水質大腸菌群快速檢測方法

Ⅰ 大腸桿菌檢測方法國標是用什麼方法檢測的

大腸桿菌檢測方法分為三種：

1、細菌分離鑒定法

分離培養與鑒定：糞便標本直接接種腸道桿菌選擇性培養基。血液先經肉湯增菌，然後轉種血瓊脂平板。其他標本同時接種血瓊脂平板和腸道桿菌選擇性培養基。

37℃孵育18～24小時後，觀察菌落塗片染色鏡檢。腸致病性大腸桿菌須先作血清學定型試驗。必要的時候檢定腸黴毒素。

2、衛生細菌學檢查法

大腸桿菌會不斷隨糞便排出體外，污染周圍環境水源、食品等。取樣檢查時，樣品中大腸桿菌越多，則表示樣品被糞便污染的越嚴重，表明樣品中存在腸道致病菌的可能性也就越大。

大腸菌數指數：指每立升中大腸菌群數，採用乳糖發酵法檢測。中國衛生標準是每1000ml飲水中不得超過3個大腸菌群，瓶裝汽水和果汁中每100ml大腸菌群不能超過5個。

3、全自動微生物定量分析儀（TEMPO）檢測法

全自動微生物定量分析（TEMPO）儀大腸桿菌群計數檢測有TEMPOTC和TEMPOCC兩種方法。

TEMPOTC的開發是為獲得NF ISO4832標准相當性能水平。

TEMPOCC法是TEMPO儀器上根據BAM方法專門用於24h計數食品中大腸桿菌群方法。

(1)水質大腸菌群快速檢測方法擴展閱讀：

大腸桿菌在生物技術中的應用

這些菌株由於失去了細胞壁等重要組分，所以在自然條件下已無法生長。甚至普通的清潔劑都可以輕易地殺滅這類菌株。即便由於操作不慎導致活菌從實驗室流出，也不易導致生化危機。

生物工程用的菌株基因組都被優化過，使之帶有不同基因型（例如β半乳糖苷酶缺陷型），可以更好的用於分子克隆實驗。

真核基因在大腸桿菌中表達，必須有合適的表達載體(Vector),常用載體：pBV220,pET系統。

目的基因在大腸桿菌中表達的情況：

大腸桿菌更適合原核基因的表達，外源基因表達產量與單位體積產量是正相相關的，外源基因拷貝數和表達 產物產量之間存在動態平衡，單個細胞的產量又與外源基因拷貝數，基因表達效率，表達產物的穩定性和細胞代謝負荷等因素有關。

Ⅱ 水中大腸桿菌的測定實驗步驟

1、配製培養基：在培養皿中配製伊紅美藍固體培養基。一式三到五份。
2、水樣稀釋：均勻稀釋。
3、接種並培養。
4、觀察每個培養皿中的大腸桿菌的菌落（在伊紅-美藍培養基上，大腸桿菌菌落特徵鮮明）數。取均值，即得實際值。這個菌落數就對應原水樣中大腸桿菌的個數。

Ⅲ 水中大腸桿菌的測定實驗步驟

出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢驗方法
Method for examination of coliform，fecal coliform and escherichia coli in food for export
SN 0169—92
代替ZB X09 002—86
1 主題內容與適用范圍
本標准規定了出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌的檢驗方法。
本標准適用於出口食品的檢驗。
2 設備和材料
2.1 吸管：1mL，具0.1mL刻度；5mL和10mL，具1mL刻度。
2 2 水浴箱：44.5±0.5℃。
2.3 培養箱：36±1℃，44.5±0.5℃。
2.4 冰箱：0～5℃和-15～-20℃。
2.5 均質器。
2.6乳缽和研棒。
2.7 平皿：直徑90mm。
2.8天平：感量0.1g。
2.9 顯微鏡。
2.10 稀釋瓶：100mL、200mL和500mL三角燒瓶及廣口瓶。
2.11 玻璃珠：直徑約5mm。
2.12菌落計數器。
3 培養基及試劑
3.1 月桂基硫酸鹽胰蛋白 (LST)肉湯。
3.2 煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯。
3.3 EC肉湯。
3.4 伊紅美藍瓊脂(EMB)。
3.5營養瓊脂斜面。
3.6 色氨酸肉湯。
3.7 MR-VP培養基。
3.8 Korser氏枸椽酸鹽肉湯。
3.9 結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)。
3.10 Butterfield氏磷酸鹽緩沖稀釋液。
3.11 生理鹽水。
3.12 革蘭氏染色液。
3.13 Kovacs氏靛基質試劑。
3.14 甲基紅指示劑。
3.15 Voges—pros kauer(V—P)試劑。
4 樣品制備
4.1 以無菌操作取有代表性的樣品。如有包裝則用75％乙醇在開口處擦拭後取樣。若不能及時檢驗，應將冷凍樣品置於-15℃保存；非冷凍而易腐的食品，應置於4℃冰箱保存。檢驗前冷凍樣品可於2—5℃18h內解凍，或在45℃以下15min內解凍。
4.2 不同食品樣品勻液的制備
4.2.1 液體食品
以滅菌吸管取樣25mL放入裝有225mL稀釋劑的滅菌玻璃瓶(瓶內預置適當數量的玻璃珠)，以30cm幅度、於7s內振搖25次(或以機械振盪器振搖)，製成1：10的樣品勻液。
4.2.2 固體和半固體食品
以無菌操作取25g樣品，放入裝有225mL稀釋劑的滅菌均質杯內，於8000r／min均質1～2min，製成1：10樣品勻液(也可用滅菌乳缽研磨的方法代替)。
4.3 稀釋樣品勻液根據對樣品污染情況的估計，用稀釋劑將樣品勻液製成一系列十倍遞增的樣品稀釋液，如10-2、10-3、10-4.………。從制備樣品勻液至稀釋完畢，全過程不得超過15min。
5 大腸菌群的測定
5.1 大腸菌群MPN值的測定
5.1.1 對每個樣品，選擇適宜的三個連續稀釋度的樣品稀釋液。每個稀釋度接種三管月桂基硫酸鹽胰蛋白 (LST)肉湯，每管接種1mL。
5.1.2 將接種管置於36±1℃培養48±2h。
5.1.3 觀察試管的產氣情況：檢查倒管內是否有氣泡產生，記錄在24h和48h內產氣的LST肉湯管數。如所有LST肉湯管均未產氣，則可報告為大腸菌群陰性；如有產氣者，則進一步作證實試驗。
5.2 大腸菌群的證實試驗
5.2.1 將所有產氣管用直徑為3mm的接種環移種到煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯管中。
5.2.2 置BGLB肉湯管於36±1℃培養48±2h。
5.2.3 記錄所有BGLB肉湯管的產氣管數。
5.2.4 結果報告：按BGLB肉湯產氣管數，查MPN表(見附錄B(補充件))報告每克(毫升)樣品中大腸菌群的MPN值。
6 糞大腸菌群測定
6.1 用直徑為3mm的接種環將所有48±2h內產氣的LST肉湯管培養物移種於EC肉湯管中。
6.2 將所有接種的EC肉湯管在30min內放入帶蓋44.5±0.5℃水浴箱內，培養24±2h。水浴箱的水平面應高於肉湯培養基液面。應以已知為44.5℃產氣陽性的大腸桿菌和44.5℃不產氣的產氣腸桿菌或其他大腸菌群細菌作陽性和陰性對照。
6.3 記錄EC肉湯管的產氣情況。產氣管為糞大腸菌群試驗陽性；不產氣管為糞大腸菌群試驗陰性。
6.4 結果報告：按產氣管數，查MPN表報告每克(毫升)樣品中糞大腸菌群的MPN值。
7 大腸桿菌測定
7.1 將6.3條中的EC肉湯管繼續培養24h，取其產氣管的培養物劃線接種於伊紅美藍(EMB)平板，36±1℃培養24±2h。
7.2 檢查平板上有無具黑色中心有光澤或無光澤的典型菌落。
7.3 如有典型菌落，則從每個平板上至少挑取2個典型菌落；如無典型菌落，則從每個平板上至少挑取2個可疑菌落。用接種針接觸菌落中心部位，移種到營養瓊脂斜面上，36±1℃培養18～24h。
7.4 將斜面培養物移種到下列培養基中進行生化試驗。
7.4.1 色氨酸肉湯：在36±1℃培養24±2h後，加Kovacs氏試劑0.2～0.3mL，上層出現紅色為靛基質陽性反應。
7.4.2 MR—VP培養基；在36±1℃培養48±2h。以無菌操作移取培養物1mL至13mm×l00mm試管中，加5％ɑ—萘酚乙醇溶液0.6mL，40％氫氧化鉀溶液0.2mL和少許肌酸結晶，振搖試管後靜置2h，如出現伊紅色，為VP試驗陽性。
將MR—VP培養物的剩餘部分再培養48h滴加5滴甲基紅溶液。如培養物變紅色，為甲基紅試驗陽性，若變黃色則為陰性反應。
7.4.3 Koser氏枸椽酸鹽肉湯：於36±1℃培養96h記錄有無生長。
7.4.4 LST肉湯：於30±1℃培養48±2h，觀察試管中是否產氣。
7.4.5 革蘭氏染色：取18h營養瓊脂斜面培養物作革蘭氏染色。大腸桿菌為革蘭氏陰性。
7.4.6 大腸桿菌與非大腸桿菌生化鑒別如下：
靛基質 MR VP 枸椽酸鹽 鑒定（型別）
+ + - - 典型大腸桿菌
- + - - 非典型大腸桿菌
+ + - + 典型中間型
- + - + 非典型中間型
- - + + 典型產氣腸桿菌
+ - + + 非典型產氣腸桿菌
如出現上表以外的生化反應類型，表明培養物可能不純，應重新劃線分離，必要時做重復試驗。
7.5 結果報告：大腸桿菌為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，發酵乳糖產酸產氣，IMViC試驗為++--或-+--，再根據LST肉湯陽性管數查MPN表，報告每克(毫升)樣品中大腸桿菌MPN值。
8 大腸菌群固體培養基測定法
8.1 樣品制備同第4章。
8.2 計數
8.2.1 選取適宜的三個連續稀釋度的樣品液，每個稀釋度接種兩個滅菌平皿，每皿1mL。另取lmL稀釋劑加入一個滅菌平皿中，作空白對照。
8.2.2 將冷至45±0.5℃的結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)10～15mL傾注於每個平皿中。小心旋轉平皿，將培養基與樣液充分混勻。
8.2.3 待瓊脂凝固後，再加3～4mLVRBA覆蓋平板表層。
8.2.4 翻轉平板，置於36±l℃培養18～24h。
8.2.5 選用有30～150個菌落的平板，計數平板上出現的典型大腸菌群菌落。典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉澱環。菌落直徑為0.5mm或更大。
8.2.6 證實
8.2.6.1 從VRBA平板上挑取10個不同類型的典型和可疑菌落，移種於BGLB肉湯管內，36±1℃培養24h和48h，觀察產氣情況。
8.2.6.2 將出現產氣的肉湯管判為大腸菌群陽性。對形成菌膜的陽性管，應進行革蘭氏染色，以便排除革蘭氏陽性桿菌。
8.2.7 結果報告
經最後證實為陽性(產氣，革蘭氏陰性桿菌)的試管百分比乘以於8.2.5條中計數的平板菌落數，再乘以稀釋倍數，即為每克(毫升)樣品中大腸菌群數。
例：10-4樣品稀釋液lmL，在VRBA平板上有100個典型和可疑菌落，挑取其中10個接種BGLB肉湯管，證實有6個陽性管，則該樣品的大腸菌群數為：
100×6／10×104／g(mL)＝6.0×105／g(mL)
附 錄 A
培養基和試劑
(補充件)
A1 月桂基硫酸鹽胰蛋白 （LST）肉湯
胰蛋白 或胰酪腖(Trypticase)
20g
氯化鈉 5.0g
乳糖 5.0g
磷酸氫二鉀(K2HPO4) 2.75g
磷酸二氫鉀(KH2P04) 2.75g
月桂基硫酸鈉 0.1g
蒸餾水 1000.0mL
將各成分溶解於蒸餾水中。分裝到有倒立發酵管的20mm×150mm試管中，每管10mL。121℃高壓滅菌15min。最終pH6.8±0.2。
A2 煌綠乳糖膽鹽(BGAB)肉湯
蛋白腖 10.0g
乳糖 10.0g
牛膽粉(oxgall或oxbile)溶液 200.0mL
0.1％煌綠水溶液 13.3mL
蒸餾水
將蛋白腖乳糖溶於約500mL蒸餾水中，加入牛膽粉溶液200mL(將20.0g脫水牛膽粉溶於200mL蒸餾水中，pH7.0～7.5)，用蒸餾水稀釋到975mL，調pH7.4。再加入0.1％煌綠水溶液13.3mL，用蒸餾水補足到1000mL，用棉花過濾後，分裝到20mm×l50mm試管(管內有倒立的小發酵管)中，每管10mL。121℃高壓滅菌15min。最終pH7.2±0.1。
A3 EC肉湯
胰蛋白 或胰酪
20.0g
3號膽鹽或混合膽鹽 1.5g
乳糖 5.0g
磷酸氫二鉀(KH2P04) 4.0g
磷酸二氫鉀(KH2P04) 1.5g
氯化鈉 5.0g
蒸餾水 1000.0mL
將以上成分溶解於蒸餾水中，分裝16mm×150mm試管(管內有倒立的小發酵管)，每管8mL。
121℃高壓滅菌15min，最終pH6.9±0。1。
A4 伊紅美藍瓊脂(EMB)
蛋白腖 10.0g
乳糖 10.0g
磷酸氫二鉀(KH2P04) 2.0g
瓊脂 15.0g
伊紅γ(水溶性) 0.4g或2％水溶液20mL
美藍0.065g或0.5％水溶液 13mL
蒸餾水 1000.0mL
在1 000mL蒸餾水中煮沸溶解蛋白腖、磷酸鹽和瓊脂，加水補足至原量。分裝於三角燒瓶中。每瓶100mL或200mL，高壓滅菌15min。最終pH7.1±0.2。使用前將瓊脂融化，於每100mL瓊脂中加5mL滅菌的20％乳糖水溶液、2mL的2％伊紅γ水溶液和1.3mL0.5％的美藍水溶液，搖勻，冷至45～50℃傾注平皿。
A5 營養瓊脂斜面
牛肉膏 3.0g
蛋白腖 5.0g
瓊脂 15.0g
蒸餾水 1000.0mL
將各成分加於蒸餾水中，煮沸溶解。分裝合適的試管。121℃高壓滅菌15min。最終pH7.3±0.1。滅菌後擺成斜面備用。
A6 色氨酸肉湯
胰腖或胰酪腖 10.0g
蒸餾水 1000.0mL
加熱攪拌溶解胰腖或胰酪腖於蒸餾水中。分裝試管，每管5mL。121℃高壓滅菌15min。最終pH6.9±0.2。
A7 MR-VP培養基
腖
7.0g
葡萄糖 5.0g
磷酸氫二鉀(K2HPO4) 5.0g
蒸餾水 1000.0mL
將各成分溶於蒸餾水中，分裝試管，121℃高壓滅菌15min，最終pH6.9±0.2。
A8 Koser氏枸椽酸鹽肉湯
磷酸氫銨鈉(NaNH4HPO4�6�14H2O) 1.5g
磷酸氫二鉀(K2HPO4) 1.0g
硫酸鎂(MgSO4�6�17H2O) 0.2g
枸椽酸鈉(含2H2O) 3.0g
蒸餾水 1000.0mL
將各成分溶解於蒸餾水中，分裝試管，每管10mL，121℃高壓滅菌15min。最終pH6.7±0.2。
A9 結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)
蛋白腖 7.0g
酵母膏 3.0g
乳糖 10.0g
氯化鈉 5.0g
膽鹽或3號膽鹽 1.5g
中性 0.03g
結晶紫 0.002g
瓊脂 15～18g
蒸餾水 1000.0mL
將上述成分溶於蒸餾水中，靜置幾分鍾，充分攪拌，調至pH7.4±0.1。煮沸2min，將培養基冷 45～50℃傾注平板。臨用時制備，不得超過3h。
A1O Butterfield氏磷酸鹽緩沖稀釋液
貯存液
磷酸二氫鉀(K2HPO4) 34.0g
蒸餾水 500mL
將磷酸二氫鉀溶於蒸餾水中，用lmol／L氫氧化鈉約175mL調至pH7.2。用蒸餾水加至1000mL貯存於冰箱。稀釋液取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL，分裝於合適容器後，121℃高壓滅菌15min。
A11 生理鹽水
氯化鈉 8.5g
蒸餾水 1000.0mL
將氯化鈉溶於蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min。
A12 革蘭氏染色液
結晶紫染色液：
結晶紫 1.0g
95％乙醇 20.0mL
1％草酸銨水溶液 80.OmL
將結晶紫完全溶解於乙醇中，然後與草酸銨溶液混合。
革蘭氏碘液：
碘 1.0g
碘化鉀 2.0g
蒸餾水 300.0mL
將碘與碘化鉀先行混合，加入蒸餾水少許充分振搖，待完全溶解後，再加蒸餾水至300mL。
沙黃復染液：
沙黃 0.25g
95％乙醇 10.0mL
蒸餾水 90.0mL
將沙黃溶解於乙醇中，然後用蒸餾水稀釋。
染色法
a. 將塗片在火焰上固定，滴加結晶紫染液，染1min，水洗。
b. 滴加革蘭氏碘液，作用lmin，水洗。
c. 滴加95％乙醇脫色約15～30s，直至染色液被洗掉，不要過分脫色，水洗。
d 滴加復染液，復染lmin，水洗、待干、鏡檢。
結果：革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。
A13 Kovacs氏靛基質試劑
對二甲氨基苯甲醛 5.0g
戊醇 75.0mL
鹽酸(濃) 25.0mL
將對二甲氨基苯甲醛溶於戊醇中，然後慢慢加入濃鹽酸即可。
A14 甲基紅指示劑
甲基紅 0.1g
95％乙醇 300mL
將甲基紅溶解於300mL乙醇中，加水稀釋至500mL。
A15 Voges—Proskauer(V—P)試劑
甲液
a-萘酚 5.0g
無水乙醇 100.0mL
乙液
氫氧化鉀 40.0g
用蒸餾水加 100.OmL
附 錄 B
1g檢樣中最近似值(MPN)表
(補充件)
使用三管法，接種量分別為0.1，0.01和0.00lg。
陽性管數 MPN 陽性管數 MPN
0.1 0.01 0.001 0.1 0.01 0.001
0 0 0 <3 2 0 0 9.1
0 0 1 3 2 0 1 14
0 0 2 6 2 0 2 20
0 0 3 9 2 0 3 26
0 1 0 3 2 1 0 15
0 1 1 6.1 2 1 1 20
0 1 2 9.2 2 1 2 27
0 1 3 12 2 1 3 34
0 2 0 6.2 2 2 0 21
0 2 1 9.3 2 2 1 28
0 2 2 12 2 2 2 35
0 2 3 16 2 2 3 42
0 3 0 9.4 2 3 0 29
0 3 1 13 2 3 1 36
0 3 2 16 2 3 2 44
0 3 3 19 2 3 3 53
1 0 0 3.6 3 0 0 23
1 0 1 7.2 3 0 1 39
1 0 2 11 3 0 2 64
1 0 3 15 3 0 3 95
1 1 0 7.3 3 1 0 43
1 1 1 11 3 1 1 75
1 1 2 15 3 1 2 120
1 1 3 19 3 1 3 160
1 2 0 11 3 2 0 93
1 2 1 15 3 2 1 150
1 2 2 20 3 2 2 210
1 2 3 24 3 2 3 290
1 3 0 16 3 3 0 240
1 3 1 20 3 3 1 460
1 3 2 24 3 3 2 1100
1 3 3 29 3 3 3 >1100
註：①本表採用3個稀釋度[0.1g(mL)、0.0lg(mL)和0.001g(mL)]，每個稀釋度接種3管。
②表內所列檢樣量如改用1g(mL)、0.18(mL)和0.01g(mL)時，表內數字應相應降低10倍：如改用0.01g(mL)、0.001g(mL)和0.0001g(mL)時，則表內數字應相應增加10倍，其餘類推。

Ⅳ 水中大腸桿菌的檢測方法

大腸菌群測定的操作細則
大腸菌群系指一群能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來於人畜糞便,故以此作為糞便污染指標來評價食品的衛生質量,推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。
食品中大腸菌群數系以100ml(g)檢樣內大腸菌群最可能數(mpn)表示。
1
設備和材料
1.1
溫箱：36±1℃。
1.2
冰箱:0～4℃。
1.3
恆溫水浴
:44.5±0.5℃。
1.4
天平。
1.5
顯微鏡。
1.6
均質器或乳缽。
1.7
平皿:直徑為90mm。
1.8
試管。
1.9
吸管。
1.10
廣口瓶或三角燒瓶:容量為500ml。
1.11
玻璃珠:直徑約5mm。
1.12
載玻片。
1.13
酒精燈。
1.14
試管架。
2
培養基和試劑
2.1
乳糖膽鹽發酵管:按gb
4789.28中4.9規定。
2.2
伊紅美藍瓊脂平板:按gb
4789.28中4.25規定。
2.3
乳糖發酵管:按gb
4789.28中4.10規定。
2.4
ec
肉湯:按gb
4789.28中4.11規定。
2.5
磷酸鹽緩沖稀釋液:按gb
4789.28中3.22規定。
2.6
生理鹽水。
2.7
革蘭氏染色液:按gb
4789.28中2.2規定。
3
操作步驟
3.1
檢樣稀釋
3.1.1
以無菌操作將檢樣25ml(或g)放於有225ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(瓶內予置適當數量的玻璃珠)或滅菌乳缽內,經充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質器,以8
000-10
000
r/min的速度處理1min,做成1:10的均勻稀釋液。
3.1.2
用1ml滅菌吸管吸取1:10稀釋液1ml,注入含有9ml滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內,振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。
3.1.3
另取1ml滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1ml滅菌吸管。
3.1.4
根據食品衛生標准要求或對檢樣污染情況的估計,選擇三個稀釋度,每個稀釋度,接種3管。
3.2
乳糖發酵試驗
將待檢樣品接種於乳糖
膽鹽發酵管內,接種量在1ml以上者,用雙料乳糖膽鹽發酵管,1ml及1ml以下者,用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種3管,置36±1℃
溫箱內,培養24±2h,如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣,則可報告為大腸菌群陰性,如有產氣者,則按下列程序進行。
3.3
分離培養
將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36±1℃
溫箱內,培養18-24h,然後取出,觀察菌落形態,並做革蘭氏染色和證實試驗。
3.4
證實試驗
在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落1-2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,置
36±1℃溫箱內培養24±2h,觀察產氣情況。凡乳糖管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。
3.5
報告
根據證實為大腸菌群陽性的管數,查mpn檢索表,報告每100ml(g)大腸菌群的mpn值。
4
糞大腸菌群(faecal
coliform)
4.1
用接種環將所有產氣的乳糖膽鹽發酵管培養物(見3.2條)轉種於ec肉湯管內,置44.5±0.2℃水浴箱內(水浴箱內的水面應高於ec肉湯液面),培養24±2h,經培養後,如所有ec肉湯管均不產氣,則可報告為陰性;如有產氣者,則將所有產氣的ec肉湯管分別轉種於伊紅美藍瓊脂平板上,置
培養18-24h,凡平板上有典型菌落者,則證實為糞大腸菌群陽性。
4.2
結果報告
根據證實為糞大腸菌群的陽性管數,查mpn檢索表,報告每100ml(g)糞大腸菌群的mpn值。

Ⅳ 關於水中糞大腸菌群數的測定

1.管的規劃不定，最好是帶蓋子的10－50ml的玻璃管，一般要最少做5個平行。
2.培養基都可以自己配的，建議用簡單的lb培養基即可，葯品為蛋白腖和nacl（固體用agar）。
3.塞子或蓋子都可以，但一定要加。
4.需要超凈台、高壓滅菌鍋、調溫搖床這些必備儀器。
糞大腸菌群是生長於人和溫血動物腸道中的一組腸道細菌，隨糞便排出體外，約占糞便乾重的1／3以上，故稱為糞大腸菌群。糞大腸菌群不是細菌學上分類命名，而是根據衛生學方面的需要，而設定的一類與糞便污染有關的一組細菌，是能在44.5℃24h內發酵乳糖產酸產氣的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。糞大腸菌群為一群需氧及兼性厭氧的菌群，呈革蘭氏陰性反應，能在普通培養基上生長繁殖；其生化活動能力較強，能發酵多種糖類，產酸產氣，其特點是能較快發酵乳糖，糞大腸菌群在乳糖培養基中於．37℃下進行培養，在24h內能使乳糖發酵產酸，還有甲酸解氫酶進行分解甲酸，生成氫氣和二氧化碳，產生大量氣體，這時，若加入伊紅美蘭指示劑，分解乳糖所產生的酸(帶陽電荷)與伊紅相染呈紫色且有金屬光澤，故常用此特性來鑒定識別糞大腸菌群。
具體操作如下：
(1)發酵(產酸產氣)試驗
將試樣液以無菌接種於雙倍乳糖膽鹽發酵管(其內放有倒置的小玻璃管，以收集氣體)內，置44'e培養箱中培養24—48h，由於乳糖膽鹽培養基是一種具有選擇作用的培養基，其中膽鹽具有抑製革蘭氏陽性菌的作用，若觀察到發酵管內不產酸(有酚紅指示劑指示)不產氣，則報告試樣為糞大腸菌群陰性，未檢出，檢測結束。
若發酵管內產酸產氣，則繼續進行下列檢測。
(2)鑒別培養
將有產酸產氣的發酵管內試樣培養液接種到伊紅美蘭瓊脂培養基平皿上，置37℃培養18～24h；同時將該培養液接種到蛋白腖水中，置44℃培養24h。
(3)驗證實驗
菌落觀察：在上述平皿培養基上，仔細觀察菌落生長情況：大腸菌群在伊紅美蘭瓊脂培養基上其典型菌落是呈深紫色、圓形、邊緣整齊、表面光滑、濕潤、常具有金屬光澤，或呈紫黑色不帶或略帶金屬光澤及粉紫色，中心較深的菌落。
革蘭氏染色、鏡檢：將以上典型的(或近似的)大腸菌群菌落進行革蘭氏染色、鏡檢，若革蘭氏染色呈陽性(紫色)反應，則報告糞大腸菌群呈陰性，未檢出。若革蘭氏染色呈陰性，檢測還需進行下一試驗，以待進一步證實。
靛基質試驗(吲哚試驗)：對前已培養好的蛋白腖水中，滴人靛基質試劑(對二甲基氨基苯甲醛試劑)，進行靛基質反應，若液面呈玫瑰紅色，呈陽性反應，則報告糞大腸菌群呈陽性，檢出；若液面仍是棕黃色，則報告糞大腸菌群呈陰性，未檢出。
(4)檢測程序
將上述檢測糞大腸菌群的操作步驟可歸結為以下程序圖示。
(5)檢驗報告
當發酵管內產酸產氣，觀察試液平皿上為典型糞大腸菌群菌落，並經革蘭氏染色、檢鏡試驗為陰性(—)及靛基質試驗為陽性，則報告該試液經檢測檢出糞大腸菌群。其他結果均為未檢出糞大腸菌群。