常見載體及連接方法

『壹』 能將目的基因與載體的鏈接方法說的詳細一點嗎謝謝！

載體一般用質粒，質粒是環狀的DNA分子。用限制酶將目的基因切下來後，用同樣的限制酶去切質粒，這樣質粒就變成了一個帶缺口的環狀DNA，又因為質粒和目的基因是用同種限制酶切下來的，所以它們的黏性末端的鹼基是相同的，在DNA連接酶的作用下，鹼基互補配對，DNA連接酶連接的是脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵，這樣，目的基因就與載體連接在一起了。

『貳』 常用的目的基因與載體的連接方法有哪些

目前已知有三種方法可以用來在體外連接DNA片段：
第一種方法是，用DNA連接酶連接具有互補粘性末端的DNA片段；（人教版高中生物選修3中提到的E·coliDNA連接酶，來源於大腸桿菌，可用於連接粘性末端；T4DNA連接酶，來源於T4噬菌體，可用於連接粘性末端和平末端，但連接效率低。）
第二種方法是，用T4DNA連接酶直接將平末端的DNA片段連接起來，或是用末端脫氧核苷酸轉移酶給具平末端的DNA片段加上poly（dA）-poly（dT）尾巴之後，再用DNA連接酶將它們連接起來；
第三種方法是，先在DNA片段末端加上化學合成的銜接物或接頭，使之形成粘性末端之後，再用DNA連接酶將它們連接起來。這三種方法雖然互有差異，但共同的一點都是利用DNA連接酶所具有的連接和封閉單鏈DNA的功能。
粘性末端DNA片段的連接
DNA連接酶最突出的特點是，它能夠催化外源DNA和載體分子之間發生連接作用，形成重組的DNA分子。
平末端DNA片段的連接
常用的平末端DNA片段連接法，主要有同聚物加尾法、銜接物連接法及接頭連接法。

『叄』 分子克隆中常用的連接方法

方法：DNA片段的制備、載體的選擇、片段與載體連接。在分子水平上提供一種純化和擴增特定DNA片段的方法。

基因克隆是一個比較直觀而簡單的操作程序。它之所以具有非常重要的生物學意義，是因為這一技術可以為我們提供一個純粹的基因標本。

通常，一個基因總是和細胞里其他基因同在。基因克隆技術誕生之前，我們根本無法純化單個基因，這意味著我們只能對基因群、而不是特定基因的結構與功能進行研究和開發利用。

重要意義與應用

分子克隆技術是70年代才發展起來的，它的出現和應用開辟了分子遺傳學研究的新領域，打開了人類了解、識別、分離和改造基因，創造新物種的大門。它的成就對於工業、農牧業和醫學產生深遠影響，並將為解決世界面臨的能源、食品和環保三大危機開拓一條新的出路。

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『陸』 【求助/交流】目的基因與表達載體連接時有哪些要點

2.片段和載體酶且要完全，確定大小沒問題 不過有些載體本身就很很難連接！ 建議在連接時，先加入載體和目的基因，85度熱浴15min,除去殘留的酶和未純化干凈的雜蛋白。然後再加入酶和BUFFER。 適當延長連接時間24小時以內都沒問題的！ 如果還是不行，就試試對載體去磷酸化，每一步處理都要在結束後熱變性，失活殘留的酶，適當加大目的基因的量（10以內），連接溫度也可以在4-16度內用PCR做個梯度！不過如果有平末端的，就不用做這個梯度了。dfdxhghg(站內聯系TA)我們只做醫學論文，所以更專業！我們全部的工作人員均來自醫學院校和附屬醫院，全部擁有碩士以上學歷，有豐富的論文寫作經驗。做醫學論文，我們有比其他公司無法比擬的優勢！很多論文公司的人員根本不懂醫學，醫學論文等專業知識上面很難溝通和探討。

『柒』 分子克隆中常用的連接方法及原理

方法：DNA片段的制備、載體的選擇、片段與載體連接。在分子水平上提供一種純化和擴增特定DNA片段的方法。

原理：外源DNA片段和線狀質粒載體的連接，也就是在雙鏈DNA5'磷酸和相鄰的3'羥基之間形成的新的共價鏈。如質粒載體的兩條鏈都帶5'磷酸，可生成4個新的磷酸二酯鏈。

但如果質粒DNA已去磷酸化，則吸能形成2個新的磷酸二酯鏈。在這種情況下產生的兩個雜交體分子帶有2個單鏈切口，當雜本導入感受態細胞後可被修復。

載體DNA的選擇

質粒是細菌染色體外遺傳因子，DNA呈環狀，大小為1-200千鹼基對(kb)。在細胞中以游離超螺旋狀存在，很容易制備。質粒DNA可通過轉化引入寄主菌。在細胞中有兩種狀態，一是「緊密型」；二是「鬆弛型」。此外還應具有分子量小，易轉化，有一至多個選擇標記的特點。質粒型載體一般只能攜帶10kb以下的DNA片段，適用於構建原核生物基因文庫，cDNA庫和次級克隆。

以上內容參考：網路-分子克隆