培養細菌的方法和技巧

⑴ 微生物的培養方法

1．平板劃線分離培養法

對混有多種細菌，採用劃線分離和培養，使原來混雜在一起的細菌沿劃線在瓊脂平板表面分離，得到分散的單個菌落，以獲得純種。平板劃線分離法通常有兩種方法：

①分區劃線分離法：此法常用於含菌量較多的細菌的分離。先用接種環挑取標本塗布於瓊脂平板1區（占培養基總面積的¼）並作數條劃線，再於2、3、4區依次劃線。每劃完一個區域，均將接種環燒灼滅菌1次，冷後再劃下一區域，每一區域的劃線均與上一區域的劃線交接1~3次。一個成功分區劃線的平板，培養後分別觀察1區形成菌苔，2區菌落連成線，3區和4區可分離到單個菌落。

②連續劃線分離法：此法常用於含菌量不多的標本或培養物中的細菌分離培養。方法是先將接種物在瓊脂平板上1/5處輕輕塗抹，然後再用接種環或拭子在平板表面曲線連續劃線接種，直至劃滿瓊脂平板表面。

2.瓊脂斜面接種法

主要用於菌落的移種，以獲得純種進行鑒定和保存菌種等。用接種環（針）挑取單個菌落或培養物，從培養基斜面底部向上劃一條直線，然後再從底部沿直線向上曲折連續劃線，直至斜面近頂端處止。生化鑒定培養基斜面接種，用接種針挑取待鑒定細菌的菌落，從斜面中央垂直刺入底部，抽出後在斜面上由下至上曲折劃線接種。

3．穿刺接種法

此法多用於半固體培養基或雙糖鐵、明膠等具有高層的培養基接種，半固體培養基的穿刺接種可用於觀察細菌的動力。接種時用接種針挑取菌落，由培養基中央垂直刺入至距管底0.4cm處，再沿穿刺線退出接種針。雙糖鐵等有高層及斜面之分的培養基，穿刺高層部分，退出接種針後直接劃線接種斜面部分。

4．液體培養基接種法

用於各種液體培養基如肉湯、蛋白腖水、糖發酵管等的接種。用接種環挑取單個菌落，傾斜液體培養管，在液面與管壁交界處研磨接種物（以試管直立後液體淹沒接種物為准）。此接種法應避免接種環與液體過多接觸，更不應在液體中混勻、攪拌，以免形成氣溶膠，造成實驗室污染。

5．傾注平板法

本法主要用於飲水、飲料、牛乳等標本中的細菌計數。取純培養物的稀釋或原標本1ml至無菌培養皿內，再將已融化並冷卻至45~50℃左右的瓊脂培養基15~20ml傾注入該無菌培養皿內，混勻，待凝固後置37℃培養，長出菌落後進行菌落計數，以求出每毫升標本中所含菌數。先數6個方格（每格為1cm2）中菌落數，求出每格的平均菌落數，並算出平皿直徑，然後按下列公式計數，求出每毫升標本中的細菌數。

全平板菌落數=每方格的平均菌落數×лr2

每ml標本中的細菌數=全平板菌落數×稀釋倍數

6．塗布接種法

本法多用於紙片擴散法葯敏試驗的細菌接種。將一定量或適量的菌液加到瓊脂培養基表面，然後用滅菌的L型玻璃棒或棉拭子於不同的角度反復塗布，使被接種液均勻分布於瓊脂表面，然後貼上葯敏紙片，或直接培養，本法經培養後細菌形成菌苔。

⑵ 細菌培養怎麼做 怎麼做細菌培養

1、培養時應根據細菌種類和目的等選擇培養方法、培養基，制定培養條件（溫度、pH值、時間，對氧的需求與否等）。一般操作步驟為先將標本接種於固體培養基上，做分離培養。再進一步對所得單個菌落進行形態、生化及血清學反應鑒定。培養基常用牛肉湯、蛋白腖、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細菌所需的特殊物質配製成液體、半固體、固體等。一般細菌可在有氧條件下，37℃中放18～24小時生長。厭氧菌則需在無氧環境中放2～3天後生長。個別細菌如結核菌要培養1個月之久。

2、由於細菌無處不在，因此從制備培養基時開始，整個培養過程必須按無菌操作要求進行，否則外界細菌污染標本，會導致錯誤結果；而培養的致病菌一旦污染環境，就會引起交叉感染。以疾病診斷為目的進行的培養，要選擇合適的標本（血、尿、便、膿液、分泌物等），並應結合臨床情況解釋所得結果。

3、以光合細菌培養方法為例。光合細菌培養的方法，按次序分為容器、工具的消毒，培養基的制備，接種和培養管理四個步驟。

4、如果培養的光合細菌是淡水種，菌種培養可用蒸餾水，生產培養可用消毒的自來水（或井水）配製。如果培養的光合細菌是海水種，則用天然海水配製培養基，注意在海水中加入磷元素時，不能用磷酸氫二鉀，應用磷酸二氫鉀，不然會產生大量沉澱。

5、滅菌和消毒菌種培養用的培養基應連同培養容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。小型生產性培養可把配好的培養液用普通鋁鍋或大型三角燒瓶煮沸消毒。大型生產性培養則把經沉澱砂濾後的水用漂白粉（或漂白液）消毒後使用。

6、培養基配製根據所培養種類的營養需要選擇合適的培養基配方。按培養基配方把所需物質稱量，逐一溶解，混合，配成培養基。也可先配成母液，使用時按比例加入一定的量即可。

7、接種培養基配好後，應立即進行接種。光合細菌生產性培養的按種量比較高，一般為20%～50%，即菌種母液量和新配培養液雖之比為1∶4～1∶1，不應低於20%，尤其是微氣培養，接種量更應高些，否則光合細菌在培養液中很難占絕對優勢，影響培養的最終產量和質量。

8、培養管理光合細菌的培養過程中，管理工作包括日常管理操作和測試，生長情況的觀察、檢查以及出現問題的分析處理等三個方面。

⑶ 微生物培養方法

微生物培養法是在人為條件下繁殖微生物的方法。根據微生物的種類以及對養料、溫度、氧氣、水分、酸鹼度等環境條件的要求不同，並聯系生產和實驗上的具體要求，可有不同的培養方法。可分好氣培養法和厭氣培養法兩類。中海生物技術的培養基一是好氣微生物培養法，常用：①搖床培養法，即將微生物接種於盛有液體培養基的三角瓶後，放在恆溫培養室中的搖床上作有節奏的振盪，使空氣不斷進入培養液中，促其良好生長;②淺盤培養法，又稱表面培養法，在盤內放一淺層培養基，使微生物能夠充分接觸空氣，而有利於生長繁殖，但此法所需空間大，並且容易污染雜菌;③深層培養法，適用於好氣微生物的大規模發酵培養，在大容積的液體培養基中，通入無菌空氣，並不斷攪拌，可使微生物充分接觸空氣，迅速繁殖並積累代謝產物。二是厭氣微生物培養法，實驗室常用化學還原劑或抽氣機吸除培養基中的分子氧，也有用靜止狀態的深層培養法。在生產中常用密封式發酵罐或不通風的固體發酵法。

⑷ 微生物培養方法有哪些

常用的微生物實驗室接種方法有以下幾種：

1、液體接種：從固體培養基中將菌洗下，倒入液體培養基中，或者從液體培養物中，用移液管將菌液接至液體培養基中，或從液體培養物中將菌液移至固體培養基中，都可稱為液體接種。

2、穿刺接種：在保藏厭氧菌種或研究微生物的動力時常採用此法。做穿刺接種時，用的接種工具是接種針。用的培養基一般是半固體培養基。它的做法是：用接種針蘸取少量的菌種，沿半固體培養基中心向管底作直線穿刺，如某細菌具有鞭毛而能運動，則在穿刺線周圍能夠生長。

3、活體接種：活體接種是專門用於培養病毒或其它病原微生物的一種方法，因為病毒必須接種於活的生物體內才能生長繁殖。所用的活體可以是整個動物；也可以是某個離體活組織，例如猴腎等；也可以是發育的雞胚。接種的方式是注射，也可以是拌料喂養。

4、澆混接種：該法是將待接的微生物先放入培養皿中，然後再倒入冷卻至45°C左右的固體培養基，迅速輕輕搖勻，這樣菌液就達到稀釋的目的。待平板凝固之後，置合適溫度下培養，就可長出單個的微生物菌落。

5、劃線接種：即在固體培養基表面作來回直線形的移動，就可達到接種的作用。常用的接種工具有接種環，接種針等。在斜面接種和平板劃線中就常用此法。

6、塗布接種：與澆混接種略有不同，就是先倒好平板，讓其凝固，然後再將菌液倒入平板上面，迅速用塗布棒在表面作來回左右的塗布，讓菌液均勻分布，就可長出單個的微生物的菌落。

7、三點接種：在研究黴菌形態時常用此法。此法即把少量的微生物接種在平板表面上，成等邊三角形的三點，讓它各自獨立形成菌落後，來觀察、研究它們的形態。除三點外，也有一點或多點進行接種的。

8、注射接種：該法是用注射的方法將待接的微生物轉接至活的生物體內，如人或其它動物中，常見的疫苗預防接種，就是用注射接種，接入人體，來預防某些疾病。

⑸ 怎麼做細菌培養

細菌培養是一種用人工方法使細菌生長繁殖的技術。大多數細菌可用人工方法培養，即將其接種於培養基上，使其生長繁殖。培養出來的細菌用於研究、鑒定和應用。
具體培養步驟：
以光合細菌培養方法為例。光合細菌培養的方法，按次序分為容器、工具的消毒，培養基的制備，接種和培養管理四個步驟。
（一）容器、工具的消毒參考、此處從略。
（二）培養基的制備
1．培養用水
如果培養的光合細菌是淡水種，菌種培養可用蒸餾水，生產培養可用消毒的自來水（或井水）配製。如果培養的光合細菌是海水種，則用天然海水配製培養基，注意在海水中加入磷元素時，不能用磷酸氫二鉀，應用磷酸二氫鉀，不然會產生大量沉澱。
2．滅菌和消毒菌種培養用的培養基應連同培養容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。小型生產性培養可把配好的培養液用普通鋁鍋或大型三角燒瓶煮沸消毒。大型生產性培養則把經沉澱砂濾後的水用漂白粉（或漂白液）消毒後使用。
3．培養基配製根據所培養種類的營養需要選擇合適的培養基配方。按培養基配方把所需物質稱量，逐一溶解，混合，配成培養基。也可先配成母液，使用時按比例加入一定的量即可。
（三）接種培養基配好後，應立即進行接種。光合細菌生產性培養的按種量比較高，一般為20%～50%，即菌種母液量和新配培養液雖之比為1∶4～1∶1，不應低於20%，尤其是微氣培養，接種量更應高些，否則光合細菌在培養液中很難占絕對優勢，影響培養的最終產量和質量。
（四）培養管理光合細菌的培養過程中，管理工作包括日常管理操作和測試，生長情況的觀察、檢查以及出現問題的分析處理等三個方面。
日常管理和測試：
（1）攪拌和充氣：光合細菌培養過程中必須充氣或攪拌，作用是幫助沉澱的光合細菌上浮獲得光照，保持菌細胞的良好生長。小型厭氣培養常用人工搖動培養容器的方法使菌細胞上浮，每天至少搖動三次，定時進行。大型厭氣培養則用機械攪拌器或使用小水泵使水緩慢循環運轉，保持菌體懸浮。微氣培養是通過充氣幫助菌體上浮，因為培養液中溶解氧含量增加，光合細菌繁殖受到抑制，產量下降，所以必須嚴格控制充氣量。一般採用定時斷續充氣，充氣量控制在1～1.5升/（升·h）之間，溶解氧量保持在1×10-6以下。
（2）調節光照度：培養光合細菌需要連續進行照明。在日常管理工作中，應根據需要經常調整光照度。白天可利用太陽光培養，晚上則需要人工光源照明，或完全利用人工光源培養。人工光源一般使用碘鎢燈或白熾燈泡。不同的培養方式所要求的光照強度有所不同。一般培養光照強度應控制在2000～5000lx之間。如果光合細菌生長繁殖快，細胞密度高，則光照強度應提高到5000～10000lx。光照強度可通過調整培養容器與光源的距離或使用可控電源箱調節。
（3）調節溫度：光合細菌對溫度的適應范圍很廣，一船在23～39℃的范圍內均能正常生長繁殖，可不必調整溫度。在常溫下培養也可通過調整，將溫度控制在光合細菌生長繁殖最適宜的范圍內，使光合細菌更好地生長。
（4）酸鹼度的測定和調整：在培養光合細菌的過程中，必須注意酸鹼度的變化。由於光合細菌的大量繁殖，菌液的pH值上升，這意味著光合細菌正處於指數生長期。但當pH值超過最適范圍甚至生長的適應范圍時，光合細菌的生長達到頂點，隨後生長下降。如果能及時調整菌液的酸鹼度，使pH值保持在最適范圍，則光合細菌能繼續生長繁殖。為了延長光合細菌的指數生長期，提高培養基的利用率和單位水體的產量，測定和調整PH值是非常重要的。一船採用加酸的辦法來降低菌液的酸鹼度，醋酸、乳酸和鹽酸部可使用，最常用的是醋酸。在日常的管理工作中，必須每天或隔天測定菌液的pH值，當pH值上升超出最適范圍，即加酸調整。如果在培養過程中不測定、調整酸鹼度，當光合細菌的生長達到一定密度後pH值也上升到9以上，細菌生長受阻，此時應採收或再擴大培養。在培養過程中不調整PH值，獲得的最終產量低。

⑹ 培養細菌的四個步驟

（1）配置培養基，首先要配置含有營養物質的培養基，原因細菌的生活需要營養物質，而不是瓊脂，瓊脂是一種沸騰冷卻後能膠化成固體的物質．（2）高溫滅菌，對配置的培養基和培養皿進行滅菌，防止其他細菌侵入影響實驗．（3）冷卻後為它接種．（4）在恆溫箱中培養，細菌在溫度適宜的地方繁殖速度比較快． 注意：定期觀察並組詳細記錄．所以在實驗室培養細菌和真菌的一般步驟是：配製培養基-高溫滅菌冷卻-接種--培養．故答案為：配製培養基；高溫滅菌；冷卻接種；恆溫培養

⑺ 細菌分離培養的基本要領和常用方法有哪些

一、基本要領

菌種分離主要在培養皿上進行，常用的方法是稀釋法和劃線法。

菌種分離的目的是是微生物的一個個體通過繁殖，在固體培養基上長出肉眼能見的群體，然後根據培養特徵，用接種針調取所需菌種並在顯微鏡下檢查，證明為單一形狀的菌體。

改變培養基條件也有助於菌種分離。沒有一種培養基或一種培養條件能夠滿足一切微生物生長的需要，在一定程度上所有的培養基都是選擇性的。

如果某種微生物的生長需要是已知的，也可以設計特定環境使之適合這種微生物的生長，因而能夠從混雜的微生物群體中把這種微生物選擇培養出來，盡管在混雜的微生物群體中這種微生物可能只佔少數。

二、方法

1、稀釋倒平板法

首先把微生物懸液作一系列的稀釋（如1:10、1:100、1:1000、1:10000），然後分別取不同稀釋液少許，與已熔化並冷卻至50℃左右的瓊脂培養基混合，搖勻後，傾入滅過菌的培養皿中，待瓊脂凝固後，製成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養一定時間即可出現菌落。

如果稀釋得當，在平板表面或瓊脂培養基中就可出現分散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨後挑取該單個菌落，或重復以上操作數次，便可得到純培養。

2、塗布平板法

因為將微生物懸液先加到較燙的培養基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡，且採用稀釋倒平板法也會使一些嚴格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長，因此在微生物學研究中常用的純種分離方法是塗布平板法。

其做法是先將已熔化的培養基倒入無菌平皿，製成無菌平板，冷卻凝固後，將一定量的微生物懸液滴加在平板表面，再用無菌玻璃塗棒將菌液均勻分散至整個平板表面，經培養後挑取單個菌落。

3、平板劃線法

最簡單的分離微生物的方法是平板劃線法，即用接種環以無菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進行連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，並逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經培養後，可在平板表面得到單菌落。

有時這種單菌落並非都由單個細胞繁殖而來的，故必須反復分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養基表面多次作「由點到線」稀釋而達到分離目的的。劃線的方法很多，常見的比較容易出現單個菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、放射法、四格法等。

4、 稀釋搖管法

用固體培養基分離嚴格厭氧菌有特殊性，如果該微生物暴露於空氣中不立即死亡，可以採用通常的方法制備平板，然後置放在封閉的容器中培養，容器中的氧氣可採用化學、物理或生物的方法清除。

對於那些對氧氣更為敏感的厭氧性微生物，純培養的分離則可採用稀釋搖管培養法進行，它是稀釋倒平板法的一種變通形式。

先將一系列盛無菌瓊脂培養基的試管加熱使瓊脂熔化後冷卻並保持在50℃左右，將待分離的材料用這些試管進行梯度稀釋，試管迅速搖動均勻，冷凝後，在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物，將培養基和空氣隔開。

培養後，菌落形成在瓊脂柱的中間。進行單菌落的挑取和移植，需先用一隻滅菌針將液體石蠟--石蠟蓋取出，再用一隻毛細管插入瓊脂和管壁之間，吹入無菌無氧氣體，將瓊脂柱吸出，置放在培養皿中，用無菌刀將瓊脂柱切成薄片進行觀察和菌落的移植。

(7)培養細菌的方法和技巧擴展閱讀

在以上介紹的幾種方法中，平板分離法普遍用於實驗室微生物的分離與純化，稀釋法是液體培養基分離純化常用的方法。

一般情況下可以通過適當改善培養基的條件來培養特點菌種。

如為了得到嗜熱微生物，可在50℃~60℃下進行培養。有時投加相應的抑制劑也能提高菌種分離效果，如在土壤樣品的懸浮液中投加10%的苯酚數滴，可以抑制黴菌和細菌的生長，而有利於放線菌的分離。在培養基中投加一定量的青黴素或鏈黴素能抑制細菌的生長，而有利於黴菌的分離。

⑻ 請你寫出培養細菌、真菌的一般方法．

細菌、真菌培養的一般方法：首先要配製含有營養物質的培養基，可以用牛肉汁加瓊脂熬制，然後把培養基和所有用具進行高溫滅菌，以防雜菌對實驗的干擾，為防止高溫殺死細菌、真菌，要等冷卻後，在進行接種，接種後放在溫暖的地方進行恆溫培養．注意：定期觀察並詳細記錄實驗現象．故細菌、真菌培養的一般方法：配置培養基一高溫滅菌一接種一培養．
故答案為：配置培養基一高溫滅菌一接種一培養．