細胞周期流式檢測方法

Ⅰ 如何用流式檢測細胞增殖情況

一般可以用tracing
dye.
也就是一些熒光染料，被細胞攝取後不會被排出。這樣，先用染料染色。經過數個細胞周期後，上機檢測。如果細胞沒有分裂增殖，那細胞的熒光強度最高。每分裂增殖一次，熒光強度衰減一半（分到兩個子細胞了）。以此類推。
增殖越多的細胞，會出現幾個逐漸減半熒光強度的峰值。峰值和熒光強度減弱的越多，就說明增殖的越多。

Ⅱ 細胞周期檢測方法即PI法的操作步驟

1. 細胞培養：取對數生長期的細胞，按1×106cells/ mL以1mL接種24孔板或2mL接種於6孔板內，進行所需的處理（比如加入葯物），特定時間後終止培養，進行下一步的實驗。

2. 細胞固定： 800rpm離心5min，收集細胞沉澱，棄上清，用預冷PBS洗滌兩次，加入預冷75%乙醇，於4℃固定4h以上。

3. 細胞染色：1500rpm離心5min，棄上清，以3mL的PBS洗滌一次，加入400uL溴化乙錠（PI，50ug/mL），100ul RNase A（100ug/mL ），4℃避光孵育30min。

4. 流式分析： 以標准程序用流式細胞儀檢測，一般計數2~3萬個細胞，結果用細胞周期擬和軟體ModFit分析。

Ⅲ 請教流式細胞術PI染色進行細胞周期分析的原理

實驗原理：流式細胞儀的工作原理是將待測細胞放入樣品管中，在氣體的壓力下進入充滿鞘液的流動室。在鞘液的約束下細胞排成單列由流動室的噴嘴噴出，形成細胞柱。通過對流動液體中排列成單列的細胞進行逐個檢測，得到該細胞的光散射和熒光指標，分析出其體積、內部結構、DNA、RNA、蛋白質、抗原等物理及化學特徵。
細胞內的DNA含量隨細胞周期進程發生周期性變化，如G0/G1期的DNA含量為2C，而G2期的DNA含量是4C。利用PI標記的方法，通過流式細胞儀對細胞內DNA的相對含量進行測定，可分析細胞周期各時相的百分比。

Ⅳ 求細胞周期檢測方法：PI法操作步驟

1. 細胞培養：取對數生長期的細胞，按1×106cells/ mL以1mL接種24孔板或2mL接種於6孔板內，進行所需的處理（比如加入葯物），特定時間後終止培養，進行下一步的實驗。

2. 細胞固定： 800rpm離心5min，收集細胞沉澱，棄上清，用預冷PBS洗滌兩次，加入預冷75%乙醇，於4℃固定4h以上。

3. 細胞染色：1500rpm離心5min，棄上清，以3mL的PBS洗滌一次，加入400uL溴化乙錠（PI，50ug/mL），100ul RNase A（100ug/mL ），4℃避光孵育30min。

4. 流式分析： 以標准程序用流式細胞儀檢測，一般計數2~3萬個細胞，結果用細胞周期擬和軟體ModFit分析。

Ⅳ 流式細胞儀測定細胞周期各時相的原理和基本步驟（不用說具體使用的量）

在細胞培養液中加入模擬核苷酸EdU （比較老的方法也可以用BrdU）。培養一小時 後，更換為正常的培養液繼續培養。模擬核苷酸可以像天然核苷酸一樣被細胞攝取並整合入新合成的DNA。

培養一段時間後（一般小於一個細胞周期），固定細胞。根據所使用模擬核苷酸的不同，使用不同的方法。EdU，改變緩沖液的pH值，就會發出熒光。而BrdU則需用熒光抗體識別，需要對細胞膜和核膜進行通透處理。

再加入PI對DNA染色。

在二維坐標圖上，橫坐標設為線性PI熒光強度，縱坐標設為模擬核苷酸的熒光強度（log）。

典型的圖就像下面一樣：

G1, G2 和S期就按照圖中的劃分來做。G1期的細胞沒有新合成DNA，所以BrdU信號是陰性，而PI的信號位於1倍體期。S期是正在合成DNA，所以BrdU都是陽性。G2期是已經合成好了2倍的DNA，所以位於2倍體期，信號是G1期的一倍。這個圖中，G1 PI信號是300， G2就是600.

Ⅵ 流式細胞周期結果 怎麼分析

細胞周期至少有兩種做法，最常見的如下圖分析：

比如這個圖，是DNA染料單染，其中粉色部分是G1期，黃色部分是S期，綠色部分是G2/M期。中間的分布一般是通過FlowJo這樣的軟體計算自動生成的。

Ⅶ 流式檢測細胞周期都有哪些染色方法

從分類上來說，一般有兩類：第一類是只染DNA。這類方法比較簡單，用酒精固定細胞後，直接加含有RNA酶的熒光染料，比如PI等，然後就可以直接上機。
第二類另外加了一個步驟，在細胞培養液中加入核苷酸的模擬物，比如BrdU或者EdU。細胞新合成的DNA上就會有這些物質。在不同時間點收集細胞，用DNA染料染DNA的同時，還以用抗體或者化學發光法染核苷酸模擬物也發熒光。這個方法的有點就是不僅可以像第一類方法一樣，看到處於細胞周期各個期的百分率，另外還可以看到有多少DNA是新合成的。是一個動態的過程。

Ⅷ 求流式細胞儀檢測細胞周期的protocol

博凌科為生物科技-為你解答：應用： 通過流式細胞儀分析各時期的細胞百分數，可檢測細胞的增殖、凋亡。原理： 通常用PI染細胞核，PI在一定波長的光下發出熒光，其強度與DNA含量成正比。綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白及其它發光基團也可作為標記物，分選細胞。方法：1） 將細胞以1106接種於60mm培養板，80％匯合後轉染。2） 24小時後在新鮮培養液中加入適當的抗生素（真核表達載體上的抗性標記）進行培養（該步可選）。3） 48－72小時後用胰酶消化收集細胞，PBS洗兩遍，棄上清，加入1ml 70％預冷乙醇中，吹打均勻，4℃固定12小時以上。4） PBS洗滌去乙醇，1000rpm, 5min，洗兩遍。5） 0.5mlPBS重懸細胞，加入PI和 RNaseA至終濃度50g/ml，37℃ 溫浴30 min。6） 用流式細胞儀測定周期。PI：碘化丙啶，以PBS配成1mg/ml，4℃保存。RNaseA：10mg/ml

Ⅸ 細胞周期如何檢測

碘化丙啶（propidium iodide, PI）檢測凋亡細胞
早期死亡細胞膜通透性狀態的不同是區分細胞凋亡和壞死的一個重要指標，凋亡細胞在進入最終溶解階段前，胞膜通透性無明顯改變，相對分子質量大的與DNA結合的熒光染料（如PI）不能時入凋亡細胞內，而相對分子質量小的熒光染料（如Hoechest 3342或33258等）仍能被細胞攝取。應用流式細胞儀或熒光顯微鏡可區分和壞死細胞，細胞內DNA出現Hoechest 3342標記而不出現PI標記的為凋亡細胞。
主要操作步驟如下：①組織塊用0.25%胰酶消化30min~1h。②200~400目篩網過濾細胞，獲得單細胞懸液。③75％乙醇（-20℃預冷）固定細胞1h。④加入PI（終濃度50g／mL）和無DNA酶污染的RNA酶（終濃度50g／mL）1mL染色30min~1h。⑤流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡
細胞凋亡情況觀察及凋亡率檢測
培養48h後細胞分為兩部分，一部分行碘化丙啶( pI )染色，倒置相差顯微鏡下觀察細胞核形態變化。另一部分以胰酶消化後收集， 以1800r／min離心5min，棄培養基，用4℃預冷的PBS洗細胞2次，離心去PBS，加入 4℃預冷的70％的乙醇 4℃固定1h，離心棄去固定液， 用 4℃預冷PBS 3ml 洗細胞2次，加人1ml PI，4℃避光30mi n 。採用流式細胞儀檢測凋亡率。
http://www.biomart.cn/article/9/42/47/162/7437.htm 流式檢測細胞周期
要點： 最關鍵的就是減少細胞碎片和單細胞懸液的制備！
1、細胞消化要理想，資料顯示最好消化時加EDTA，可使流式做的很漂亮；
2、細胞消化後不可吹打過度，減少細胞破碎；以後的吹打也要注意，尤其是固定後的細胞容易破碎；
3、 細胞用PBS洗滌離心，轉速不超過1000r/min，有文獻用800r/min；可考慮在此過程中用300目的尼龍網過濾一遍細胞（有人主張用鋼網，以 減少細胞與尼龍網粘連的損失，本人認為鋼網易損傷細胞，DNA外溢也會造成細胞粘連，所以在細胞數足夠的情況下，首選尼龍網）；
4、離心後的固定，標准做法是將細胞懸液加入預冷70％酒精，而不是向細胞中加酒精，這樣是為了減少細胞聚集，這一點很重要，很多人都忽視了！ 5、一般選擇4℃固定過夜；
6、加染液前的洗滌仍要注意離心轉速的問題；
7、 關於PI染液的組成及配方，應主要以文獻為主，PI（作用為DNA染色劑）的濃度從0.5μg/ml,20μg/ml，到50μg/ml都見報道，響應的 求助顯示都可出良好結果，RNAs酶（由於PI也可染RNA，故要去除RNA）一般濃度為50μg/ml，配方中的Triton-X-100（曲拉通）主 要是通透細胞膜使PI能進入細胞核。 8、檢測時細胞要達到1～2×106個細胞（實際檢測是1萬到2萬個細胞），為了既保持初始條件相同，又可搜 集到足夠的細胞，應選用多孔培養板，在搜集細胞時，濃度大、抑制強的組可多搜集些孔，以保證檢測的細胞數量。如果細胞數量太低，技師為了減少對流式細胞儀 的損傷，就會選擇高速流（一般的檢測用低速流，誤差小），檢測的質量就會大大下降，數據的說服力就下降了！