① 香菇呼吸作用相關的酶有哪些，以及測定酶活的方法有哪些
酶是植物體內普遍存在的、活性較高的一種酶,它與呼吸作用、光合作用及生長素的氧化等都有密切關系,在植物生長發育過程中,它的活性不斷發生變化,因此測量這種酶,可以反映某一時期植物體內代謝的變化.
一、原理
在有過氧化氫存在下,過氧化物酶能使愈創木酚氧化,生成茶褐色物質,該物質在 470 nm 處有最大吸收,可用分光光度計測量 470 nm 的吸光度變化測定過氧化物酶活性.
二、實驗材料、試劑與儀器設備
（一）實驗材料
馬鈴薯塊莖.
（二）試劑
1 ． 100 mmol ／ L 磷酸緩沖液 pH6.0 （見附錄）.
2 ．反應混合液：100 mmol ／ L 磷酸緩沖液（ pH6.0 ） 50 mL 於燒杯中,加入愈創木酚 28 μl ,於磁力攪拌器上加熱攪拌,直至愈創木酚溶解,待溶液冷卻後,加入 30 % 過氧化氫 19 μl ,混合均勻,保存於冰箱中.
（三）儀器設備
分光光度計,研缽,恆溫水浴鍋,100 mL 容量瓶,吸管,離心機.
三、實驗步驟
1 ．稱取植物材料 1 g ,剪碎,放入研缽中,加適量的磷酸緩沖液研磨成勻漿,以 4000 r ／ min 離心 15 min ,上清液轉入 100 mL 容量瓶中,殘渣再用 5 mL 磷酸緩沖液提取一次,上清液並入容量瓶中,定容至刻度,貯於低溫下備用.
2 ．取光徑 1 cm 比色杯 2 只,於 1 只中加入反應混合液 3 mL 和磷酸緩沖液 1mL ,作為對照,另 1 只中加入反應混合液 3 mL 和上述酶液 1mL （如酶活性過高可稀釋之）,立即開啟秒錶記錄時間,於分光光度計上測量波長 470 nm 下吸光度值,每隔 1min 讀數一次.
四、結果計算
以每分鍾吸光度變化值表示酶活性大小,即以 ΔA 470 /[min • g （鮮重） ] 表示之.也可以用每 min 內 A 470 變化 0.01 為 1 個過氧化物酶活性單位（ u ）表示.
過氧化物酶活性 [u/ （ g • min ） ]=
式中：Δ A 470 ——反應時間內吸光度的變化.W ——植物鮮重,g .
V T ——提取酶液總體積,mL .
V s ——測定時取用酶液體積 ,mL .
t ——反應時間,min .
② 求教植物葉片POD酶活性的大致范圍
求教植物葉片POD酶活性的大致范圍
酶活性測定的原理：
超氧物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）
活性的測定 SOD採用氮藍四唑（nitro-blue tetrazolium，NBT）法（Beauchamp和Fridovich，1971）。反應步驟為：取200μl粗提液，加入3.7 ml NBT反應液50mmol/LpH7.8的磷酸緩沖液（PBS）配製的含77.12μmol/L氮藍四唑, 100μmol/LEDTA－Na2和13.37mmol/L甲硫氨酸溶液〕，在30℃下保溫2分鍾後加入100μl核黃素溶液（pH7.8的50mmol/L磷酸緩沖液中含80.2μmol/L 核黃素和100μmol/LEDTA－Na2），在4000Lx日光下反應20min。然後迅速測定A560。以不照光的管做空白。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μL。酶活性按以下公式計算：以抑制NBT光化還原的50％為一個SOD活性單位，結果以U/mg蛋白表示。以加緩沖液代替酶液的作為對照。
SOD總活性＝(Ack－AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt) 式中， Ack為照光對照管的吸光度；AE為樣品管的吸光度；V為樣品液總體積（ml）；Vt為測定時樣品用量（ml）；W為樣品鮮重（g）或蛋白質含量（mg）。
過氧化氫酶（Catalase，CAT）
活性測定 CAT 活性參照Aebi (1984)[7]的方法進行測定。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μL 。400 μL反應液含50 mmol/L的PBS (pH 7.0)，30 mmol/L的H2O2和50 µL粗酶液。反應從加入過氧化氫開始計時，連續測定在240 nm吸光度的降低值。酶活性定義為：一個過氧化氫酶單位相當於在規定條件下於溫度25℃，pH7.0條件下1分鍾分解1μmol過氧化氫所需酶量，結果以U/mg蛋白或U/g鮮重表示。
多酚氧化酶（Polyphenoloxidase，PPO）
活性的測定 PPO活性測定採用鄰苯二酚法（Aquino-Bolaños和Mercado-Silva，2004）。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μL。350µL反應液（用50mmol/L，pH6.4的PBS配製，內含100µmol/L鄰苯二酚）中加入50 µL的粗酶液，平衡1分鍾後連續測定398nm吸光度的變化。以1分鍾內398nm吸光度上升0.01為一個酶活性單位，結果以U/mg蛋白或U/g鮮重表示。
過氧化物酶（Peroxidase，POD）
活性測定POD活性測定採用愈創木酚法（Lurie等，1997)。用酶標儀進行測定時按比例調整為總反應體積為400μL。反應體系為30μL粗酶液，290 µL 0.3%愈創木酚（用50 mmol/L的PBS配製，pH 6.4）和 80µL0.3%H2O2（用50 mmol/L的PBS配製，pH 6.4）。反應在加入H2O2 後開始准確記時。連續吸光度在470 nm的上升值。酶活性以每分鍾上升0.01為一個單位，結果以U/mg蛋白或U/g鮮重表示。
③ SOD酶的活力的測定
SOD酶的活力的測定方法如下：
1.直接法 原理是根據O2 或產生O2 的物質本身的性質測定O2 的歧化量，從而確定SOD的活性。經典的直接法包括：脈沖輻射分解法、電子順磁共振波法（EPR）、核磁共振法。由於所需的儀器設備價格昂貴，一般較少應用。
2.一般化學法 這些方法的共同特點是要有一個O2 的產生體系和一個被O2 還原或氧化的可檢測體系。在SOD存在下，一部分O2 被SOD歧化，因而O2 還原或氧化檢測體系的反應受到抑制。根據反應受抑製程度，測定SOD的活性。一般化學法有鄰苯三酚自氧化法、細胞色素C還原法、羥胺法、黃嘌呤氧化酶-NBT法、腎上腺素法、沒食子酸法、6-羥多巴胺法、亞硝酸鹽形成法和鹼性二甲亞碸法。
④ sod酶活性測定方法
1、測定方法很多，常見的有化學法、免疫法和等電點聚焦法。其中化學法應用最普遍，化學法的原理主要是利用有些化合物在自氧化過程中會產生有色中間物和O2 -，利用SOD分解而間接推算酶活力。
2、在化學方法中，最常用的有黃嘌呤氧化酶法，鄰苯三酚法，化學發光法，腎上腺素法，NBT-還原法，光化學擴增法，Cyte還原法等。
（1）改良的鄰苯三酚自氧化法簡單易行較為實用。
（2）化學發光法和光化學擴增法不適用於測定Mn-SOD，但對於Cu/Zn-SOD反應極靈敏。（3）Cyte還原法用於Mn-SOD活力測定結果穩定，重復性好。但專一性和靈敏度不夠理想，而且需要特殊儀器，實際應用受到限制。
（4）亞硝酸鹽形成法與CN—抑制劑或SDS處理相結合，應用於Mn-SOD測定，靈敏度比Cyte還原法提高數倍，而且專一性強，重復性好，操作方便，不需要特殊儀器和設備，易於實際應用和推廣，是目前較好的測定方法之一。
⑤ 植物NiR（亞硝酸還原酶）酶活性測定，急急急！！！不勝感激！
可採用「微量擴散比色法測定植物體內硝酸還原酶與亞硝酸還原酶的活性」方法來測定，原理為：植物體內硝酸還原酶(NR) 和亞硝酸還原酶(NiR)活性的測定一般是根據底物的減少來衡量的。本方法則是根據酶促反應的最終產物(氨)的釋放來衡量的,能較真實地反映酶活性的大小。測定時,可通過外源基質的選擇來衡量硝酸還原酶或亞硝酸還原酶的活性。
⑥ 測植物某種酶活性，得到3分鍾內的酶活力變化曲線，如何計算酶活性
你應該先用標准品建立一條標准曲線的。縱坐標是吸光值，橫坐標是酶的活力。然後計算出標准曲線的回歸方程，再測樣品的吸光值，在曲線上查找酶活力。
不管怎麼說，都需要先建立一個標准。或者有一個對照。
已知濃度的酯酶，梯度稀釋成不同的濃度，分別測OD值。然然後繪制標准曲線。R2控制在0.990-0.999之間。得出標准曲線。
⑦ 過氧化氫酶活性的測定 高錳酸鉀滴定法 紫外分光光度法各有什麼優缺點
過氧化氫酶活性測定，是根據過氧化氫酶（PHD）能催化過氧化氫生成氧的特性，常用碘量法和電極法。
前者通過測定PHD催化H2O2反應後剩餘的H2O2與碘化物作用生成碘量的變化計算PHD活性。該法設備簡易，但操作復雜，誤差較大。後者的原理是H2O2為有電活性物質，但經PHD催化後其產物為無電活性物質，用鉑電極來測量PHD催化前後電流變化引起電壓的變化，測出PHD活性大小。還可應用分光光度法、瓦氏呼吸儀檢壓法、硫酸高鈰法等。紫外-可見分光光度法是在190～800nm波長范圍內測定物質的吸光度，用於鑒別、雜質檢查和定量測定的方法。當光穿過被測物質溶液時，物質對光的吸收程度隨光的波長不同而變化。因此，通過測定物質在不同波長處的吸光度，並繪制其吸光度與波長的關系圖即得被測物質的吸收光譜。
⑧ 急！請問哪位大神知道測定植物apx酶活時，怎麼測定酶液
1. 酶液制備 取1.0g植物葉片剪碎，按1∶3（W/V）加入預冷的50mmol/L K2HPO4-KH2PO4緩沖液進行研磨提取，用2層紗布過濾，濾液離心（4000×g）10min，上清液作酶粗提液供測定。
2. 酶活性測定 3ml反應混合液中含50mmol/L K2HPO4-KH2PO4緩沖液（pH7.0），0.1mmol/L EDTA-Na2，0.3mmol/L AsA，0.06mmol/L H2O2和0.1ml酶液。加入H2O2後立即在20℃下測定10～30秒內的A290變化，計算單位時間內AsA減少量及酶活性。
⑨ 過氧化物酶活性測定的方法有哪些
實驗 48 過氧化物酶活性的測定（比色法）
過氧化物酶是植物體內普遍存在的、活性較高的一種酶，它與呼吸作用、光合作用及生長素的氧化等都有密切關系，在植物生長發育過程中，它的活性不斷發生變化，因此測量這種酶，可以反映某一時期植物體內代謝的變化。
一、原理
在有過氧化氫存在下，過氧化物酶能使愈創木酚氧化，生成茶褐色物質，該物質在 470 nm 處有最大吸收，可用分光光度計測量 470 nm 的吸光度變化測定過氧化物酶活性。
二、實驗材料、試劑與儀器設備
（一）實驗材料
馬鈴薯塊莖。
（二）試劑
1 ． 100 mmol ／ L 磷酸緩沖液 pH6.0 （見附錄）。
2 ．反應混合液： 100 mmol ／ L 磷酸緩沖液（ pH6.0 ） 50 mL 於燒杯中，加入愈創木酚 28 μl ，於磁力攪拌器上加熱攪拌，直至愈創木酚溶解，待溶液冷卻後，加入 30 % 過氧化氫 19 μl ，混合均勻，保存於冰箱中。
（三）儀器設備
分光光度計，研缽，恆溫水浴鍋， 100 mL 容量瓶，吸管， 離心機。
三、實驗步驟
1 ．稱取植物材料 1 g ，剪碎，放入研缽中，加適量的磷酸緩沖液研磨成勻漿，以 4000 r ／ min 離心 15 min ，上清液轉入 100 mL 容量瓶中，殘渣再用 5 mL 磷酸緩沖液提取一次，上清液並入容量瓶中，定容至刻度，貯於低溫下備用。
2 ．取光徑 1 cm 比色杯 2 只，於 1 只中加入反應混合液 3 mL 和磷酸緩沖液 1mL ，作為對照，另 1 只中加入反應混合液 3 mL 和上述酶液 1mL （如酶活性過高可稀釋之），立即開啟秒錶記錄時間，於分光光度計上測量波長 470 nm 下吸光度值，每隔 1min 讀數一次。
四、結果計算
以每分鍾吸光度變化值表示酶活性大小，即以 ΔA 470 /[min • g （鮮重） ] 表示之。也可以用每 min 內 A 470 變化 0.01 為 1 個過氧化物酶活性單位（ u ）表示。
過氧化物酶活性 [u/ （ g • min ） ]=
式中： Δ A 470 ——反應時間內吸光度的變化。 W ——植物鮮重， g 。
V T ——提取酶液總體積， mL 。
V s ——測定時取用酶液體積 , mL 。
t ——反應時間， min 。