⑴ 檢測細胞增殖的方法有哪些
一、MTT比色:
MTT比色是一種目前被廣泛採用的檢測細胞生長和存活的方法,其原理是外源性MTT(四唑鹽)可被活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶還原成難溶的藍紫色結晶物並沉澱在細胞中,而死細胞無此功能,DMSO(二甲基亞碸)能溶解細胞中的紫色結晶物,用酶聯檢測儀在490nm波長處檢測其光密度值,可間接反映活細胞數量。在一定范圍內,MTT結晶物形成的量與細胞數成正比,此方法已廣泛用於檢測細胞活力、觀察細胞生長等方面,具有靈敏度高、重復性好、操作簡便、經濟、快速、易自動化、無放射性污染等特點,與細胞計數有良好的相關性。
二、rdU標記法
1.細胞以1.5×105/ml細胞數接種於直徑35ml培養皿中(內放置一蓋玻片),培養1天,用含0.4% FCS培養液同步化3天,使絕大多數細胞處於G0期。
2.終止細胞培養前,加入BrdU(終濃度為30μg/L),37℃,孵育40min。
3.棄培養液,玻片用PBS洗滌3次。
4.甲醇/醋酸固定10min。
5.經固定的玻片空氣乾燥,0.3%H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。
6.5%正常兔血清封閉。
7.甲醯胺100℃,5min變性核酸。
8.冰浴冷卻後PBS洗滌,加1抗即抗小鼠BrdU單抗(工作濃度1:50),陰性對照加PBS或血清。
9.按ABC法進行檢測,蘇木素或伊紅襯染,在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數,計算標記指數(LI)。
三、結晶紫法
1.體外細胞培養結束後,去培養液,加入11%的戊二醛固定,置於振盪器上搖20min。
2.固定細胞用去離子水洗滌至戊二醛液洗凈。
3.置空氣或烘箱37℃徹底乾燥。
4.加入0.1%的結晶紫液對細胞染色,振搖30min。
5.用蒸餾水洗滌,至多餘的結晶紫液沖洗干凈。
6.置空氣或37℃烘箱中徹底乾燥。
7.加入10%的乙酸對細胞吸收的結晶紫進行提取。
8.1h後在酶標儀上測定光吸收度,波長595nm。
四、酸性磷酸酶法
1.96孔細胞培養板中培養細胞,去培養液。用0.01mol/L PBS洗滌1次(如為懸浮細胞則用離心洗滌)。
2.去洗滌液後加入磷酸酶底物100μl/孔。
3.37℃,孵育1~4h。
4.加入0.1mol/L氫氧化鈉10μl/孔。
5.在多孔酶標儀上405nm處測光吸收度,將細胞培養板其中不含細胞,同樣處理過的一孔作為空白對照,所測的每孔光吸收度可間接反應每孔中的細胞數。如在同樣條件下作一細胞數的系列標准對照,以細胞數為X軸,光吸收度為Y軸,可作直線回歸,可推算出每孔中的細胞。
⑵ 蕙蘭的養殖方法
目前國蘭的快速繁殖技術主要以莖尖作為外植體,在春蘭、建蘭、蕙蘭和墨蘭上都獲得了一定的成功。具體的快速繁殖程序為:選擇生長旺盛的長為3-8厘米的新芽為外植體,經過0.1%HgCl2和10%次氯酸鈉兩次消毒後用無菌水沖洗干凈。在解剖鏡下無菌操作剝取莖尖和腋芽,若不以去毒為目的,切的莖尖應大些,以便提高成活率。
將切取的莖尖接種到誘導培養基上進行暗培養,1—2個月可以分化出1至數個乳白色的原球莖。然後轉入散射光下培養,繼代後原球莖伸長形成根狀莖。原球莖的誘導與品種和培養基本關系較大,一般而言,對根狀莖進行切割繁殖,切割的長度一般為1厘米左右。用液體培養的方法根狀莖增殖快,培養基以MS附加NAA
2毫克/升較好。為了得植株再生,用液體培養和固體培養交替進行為好。等到根狀莖繁殖到一定數量後,轉入到再生培養基中進行植株再生,再生培養基根據蘭花的種類不同而異,一般而言用MS+BA2-5毫克/升+NAA0.2毫克/升的瓊脂培養基上分化效果較好。
國蘭試管苗「自立」能力差,移栽養護技術難度大,在具體移栽過程中,建議先煉苗3—4天,然後將幼苗移到通風透水保濕的適宜介質中,在高濕弱光下緩苗一個星期,之後,放在攝氏溫度20—25度,空氣相對濕度50%左右的條件下養護,定期施肥噴葯,這樣便能有效提高試管苗成活率。
⑶ 女生快速長高方法技巧大全 小個子女生必看
很多女生想長高,卻找不到正確的長高方法。下面我為大家總結了女生快速長高方法技巧大全,僅供大家參考。
飲食起居
1. 睡前不要想得太多,九十分鍾內進入熟睡狀態,生長激素分泌最多
2. 每天定時定量壓腿,就算 長高 不了身材還是很重要吧。
3. 多上廁所,多吃能通順腸道的食物。少坐著,多站。
4. 每天堅持喝豆漿、牛奶,補充蛋白質非常重要。
5. 睡眠時間8小時以上,睡前伸懶腰,雙手和腳同時朝相反的方向拉伸。
6. 喝很多很多水,加快新陳代謝,對皮膚也很好。
7盡可能多吃,不偏食。別怕長胖,減肥隨時可以,不要吃過多甜食和碳酸飲料。
8、鹽也是增高的大敵,必須養成少吃鹽
懸垂長高
在單杠或克己的家庭懸杠上,天天晨起和晚睡前各練一次。辦法:雙手正握杠,腳離空中,滿身抓緊,腰、髖、腿作悄悄顫動;吊懸2-3分鍾後,休息2分鍾再做,10-15次後再做5次負重懸垂———踝部系5公斤重物。每做一次休息2分鍾。此法被很多有毅力且時間充足的人群認為,十分有效!
女生長高的小動作
①並攏兩腳,筆直地站立,把一條腿向後移開半步,然後把上體向前彎曲,不要彎膝蓋,使手指能觸到地面為止,如此,連續做15~20次。
這個 動作 ,可以使大腿及膝蓋的線條優美柔和,令左右兩腿勻稱。
②兩腳打開30~60厘米,挺直地站立,把一條腿向後退半步,然後把上身扭曲,使指尖能夠觸及另一側的腳趾。並連續做10~15次。
這個動作,可以使兩腕的線條優美柔和,腰圍縮小,並矯正脊椎柱的彎曲。
③兩腳打開60~70厘米,把一條腿向後退半步,再抬起雙臂,與肩膀同高,然後把雙臂水平地向後甩去。向長腿的方向扭轉7次,向短腿的方向扭轉4次。
這動作,可以使腰圍緊縮,體態嬌美。
以上就是我為大家總結的女生快速長高方法技巧大全,僅供參考,希望對大家有所幫助。
16歲的人再長個子還是有希望的,只要自己有信心並選擇合適的方法堅持下去。下面我為大家總結了16歲的人如何快速長高,有什麼方法和技巧,僅供大家參考。
引體向上能幫你長高
一些牽拉懸垂的動作能促進你 長高 ,這里首推引體向上,同時引體向上是打造上半身肌肉的最佳動作之一。動作要點在於最大限度地用力和最大程度地放鬆。
開始和結束階段有10秒的懸垂狀態,每天可以按照自己的能力做2組。運動是最有效最健康的、不吃葯的增高方法,為了自己的理想身高和強壯的體魄,趕快行動起來吧。
補充礦物質
人體的長高,決定於骨骼的生長發育,其中下肢長骨的增長與身高最為密切。也就是說,只有長骨中骺軟骨細胞的不斷生長,人體才會長高,鈣、磷是骨骼的主要成分。
所以,5-10月份要多補充牛奶、蝦皮、豆製品、排骨、海帶、紫菜等含鈣、磷豐富的食物。另外,要到戶外多曬太陽,增加紫外線照射機會,以利於體內合成維生素D,促使胃腸對鈣、磷的吸收,從而保證骨骼的健康成長。
經常進行體育鍛煉
經常參加適宜長高和健腦的體育鍛煉,能促使全身血液循環,保障骨骼肌肉和腦細胞得到充足的營養,促使骨骼變粗、骨質密度增厚、抗壓抗折能力加強。運動能促進生長激素的分泌,使骨骼、肌肉、大腦發育得更好。
所以,應多參加適宜長高和健腦的活動,例如跳繩、踢毽、跳皮筋、藝術體操和各種球類活動等,也可以通過增高產品的輔助治療與運動有機的結合實現增高的最佳療效。
注重營養補充
營養是兒童體格生長的關鍵。體格正常生長所需的能量、蛋白質和氨基酸,必須由食物供給,主要是肉、蛋、豆及豆類食物。骨的形成還需要足夠量的鈣、磷及微量的錳和鐵。
鈣的攝入不足及維生素D缺乏時,會造成骨礦化不足,維生素A缺乏會使骨變短變厚,維生素C缺乏會使骨細胞間質形成缺陷而變脆,這些都會影響骨的生長。
一般家庭在有葷有素的飲食中,營養應該是全面及足量的, 家長 應該注意不要讓孩子養成偏食的習慣,更不要讓孩子過多地吃零食而影響重要營養物質的攝入。
以上就是我為大家總結的16歲的人如何快速長高,僅供參考,希望對大家有所幫助。