1. 基因克隆和序列分析相關問題
首先高質量的測序結果需要好的樣品來進行是測序成功前提。一個反應成功一個取消，可能存在為非特異擴增。或者單引物擴增現象存在。還有就是引物問題，一般兼並引物、隨機引物及標記性引物、不純的引物及長片段引物等不適合測序。測序必須為特異性引物。還有就是可能存在結構.具體的原因結合峰圖才能夠確定.建議您克隆載體實驗.
你測序所得峰圖是否單一.如果不是單一峰圖你比對有所差異很正常.
如果為單一峰圖存在差異原因：一是，PCR擴增過程中產生錯誤，其次，測序准確率的問題。由於測序儀准確率的限制，在一個較長的序列中發生鹼基錯誤是難以避免的。在確認克隆準確無誤的情況下，通過雙向測序可以最大限度的減少測序的錯誤。只進行單向測序無法保證完全准確，這是儀器ide精確度來決定的。而您的只有部分能夠比對，在峰圖單一的情況下可以設計引物獲得全序列。再與文獻序列進行比對.排除測序造成.其次如若為套峰，那就是擴增問題.具體的你可以還可以咨詢當時的測序公司技術。
2. DNA測序結果常見問題及其解決方法哪位能介紹一下，生物科技的雜志在網上有沒有
測序結果怎麼看？ PCR測序時出現重疊峰、PCR產物不純、測序引物有鹼基缺失、克隆測序時峰形重疊、雜合型突變、PolyA/T導致的套峰和測序信號衰減等問題出現的原因和對策。對於一些生物測序公司（ 如Invitrogen等），我們的菌液或質粒經過PCR和酶切鑒定都沒問題，但幾天後的測序結果卻無法另人滿意。想了解原因可以去生物幫上了解一下啊，我在那裡看到過相關的文檔，介紹的比較詳細，對我的幫助挺大的，你可以去查找一下。 樓主可以去（ CEXUWT.www.bio1000.com/ ）找到，看一下，應該可以解決你的問題
3. 請問【求助/交流】測序套峰 本身雜合子是怎麼回事
全是雙向測通。tongyanna(站內聯系TA)學習學習xp198766(站內聯系TA)你用那種有抗性的平板做克隆如何呢？做了克隆了，如果是單克隆，應該不會出現雜合子啊……多送幾個試試，測不出來是不收費的吧:D:tiger32:mxg-2005(站內聯系TA)挺深奧，學習一下陽光金魚唐(站內聯系TA)Originally posted by xp198766 at 2010-07-25 18:17:26:
關於第二個問題，可能是你的測 ... 都是T載體，別人測序用的是通用引物M13F和M13R,我的目的片段的引物是自己設計的兼並引物sunyongle1(站內聯系TA)其實也不用刻意找，如果你的用的是通用引物，就換一下試試吧。現在的載體一般都不只一套測序的通用引物，比如M13F/R, M13F-47/48,T7 ter等。如果用的是特異性引物的話，就自己再合一條唄。sunyongle1(站內聯系TA)Originally posted by 陽光金魚唐 at 2010-07-25 19:58:14:
一般雜合子是收費的。哈 克隆的話操作注意一點的話，一般不會出現多克隆，再PCR檢驗後，可以得到 目的條帶的，所有沒事啊……一般不會出現雜合的情況……
4. 菌液測序結果有套峰 結果正確 可以用嗎
有套峰的話你要看這個套封是不是一個雜合突變，一般看是不是整體測序結構都有相同高度的套封，如果是的話可能是測序背景顏色可以忽略，如果這個套封是突然起來的就要考慮是雜合子了
5. 測序結果出現套峰是什麼原因
感嘆下，好久沒看到峰圖了^_^
套峰的情況有很多，像非單一模板、或者是鹼基缺失、序列中存在結構、引物降解呀等等都有可能引發套峰
從你的峰圖上來看，在200多bp出現套峰，應該不會是引物的問題，如果是引物的問題應該一出來就是套峰，這個有可能是模板的問題，例如在200bp之前存在結構、鹼基缺失呀等一些原因，建議你可以先從反向測下看看是不是還有套峰。
6. 測序時出現套峰的原因是什麼
在測序反應中，模板或
引物
的原因都可能造成套峰的形成，歸結其形成原因有以下幾點：
·
測序引物在模板上有兩個結合位點；
·
模板不純，如果是
質粒
或是菌液，原因是非單克隆，如果是PCR原因為非特異性條帶；
·
模板序列的特殊結構，如poly結構、發卡結構等；
·
引物降解，或引物不純。
----轉自三博遠志網站測序FAQ
7. 測序中峰圖會出現擁擠的情況,該怎麼解決
什麼叫做擁擠？？是雙峰還是多套峰或者是夾峰。每種情況的處理方式是不一樣的。
8. 請問測序圖譜中自始至終都是套峰，且峰圖不亂一高峰里套一矮峰是怎麼回事謝謝
產生套峰原因：假若為菌或者質粒為雙位（引物結合位點不單一）建議換引物測序實驗，另外一個是由於存在污染重新挑單克隆進行測序實驗即可。
若為PCR一個是由於存在非特異擴增。一個是引物特異性不好。另外一個原因是引物為兼並引物。'
假若套峰小峰為前或後的主峰說明是由於移碼造成既引物合成存在問題。可以把測序結果發給合成公司重新合成。
以上供參考！具體原因請發峰圖參考！
9. 測序重疊
pcr產物是否電泳檢測過，如果有多條片段，切膠純化或者從新設計引物
還不行的話blast一下引物，看看有無長度相近的產物
另外如果擴增片段中有鹼基插入或缺失多態情況也會重疊，可能會前半部分正常，從多態位點開始重疊，可以雙向測拼接一下
10. 在測序前如何進行pcr產物的酶切純化，注意我想知道的是用於測序的pcr產物酶切純化，不是用於克隆的酶切。
這種方法有比較大的局限性，要求pcr產物條帶要單一，如果有雜帶的話測序結果肯定就是一堆的套峰了。
這種方法是採用蝦鹼酶（SAP，Shrimp Alkaline Phosphatase）和外切酶I的混合溶液，來消化pcr擴增體系中多餘的dNTPs和引物，以便後面的測序。一般使用的終濃度為1ul混合溶液中，含有蝦鹼酶0.6單位，外切酶I1.2個單位，這個比例也可以自己通過試驗來調整。
一般是1ulpcr產物加2ul溶液。37度孵育15分鍾，即可除去多餘的引物以及dNTPs，然後80度，15分鍾就可以使蝦鹼酶失活。
這個方法的優點是簡單、快速、省錢、不損失樣品，缺點是對樣品要求高，如果一次純化測序結果不好還要重來，費時費力。所以現在測序公司一般都是使用膠回收試劑盒來純化，這樣雖然工作量比較大，費錢，但基本可以保證一次成功，總體看來還是省時省力的。