘渣3 次，收集乙醚液於試管中，於40℃
水浴除去醚。殘留物中加入6.25mol/L N aOH 4mL，火焰封口，於110℃水解16～24h。水
解液用4mol/L HCl 溶液調節至pH6～8 後,用水定容至50mL,過濾備用。
吸取濾液 0.2mL，加入2%甲醛0.2mL 和0.3mmol/L 三氯化鐵-三氯乙酸混合液2mL，
搖勻後於100℃水浴中加熱1h，取出，冷卻後用水定容至10mL。在激發波長為365nm，發
射波長449nm 條件下，測定樣品的熒光強度，與色氨酸標樣作對照，求出樣品中色氨酸含
量。
本法在 0～10mg/L 色氨酸溶液范圍內呈良好線性關系。

㈤ 誰知道賴氨酸鹽酸鹽的檢測原理啊

名稱：L-賴氨酸鹽酸鹽
產品含量：99%
CAS 編號： 657-27-2
質量標准：食品級
包裝規格：25KG/紙板桶
中文產品名稱：L-賴氨酸鹽酸鹽
英文產品名稱：L-Lysine monohydrochloride
化學分子式：C6H14N2O2·HCL
化學名稱：
特性與用途：白色或近白色自由流動性的結晶性粉末。幾乎無臭。263~264℃熔化並分解。通常較穩定，高濕度60%以下穩定，60%以上則生成二水合物。與維生素C和維生素K3共存則易著色。鹼性條件及直接與還原糖存在下加熱則分解。易溶於水（40g/ml,35℃），水溶液呈中性至微酸性，與磷酸、鹽酸、氫氧化鈉、離子交換樹脂等一起加熱，起外消旋作用。賴氨酸為必需氨基酸，無法在體內合成，如缺乏則引起蛋白質代謝障礙及功能障礙，導致生長障礙、發育不全、體重下降、食慾不振、血中蛋白減少等。D-型賴氨酸無生理效果。
質量標准：GB 10794--89，強制性國際
項目 質檢標准
含量（以干基計） ≥98.0%
重金屬（Pb計） ≤0.001%
透光度（E10%1cm：400nm） ≥95%
乾燥失重（105℃，3h) ≤1.0%
砷（以As計，GT-3） ≤0.0001%
灼燒殘渣 ≤0.2%
比旋光度[α]25D 19.0°~ +21.5°
PH（10%水溶液） 5.0~ 6.0
功用：營養增補劑。用於強化食品中的賴氨酸。黑麥、米、玉米、花生粉等所含賴氨酸為限制氨基酸，小麥、芝麻、燕麥等所含賴氨酸為第一限制氨基酸。尚可用於蛋黃醬、牛乳、方便麵食品等。亦可用作調味料，以改善風味。
推薦使用量及注意事項：
成人每日最小需要量（以L-賴氨酸計）：男性約0.8g，女性約0.4g，青年12~32mg/kg，幼兒180mg/kg(1g 賴氨酸相當於 L-賴氨酸鹽酸鹽1.25g)
毒性：可安全用於食品中
包裝與運輸:
包裝：本品採用雙層包裝：內層用食用聚乙烯塑料袋密封，外用紙板箱包裝。每箱凈含量為25kg,還可根據用戶需要包裝。
運輸：應輕裝輕卸。防止日曬、雨淋，不能與有毒、有害物品混運、本品為非危險品，可按一般化學品運輸。
貯存: 應貯存在乾燥清潔避光的環境中，嚴禁與有毒物質混放，以免污染。保質期為兩年。

㈥ 飼料中賴氨酸含量是怎麼鑒定的

蘇氨酸是由W．C．Rose 1935年從纖維蛋白水解產物中分離和鑒定出來的，現已證明是最後被發現的必需氨基酸，它是畜禽的第二或第三限制性氨基酸，它在動物體內具有極其重要的生理作用。如促進生長、提高免疫機能等；平衡日糧氨基酸，使氨基酸比例更接近於理想蛋白質，從而降低畜禽對飼料中蛋白含量的要求。缺乏蘇氨酸，可導致動物採食量降低、生長受阻、飼料利用率下降、免疫機能抑制等症狀。近年來，賴氨酸、蛋氨酸合成品在飼料中得到了廣泛應用，蘇氨酸逐漸成為影響動物生產性能的限制性因素，對蘇氨酸的進一步研究，有助於有效地指導畜禽生產。 1、蘇氨酸的理化性質 蘇氨酸的化學名稱為α-氨基-β-羥丁酸，因其結構類似於蘇糖，故命名為蘇氨酸，是最後發現的必需氨基酸。其分子式為C4H9NO3，結構式為CH3-CH(OH)-CH(NH2)-COOH，相對分子質量為119.18。從結構式可以看出，蘇氨酸分子中具有2個不對稱碳原子，有4種異構體，其中D-蘇氨酸不能被動物吸收利用。天然存在的 L-蘇氨酸為無色或微黃色晶體，無臭、微甜，可溶於水，20 ℃時溶解度為9 g/100 mL，難溶於有機溶劑，熔點為253～257℃；D-蘇氨酸為斜方晶，是無色或白色結晶粉末，溶於水，不溶於有機溶劑，易被鹼破壞，熔點229 ℃～230 ℃。 蘇氨酸是唯一不經過脫氨基和轉氨基作用而是通過蘇氨酸脫水酶和蘇氨酸脫氫酶以及蘇氨酸醛縮酶催化轉變為其他物質。蘇氨酸除了可以平衡體內的氨基酸之外，還可以作為一碳單位來源，參與嘌呤和嘧啶的生物合成以及S-腺苷甲硫氨酸的生物合成、並可作為各種化合物甲基化的供體。2、蘇氨酸在養豬生產中的作用 2.1 平衡氨基酸，促進體內蛋白的合成，降低日糧蛋白水平 蘇氨酸的一個重要作用是平衡氨基酸，促進蛋白質合成。日糧中不同的氨基酸水平及比例會影響動物體內氮的利用。添加蘇氨酸可平衡整體氨基酸水平，使蘇氨酸與賴氨酸保持適當的比例對生產性能的影響尤為明顯，馮傑、許梓榮(2003)研究表明，賴氨酸和蘇氨酸的比值為0.72時效果最好

㈦ 我要測定大米中賴氨酸和蘇氨酸的含量，求完整國標方法。謝謝了。

大米氨基酸含量:單位（mg/100g大米）
異亮氨酸 278
亮氨酸 549
賴氨酸 239
蛋氨酸 181
胱氨酸 166
苯丙氨酸357
酪氨酸 307
蘇氨酸 241
色氨酸 128
纈氨酸 394
精氨酸 581
組氨酸 141
丙氨酸 388
天冬氨酸 587
谷氨酸 1219
甘氨酸 303
脯氨酸 272
絲氨酸 338
大米的蛋白質含量可以按8g蛋白質/100g大米來算，也就是說上面的數字除以8就是你要的數據。

㈧ 為什麼用亮氨酸來測賴氨酸的含量（用茚三酮法）為什麼做前還要進行脫脂處理

因為亮氨酸與賴氨酸碳原子數相同，只含有一個α氨基，相當於賴氨酸殘基中的氨基

㈨ 用電位滴定法測定鹽酸賴氨酸的含量時，所用的電極是什麼

電位滴定法與永停滴定法
附錄Ⅶ A 電位滴定法與永停滴定法

電位滴定法與永停滴定法是容量分析中用以確定終點或選擇核對指示劑變色域的方
法。選用適當的電極系統可以作氧化還原法、中和法（水溶液或非水溶液）、沉澱法、
重氮化法或水分測定法等的終點指示。
電位滴定法選用2支不同的電極。1支為指示電極，其電極電勢隨溶液中被分析成分
的離子濃度的變化而變化；另1支為參比電極,其電極電勢固定不變。在到達滴定終點時,
因被分析成分的離子濃度急劇變化而引起指示電極的電勢突減或突增，此轉折點稱為突
躍點。
永停滴定法採用2支相同的鉑電極,當在電極間加一低電壓(例如50mV)時，若電極在
溶液中極化，則在未到滴定終點前，僅有很小或無電流通過；但當到達終點時，滴定液
略有過剩，使電極去極化，溶液中即有電流通過，電流計指針突然偏轉，不再回復。反
之，若電極由去極化變為極化，則電流計指針從有偏轉回到零點，也不再變動。
儀器裝置 電位滴定可用電位滴定儀、酸度計或電位差計，永停滴定可用永停滴定
儀或按圖示裝置。
電流計的靈敏度除另有規定外,測定水分時用10<-6>A/格,重氮化法用10<-9>A/格。
所用電極可按下表選擇。
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方 法 │ 電 極 系 統 │ 說 明
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水溶液氧化還原法│ 鉑－飽和甘汞 │鉑電極用加有少量三氯化鐵的硝
│ │酸或用鉻酸清潔液浸洗
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水溶液中和法 │玻璃-飽和甘汞 │
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非水溶液中和法 │玻璃-飽和甘汞 │飽和甘汞電極套管內裝氯化鉀的
│ │飽和無水甲醇溶液。玻璃電極用
│ │過後應即清洗並浸在水中保存
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水溶液銀量法 │ 銀-玻璃 │銀電極可用稀硝酸迅速浸洗
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│銀-硝酸鉀鹽橋-飽和甘│
│汞 │
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-C≡CH中氫置換法│玻璃-硝酸鉀鹽橋-飽和│
│甘汞 │
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硝酸汞電位滴定法│鉑－汞－硫酸亞汞 │鉑電極可用10％(g／ml)硫代硫酸
│ │鈉溶液浸泡後用水清洗。汞－硫
│ │酸亞汞電極可用稀硝酸浸泡後用
│ │水清洗。
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永停法 │鉑－鉑 │鉑電極用加有少量三氯化鐵的硝
│ │酸或用鉻酸清潔液浸洗
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滴定法 (1)電位滴定法 將盛有供試品溶液的燒杯置電磁攪拌器上，浸入電極，
攪拌，並自滴定管中分次滴加滴定液；開始時可每次加入較多的量，攪拌，記錄電位；
至將近終點前，則應每次加入少量，攪拌，記錄電位；至突躍點已過，仍應繼續滴加幾
次滴定液，並記錄電位。
滴定終點的確定 用坐標紙以電位（E）為縱坐標，以滴定液體積（V）為橫坐標，
繪制E－V曲線，以此曲線的陡然上升或下降部分的中心為滴定終點。或以△E／△V（即
相鄰兩次的電位差和加入滴定液的體積差之比）為縱坐標，以滴定液體積(V)為橫坐標,
繪制（△E／△V）-V曲線，與△E／△V的極大值對應的體積即為滴定終點。也可採用二
階導數確定終點。根據求得的△E／△V值，計算相鄰數值間的差值，即為△<2>E／△V<
2>，繪制（△<2>E／△V<2>）－V曲線，曲線過零時的體積即為滴定終點。
如系供指示劑變色域的選擇核對，滴定前加入指示劑，觀察終點前至終點後的顏色
變化，以選定該品種終點時的指示劑顏色。
(2)永停滴定法 用作重氮化法的終點指示時,調節R<[1]>使加於電極上的電壓約為
50mV。取供試品適量，精密稱定，置燒杯中，除另有規定外，可加水40ml與鹽酸溶液(1
→2)15ml，而後置電磁攪拌器上，攪拌使溶解，再加溴化鉀2g，插入鉑－鉑電極後，將
滴定管的尖端插入液面下約2/3處,用亞硝酸鈉滴定液(0.1mol/L或0.05mol/L)迅速滴定,
隨滴隨攪拌，至近終點時，將滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液並入溶
液中，繼續緩緩滴定，至電流計指針突然偏轉，並不再回復，即為滴定終點。
用作水分測定的終點指示時，可調節R<[1]>使電流計的初始電流為5～10μA，待滴
定到電流突增至50～150μA，並持續數分鍾不退回，即為滴定終點。


㈩ 測定賴氨酸含量為什麼用亮氨酸做標准曲線

因為亮氨酸與賴氨酸碳原子數相同，只含有一個α氨基，相當於賴氨酸殘基中的氨基。

賴氨酸是各種穀物、食品中重要營養成分之一，是人體需要的8種必需氨基酸中最重要的一種，所以，也是衡量食品質量及改良穀物品種的主要指標之一。

小麥中含有各種必需氨基酸，但由於小麥中賴氨酸、蘇氨酸和異亮氨酸含量較低，導致氨基酸組成不平衡，它們為小麥的限制性氨基酸。因此，培育高賴氨酸含量的小麥品種，提高小麥的營養價值，具有十分重要的意義，在這項工作中，賴氨酸含量測定的方法的選擇就變得尤為重要。

(10)賴氨酸檢測含量方法擴展閱讀：

賴氨酸只有L-型被生物體吸收。游離的賴氨酸易吸收空氣中的二氧化碳，製取結晶比較困難，一般商品都以賴氨酸鹽酸鹽的形式存在。賴氨酸易溶於水，與其它氨基酸相比，賴氨酸是通過口服最容易吸收的一種。攝入體內的賴氨酸，首先以主動轉運的方式從小腸腔進入小腸粘膜細胞，然後通過門靜脈進入肝臟；在肝臟，賴氨酸與其它氨基酸一起參與蛋白質的合成。

賴氨酸不參與轉氨基作用，且脫氨基反應不可逆，因此賴氨酸的分解代謝極為特殊。賴氨酸是生糖兼生酮氨基酸，因此可以參與形成D-葡萄糖、糖原、脂類，最終產生能量。