『壹』 分離提純蛋白質時常需去鹽,常用去鹽的方法有哪些
蛋白質沉澱的定義： 蛋白質分子凝聚從溶液中析出的現象稱為蛋白質沉澱(precipitation)，變性蛋白質一般易於沉澱，但也可不變性而使蛋白質沉澱，在一定條件下，變性的蛋白質也可不發生沉澱。 蛋白質沉澱的方法： 鹽析法 ——多用於各種蛋白質和酶的分離純化； 在蛋白質溶液中加入大量的中性鹽以破壞蛋白質的膠體穩定性而使其析出，這種方法稱為鹽析。常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等。各種蛋白質鹽析時所需的鹽濃度及pH不同，故可用於對混和蛋白質組分的分離。例如用半飽和的硫酸銨來沉澱出血清中的球蛋白，飽和硫酸銨可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉澱出來，鹽析沉澱的蛋白質，經透析除鹽，仍保證蛋白質的活性。調節蛋白質溶液的pH至等電點後，再用鹽析法則蛋白質沉澱的效果更好。鹽析法分為兩類，第一類叫Ks分段鹽析法，在一定PH和溫度下通過改變離子強度實現，用於早期的粗提液；第二種叫b分段鹽析法，在一定離子強度下通過改變PH和溫度來實現，用於後期進一步分離純化和結晶。影響鹽析的因素包括：蛋白質濃度、離子強度和類型、PH值、溫度等。針對溫度這一條，需要強調：在低離子強度或純水中，蛋白質溶解度在一定范圍內隨溫度增加而增加。但在高濃度下，蛋白質、酶和多肽類物質的溶解度隨溫度上升而下降。在一般情況下，蛋白質對鹽析溫度無特殊要求，可在室溫下進行，只有某些對溫度比較敏感的酶要求在0-四℃進行。 使用硫酸銨沉澱蛋白需要注意：硫酸銨中常含有少量的重金屬離子，對蛋白質巰基有敏感作用，使用前必須用H二S處理：將硫酸銨配成濃溶液，通入H二S飽和，放置過夜，用濾紙除去重金屬離子，濃縮結晶，一00℃烘乾後使用。另外，高濃度的硫酸銨溶液一般呈酸性（PH=5.0左右），使用前也需要用氨水或硫酸調節至所需PH。 有機溶劑沉澱法 ——多用於生物小分子、多糖及核酸產品的分離純化； 有機溶劑的沉澱機理是降低水的介電常數，導致具有表面水層的生物大分子脫水，相互聚集，最後析出。該法優點在於：一）分辨能力比鹽析法高，即蛋白質或其它溶劑只在一個比較窄的有機溶劑濃度下沉澱；二）沉澱不用脫鹽，過濾較為容易；三）在生化制備中應用比鹽析法廣泛。但是，在常溫下，有機溶劑沉澱蛋白質往往引起變性。例如酒精消毒滅菌就是如此。因此，操作要求在低溫下進行。有機溶劑的選擇首先是能和水混溶，使用較多的有機溶劑是乙醇、甲醇、丙酮，還有二甲基甲醯胺、二甲基亞碸、乙腈和二-甲基-二,四戊二醇等。 等電點沉澱法 ——此法單獨應用較少，多與其它方法結合使用； 兩性電解質分子上的凈電荷為零時溶解度最低，不同的兩性電解質具有不同的等電點，以此為基礎可進行分離。如工業上生產胰島素時，在粗提液中先調PH吧.0去除鹼性蛋白質，再調PH三.0去除酸性蛋白質。利用等電點除雜蛋白時必須了解制備物對酸鹼的穩定性，不然盲目使用十分危險。不少蛋白質與金屬離子結合後，等電點會發生偏移，故溶液中含有金屬離子時，必須注意調整PH值。等電點法常與鹽析法、有機溶劑沉澱法或其他沉澱方法聯合使用，以提高其沉澱能力。 重金屬鹽沉澱法 ——常用於搶救誤服重金屬鹽中毒的病人； 許多有機物質包括蛋白在內，在鹼性溶液中帶負電荷，能與金屬離子形成沉澱。根據有機物與它們之間的作用機制，可分為羧酸、胺及雜環等含氮化合物類，如銅鋅鎘；親羧酸疏含氮化合物類，如鈣鎂鉛；親硫氫基化合物類，如汞銀鉛。蛋白質-金屬離子復合物的重要性質是它們的溶解度對溶液的介電常數非常敏感，調整水溶液的介電常數（如加入有機溶劑），即可沉澱多種蛋白。沉澱的條件以pH稍大於等電點為宜。重金屬沉澱的蛋白質常是變性的，但若在低溫條件下，並控制重金屬離子濃度，也可用於分離制備不變性的蛋白質。臨床上利用蛋白質能與重金屬鹽結合的這種性質，搶救誤服重金屬鹽中毒的病人，給病人口服大量蛋白質，然後用催吐劑將結合的重金屬鹽嘔吐出來解毒
『貳』 除了凝膠層析脫鹽的方法,還有什麼脫鹽的方法
你要脫鹽的物質是什麼呀,我講下蛋白的吧.
1.用透析法,不過這種方法只能用於少量蛋白的脫鹽.
2.可以用丙酮沉澱蛋白除鹽,因為這種方法是使蛋白變性沉澱下來而除鹽,這種方法可能會使部分蛋白丟失或失去活性.
3.鹽析,用硫酸銨,氯化鈉等中性鹽等沉澱蛋白而除鹽