如何確認一個檢驗方法是否有灰區

㈠ 做完唐氏後的結果是灰區,是什麼意思

灰區就是有一點風險，需要注意進一步檢查，當然也不用太擔心，唐氏篩查即使是高危，其實幾率也大概只有千分之幾。

㈡ 用於臨床分子診斷的材料有哪些及取材時的注意事項

臨床實驗室分子診斷的標准化
作者：佚名 文章來源：互聯網 點擊數：132 更新時間：2009-8-10
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臨床實驗室分子診斷的標准化
李金明 衛生部臨床檢驗中心 100730

[摘要] 臨床實驗室分子診斷涉及病原體核酸、人類基因和各種蛋白等大分子的測定，在許多臨床疾病的診斷方面，有極為關鍵的作用。工作程序、試劑方法的標准化以及標准物質的應用，是保證實驗室檢驗結果准確性的前提。在日常檢驗工作中應用標准物質，將極大地改善不同實驗室間檢驗結果的可比性，從而逐步實現不同實驗室間檢驗結果有條件的互認。

[關鍵詞] 分子診斷；標准化；標准物質

臨床實驗室分子診斷現已成為臨床檢驗各學科分支中最具發展潛力的領域，其涉及病原體核酸、人類基因和各種蛋白等大分子的測定，是臨床疾病診斷中不可或缺的手段。但在臨床應用中，目前仍存在同一實驗室不同檢測批次間或不同實驗室對同一標本檢測間結果的差異，這已成為時常困擾臨床醫師、患者以及實驗室技術人員的普遍性問題。此外，這也是當前不同實驗室間結果有條件互認的一個巨大障礙。而造成不同臨床實驗室間檢驗結果差異的原因，通常包括臨床標本的採集、試劑方法、測定操作、儀器設備的維護校準、數據處理及結果報告、標准物質及質控物的應用等方面的不規范等因素。然而，儀器設備、試劑生產廠家和臨床實驗室本身在臨床實驗室分子診斷標准化中起著非常關鍵的作用。通常，臨床實驗室分子診斷標准化應主要包括以下幾個方面。

一、 臨床標本採集、運送和保存的標准化

臨床標本的採集、運送和保存對檢驗結果往往有決定性的影響，而這些問題常涉及臨床實驗室與其他相關科室的工作分工與協作，此點以前不太被關注或認為是難以控制的問題。但為保證得到正確的檢驗結果，必須制定一個規范的臨床標本採集、運送和保存的程序。

常用的臨床標本通常有血清（漿）、全血、分泌物、組織、尿液、腦脊液及其他體液等，對這些標本的採集、運送和保存的標准化主要是對標本採集的具體方法、所用容器、採集量、採集時所用材料和用具、運送方式和不同時間中標本保存條件等做出明確而又詳盡的規定，寫成標准操作程序（standard operation proceres, SOP）；並對參與該程序運行的相關人員進行必要的培訓，及時與臨床科室進行全面而有效的「對話」（包括工作溝通、定期質量評價、糾錯措施），是保證所制定的程序得到確實執行的必不可少的環節。

二、 臨床標本制備處理和核酸提取方法的標准化

臨床標本的處理對於分子診斷技術，尤其是核酸和基因檢測是極為關鍵的一個環節。在抗原和抗體的免疫學測定中，臨床標本中存在的干擾物質，如類風濕因子（RF）、補體及其他非特異因子等有可能會造成定性測定的假陽性或假陰性結果或使定量測定結果偏高或偏低。在檢測前，對標本進行適當的稀釋、加熱或其他適當的預處理則可去掉這種干擾作用。

在核酸和基因檢測中，臨床標本中存在的血紅蛋白、免疫球蛋白G（IgG）、乳鐵蛋白、核酸酶、尿素、膽鹽、黏蛋白和多糖等，都能在聚合酶鏈反應（PCR）擴增過程起抑製作用，而影響特定靶核酸的檢測。採用簡便而又高效的核酸純化方法，去掉臨床標本中的上述PCR抑制物，是保證得到正確的檢測結果的前提。有些臨床標本如痰[ 6,7]，在核酸提取前，對標本進行適當、有效的預處理，對保證後續核酸提取以及擴增檢測的成功非常關鍵。此外，在臨床分子診斷中，必須建立一個標准化的臨床標本制備處理程序，這對於核酸提取、提取的效率及能否有效地去掉PCR抑制物，也是核酸純化方法標准化的重要指標。

三、檢測試劑和方法的標准化

組成一個可用於臨床分子診斷的試劑和方法模式，可有多種選擇，如PCR因其極高的檢測靈敏度，很容易因以前擴增產物或標本間交叉污染，而出現假陽性結果。此外，標本中PCR抑制物的存在、擴增儀孔間溫度的差異、試劑的濃度不合適以及標本中核酸提取的失敗等，則容易造成假陰性結果[1,8]。因此，試劑生產廠家在研發相應的臨床分子診斷試劑時，必須仔細考慮上述因素，採用最理想的檢測方法。如PCR試劑則應從如何有效避免假陽性和假陰性結果的角度出發，在試劑盒中以dUTP替代4種dNTP中的dTTP，再加上尿苷糖基酶（UNG），使擴增產物DNA中出現天然DNA中所沒有的U，在新的檢測擴增中，如有以前擴增產物的污染，則其可在UNG的作用下被降解。這樣可一定程度地避免以前擴增產物污染所致的假陽性。又如在試劑中加入競爭性或非競爭性內標，則可有效監測核酸提取、擴增及產物分析中出現的誤差，從而避免假陰性結果。

四、檢測結果分析的標准化[9-11]

臨床實驗室分子診斷方法依其對測定結果的表達方式，可分為定性和定量兩大類。定性測定常以「有」或「無」，也即「陽性」或「陰性」來表達測定結果。定量測定的結果則以濃度（如IU/L、IU/ml、μg/L、拷貝數/ml等）的方式表達。定性測定結果確定的依據在於陽性判定值（cut-off）的建立，cut -off 值的確立應盡可能地避免假陽性或假陰性結果的出現。定量測定的依據為使用系列濃度標准品測得的劑量反應曲線（即標准曲線）或是內標的量。

定性測定中設定cut-off 值是為了盡可能地避免假陽性或假陰性結果，但處於cut-off 值一定范圍的測定結果具有某種不確定性，通常稱為「灰區」。在臨床實際檢測中，「灰區」范圍大小的確定以及處於「灰區」范圍內的臨床標本的結果如何報告，常使實驗室技術人員感到困惑。因此，對其進行標准化的程序規定，不但可使實驗室技術人員在報告結果時有規則可循，而且可有效減少或避免錯誤結果的發出。

定量測定的數據處理，常採用不同的數學模式，這不僅可用來改善標准曲線繪制的精密度，從而以較少的數據和計算獲得較為准確的結果，又能省時、省錢。如今微型計算機已在臨床實驗室中迅速普及，各種測定數據處理軟體層出不窮，使得定量測定結果的表達更為准確和有效。例如：實時熒光定量PCR對閾值的設定，標准曲線中斜率、截距和相關系數的允許變化范圍在其數據處理和結果報告的標准操作程序中做出明確規定。在以縱坐標為Ct值（特定靶核酸擴增曲線與閾值線相交時的擴增循環數），橫坐標為起始拷貝數的實時熒光定量PCR（目前絕大部分為此類）時，斜率A = - ，其中E為擴增效率；截距B = log YCt，其中YCt為達到特定靶核酸擴增曲線與閾值線相交時的擴增循環數時的擴增產物的量。因此，斜率A與特定實時熒光PCR的擴增效率有關，當擴增效率為100%，即1時，A為-3.32，可見一個特定實時熒光定量PCR方法，其斜率應≤-3.32，越大說明效率越高。截距B則為原始模板趨向於0時，亦陰性標本檢測的Ct 值，因此，一個實時熒光PCR，如果設定的擴增循環數為40，則其截距B即應≥40。

理想情況下，測定數據處理報告應達到下述要求：（1）通俗易懂。要讓所報告的結果，即使是不熟悉該試驗的人，也能理解。（2）定性測定結果明確。即反應或不反應、陽性或陰性、在正常范圍內或不正常等。（3）定量測定須有一定的線性范圍。（4）處理後得到的數據要具有可重復性。（5）試驗的評價不應建立在假定的正態分布上。（6）應有適當、合理的解釋。

五、標准物質和質控物的應用[2,12-26]

標准物質是臨床分子診斷標准化的核心，也就是說，臨床檢測的某一標本中特定標志物的量值，不管其用什麼方法測定，均可以通過統一的標准物質，而得到相近的結果，其量值均可溯源至同一標准，從而具有可比性。
標准物質可歸類為第一、第二和第三3個等級。一級標准物質數量有限，可使用10至20年，其為凍干品。一級標准可用來校準第二和第三級標准。例如，常規測定中使用的校準物質。國際標准可作為第一級標准物質，一旦第一級標准確定，二級標准可用來維持校準。校準的二級標准可在以國家為基礎的范圍內供應。目前可得到的國際標准物質中特定分析物的濃度一般以IU/L表示，也可用mol/L和g/L來表示，後者通常是分子結構清楚的物質。
在臨床測定中所使用的校準品的值,溯源至一級標準的值,通常由下述幾個校準步驟組成，即標准品和測定方法、緩沖液及其基質、稀釋的控制、最終結果的統計學評價和質量控制等。當建立一個測定方法時，通過上述過程可將一級標准物質的值傳遞至二級、三級標准品和（或）校準品，使得所建立方法的測定值可溯源至一級標准物質。當引入一批新的試劑時，即需要重復這種傳遞過程，從而保持校準的可靠性。
標准物質定值的測定方法可使用決定性方法、參考方法和確定程序的多中心測定。決定性方法（definitive method）是一個具有高精密度及沒有系統偏差的參考方法。當沒有決定性方法可使用時，則可確定一個參考方法。參考方法的變異要大於決定性方法。在蛋白質、核酸和基因檢測中，目前很少有參考方法，國際上對標准品的定值通常是遵循一定的程序，採用多個參考實驗室聯合定值的模式，結果均以IU/L表示，通常是根據一定的統計學方法，以大部分實驗室能檢出的最低含量定為1 IU/L。
質控品則是含量已知的處於與實際標本相同的基質中的特性明確的物質。這種物質通常與其他雜質混在一起，根據其用途可分為室內質控品、室間質評樣本和質控血清盤等3類。室內質控品用於臨床實驗室日常工作的室內質控，其定值應可溯源至二級標准品。室間質評樣本則由主持室間質評的機構制備或監制，通常無需准確的定值，但對於定性測定，則需用各種已有的方法，以明確其陰陽性。質控血清盤為經過篩檢得到的有明確陰陽性的原血清標本，陽性強弱不一，陰性標本則可能含有對測定會產生非特異干擾的物質，陰陽性血清總數之比通常為1:1，血清盤可用於特定的定性免疫測定試劑盒的質量評價，評價內容包括特異性、敏感性、符合率和對可能存在的非特異干擾物的拮抗能力。
目前國際上，可用於臨床分子診斷的國際一級標准物質已有很多，如血清蛋白、免疫球蛋白、細胞因子、激素、一些腫瘤標志物〔甲胎蛋白（AFP）、前列腺特異抗原（PSA）、癌胚抗原（CEA）、人絨毛膜促性腺激素（hCG）等〕、病毒核酸（HAV、HBV、HCV、HIV-1、HPV B19等）和病原體抗原和抗體（HBsAg、抗HBs）等。這些標准物質均由一些國際標准化組織和機構提供，如英國國家生物學標准和質控物研究所（NIBSC）、美國疾病預防控制中心（CDC）、美國病理學家協會（CAP）的國家委員會、國立衛生研究所（NIH）等。在國內，中國葯品生物製品檢定所和衛生部臨床檢驗中心則提供一些相應的國家標准物質。

六、工作程序、試劑方法、標准物質和實驗室結果可比性的關系

從圖1中可見，在臨床分子診斷標准化諸要素中，標准物質是獲得具有可比性結果的前提。但光有標准物質還不行，試劑方法和工作程序的標准化，也是不可或缺的要素。標准物質作為核心，其可作為試劑方法和工作程序是否達到標准化的評價「金標准」。
試劑生產廠家通過使用標准物質對於許多缺乏參考方法的核酸、基因和蛋白等大分子的測定，使其定量具有溯源性，從而在試劑層面上保證使用不同或相同試劑的臨床實驗室間結果具有可比性。臨床實驗室使用標准物質，不但可以在試劑方法使用前，對其測定準確性進行有效的評價，而且，可以充分評價實驗室所制定的所有工作程序對保證檢驗結果准確的有效性。

圖1. 臨床實驗室分子診斷技術標准化諸要素間的關系

綜上所述，標准化是實現臨床實驗室分子診斷結果可比性的前提，而標准化並非是單一因素，其由諸多關鍵性環節組成，核心是標准物質的研製及應用。眾所周知，一個參考系統是由參考方法、標准物質和參考實驗室等三個方面組成的，但臨床實驗室既不可能在其日常工作中普遍使用參考方法，也不可能都成為參考實驗室。唯一可以普遍應用的就是標准物質。標准物質的功能，一是試劑生產廠家在制備試劑盒時，使用標准物質來保證其試劑檢測結果的溯源性；二是臨床實驗室工作人員在實際工作中，使用標准物質來驗證試劑方法、工作程序的實際有效性。這些都是保證日常檢驗結果准確性的必由之路，也是不同實驗室間結果走向有條件互認的前提。

㈢ 我檢查優生這是什麼意思什麼叫灰區是不是有問題

抗體IgG陰性的臨床意義：沒有感染過這類病毒。或感染過，但沒有產生抗體。
抗體IgM陰性的臨床意義：沒有活動性感染，但不排除潛在感染。
抗體IgG陽性的臨床意義：表明孕婦既往有過這種病毒感染。或接種過疫苗。
抗體IgM陽性的臨床意義：表明孕婦近期有這種病毒的活動性感染。

㈣ 新冠核酸檢測時,有的擴增後ct值處於灰區,要重新測試嗎

新冠核酸檢測時,有的擴增後ct值處於灰區,要重新測試。

結果可疑經過重新采樣、重復檢測後，有可能判定為新冠核酸陽性，也有可能復測結果陰性排除新冠病毒感染。因此，發生「結果可疑」時，第一時間就是要重新采樣、重復檢測，以明確結果。

當被告知「結果可疑」時，個人應該怎麼做？首先，按照通知，等待工作人員進行復檢，配合重新采樣；其次，在等待復檢及復檢結果期間應按照相關防控要求，配合隔離管控，直至上級部門復檢結果反饋陰性並通知解除隔離管控；千萬不要擅自亂跑，也不要接觸家人朋友，以免造成疫情傳播。

新冠核酸檢測注意事項

為避免出現嘔吐情況，采樣前2小時請勿進食；檢測前須進行口腔清潔。

為避免影響檢測結果，采樣前30分鍾，請勿吸煙、喝酒和嚼口香糖，為減低相互交叉感染風險，所有在指定區域檢測者需全程佩戴口罩，並准備一個備用口罩。

接受咽拭子采樣時將口罩取下折疊封裝在塑料袋裡；採集樣本後請盡快進行手消毒、戴上備用口罩後離開檢測區，請勿逗留。

㈤ 檢驗檢測新方法確認的內容包括哪些

方法確認具體來講包括了標准方法的證實和非標方法的確認兩個方面。
我們先來看看方法確認和方法證實的目的是什麼：

非標准方法確認目的：
該非標准方法能否合理、合法使用；

標准方法證實目的：
實驗室是否有能力按標准方法開展檢測、校準活動。

接下來我們看看標准方法證實和非標方法的確認應該如何做：

標准方法證實：
從人、機、料、法、環、測幾個方面去證實實驗室有能力滿足標准方法的要求，有能力開展檢測、校準活動。

證實的內容要從七方面去做：
(1) 對執行新標准所需的人力資源的評價，即檢測、校準人員是否具備所需的技能及能力；必要時應進行人員培訓，經考核後上崗；

(2) 對現有設備適用性的評價，諸如是否具有所需的標准、參考物質，必要時應予補充。

(3) 對設施和環境條件的評價，必要時進行驗證。

(4) 對物品制備，包括前處理、存放、輔助試劑等各環節是否滿足標准要求的評價。

(5) 對作業指導書、原始記錄、報告格式及其內容是否適應標准要求的評價。

(6) 對新舊標准進行比較，尤其是差異分析與比對的評價。

(7) 按標准要求進行完整模擬檢測，出具完整結果報告。

標准方法證實應有相關的文件規定及其證實的記錄，標准方法變更後應重新證實。

非標准方法確認：

一個非標方法的確認，在文件中要包括以下內容：

a) 方法適當的標識；
b) 方法所適用的范圍；
c) 檢測或校準樣品是什麼類型，以及對樣品的描述；
d) 被測參數的范圍；
e) 方法對儀器、設備的要求，包括儀器設備關鍵技術性能的要求；
f) 需要用到的的標准物質；
g) 方法對環境條件的要求，對環境穩定周期的要求；
h) 操作步驟，包括：
—樣品的標志、處置、運輸、存儲和准備；
—檢測、校準工作開始前需要進行的檢查；
—檢查設備工作是否正常，需要時，使用前之前對設備進行校準和調整；
—結果的記錄方法；
—安全注意事項；
i) 結果接受（或拒絕）的准則、要求；
j) 需記錄的分析數據；
k) 不確定度評定。

非標方法的技術確認，需要從五個方面確認：

(1)使用參考標准或標准物質進行比較；
(2)與其他方法所得的結果進行比較；
(3)實驗室間比對；
(4)對影響結果的因素作系統性評審；
(5)根據對方法的理論原理和實踐經驗的科學理解，對所得結果不確定度進行的評定。
技術確認要盡可能全面，並需有確認記錄。

㈥ 檢驗檢測新方法確認的內容包括哪些

方法確認具體來講包括了標准方法的證實和非標方法的確認兩個方面。
我們先來看看方法確認和方法證實的目的是什麼：

非標准方法確認目的：
該非標准方法能否合理、合法使用；

標准方法證實目的：
實驗室是否有能力按標准方法開展檢測、校準活動。

接下來我們看看標准方法證實和非標方法的確認應該如何做：

標准方法證實：
從人、機、料、法、環、測幾個方面去證實實驗室有能力滿足標准方法的要求，有能力開展檢測、校準活動。

證實的內容要從七方面去做：
(1) 對執行新標准所需的人力資源的評價，即檢測、校準人員是否具備所需的技能及能力；必要時應進行人員培訓，經考核後上崗；

(2) 對現有設備適用性的評價，諸如是否具有所需的標准、參考物質，必要時應予補充。

(3) 對設施和環境條件的評價，必要時進行驗證。

(4) 對物品制備，包括前處理、存放、輔助試劑等各環節是否滿足標准要求的評價。

(5) 對作業指導書、原始記錄、報告格式及其內容是否適應標准要求的評價。

(6) 對新舊標准進行比較，尤其是差異分析與比對的評價。

(7) 按標准要求進行完整模擬檢測，出具完整結果報告。

標准方法證實應有相關的文件規定及其證實的記錄，標准方法變更後應重新證實。

非標准方法確認：

一個非標方法的確認，在文件中要包括以下內容：

a) 方法適當的標識；
b) 方法所適用的范圍；
c) 檢測或校準樣品是什麼類型，以及對樣品的描述；
d) 被測參數的范圍；
e) 方法對儀器、設備的要求，包括儀器設備關鍵技術性能的要求；
f) 需要用到的的標准物質；
g) 方法對環境條件的要求，對環境穩定周期的要求；
h) 操作步驟，包括：
—樣品的標志、處置、運輸、存儲和准備；
—檢測、校準工作開始前需要進行的檢查；
—檢查設備工作是否正常，需要時，使用前之前對設備進行校準和調整；
—結果的記錄方法；
—安全注意事項；
i) 結果接受（或拒絕）的准則、要求；
j) 需記錄的分析數據；
k) 不確定度評定。

非標方法的技術確認，需要從五個方面確認：

(1)使用參考標准或標准物質進行比較；
(2)與其他方法所得的結果進行比較；
(3)實驗室間比對；
(4)對影響結果的因素作系統性評審；
(5)根據對方法的理論原理和實踐經驗的科學理解，對所得結果不確定度進行的評定。
技術確認要盡可能全面，並需有確認記錄。

㈦ 檢測丙型肝炎病毒抗體結果提示是灰區,這是什麼意思

如果抗-HCV陽性的話應該就感染了 丙型肝炎分為急性丙型肝炎和慢性丙型肝炎兩種： (一)急性丙型肝炎的診斷標准 1．流行病學史：有輸血史、應用血液製品史或明確的丙型肝炎暴露史。輸血後或使用血液製品後，急性丙型肝炎的潛伏期為2～16周(平均7周)。 2．臨床表現：全身乏力、食慾減退、惡心和右季肋部疼痛等，少數伴低熱，輕度肝腫大，部分患者可出現脾腫大，少數患者可出現黃疽。部分患者無明顯症狀，表現為隱匿性感染。 3．實驗室檢查：谷丙轉氨酶多呈輕度和中度升高，抗-HCV（丙型肝炎病毒抗體）和HCV RNA（丙型肝炎病毒核糖核酸陽性）。HCV RNA常在谷丙轉氨酶恢復正常前轉陰，但也有谷丙轉氨酶恢復正常而HCV RNA持續陽性者。 急性丙型肝炎患者的谷丙轉氨酶和穀草轉氨酶水平一般較低，但也有較高者。急性丙型肝炎患者的血清白蛋白、凝血酶原活動度和膽鹼酯酶活性降低較少。急性丙肝如果不及時治療，多半病人會轉化為慢性丙型肝炎。 (二)慢性丙型肝炎的診斷 1．診斷依據：丙型肝炎病毒感染超過6個月，或發病日期不明、無肝炎史，但肝臟組織病理學檢查符合慢性肝炎，或根據症狀、體征、實驗室及影像學檢查結果綜合分析，亦可診斷。 慢性丙型肝炎患者中，約30％谷丙轉氨酶水平正常，約40％谷丙轉氨酶水水平低於2倍正常值上限。雖然大多數此類患者只有輕度肝損傷，但有部分患者可發展為肝硬化。病程較長的慢性肝炎、肝硬化或重型肝炎時血清白蛋白、凝血酶原活動度和膽鹼酯酶活性可明顯降低，其降低程度與疾病的嚴重程度成正比。 抗-HCV檢測適用於高危人群篩查，也可用於丙型肝炎感染者的初篩，一般獻血者首先必須檢測抗-HCV，如果為陽性，這份血樣肯定不合格，絕對不能成為獻血者。如果抗-HCV陽性可以確診丙型肝炎感染，但是一些透析、免疫功能缺陷和自身免疫性疾病患者可出現抗-HCV假陽性，因此，一旦發現抗-HCV陽性，需要立刻檢測HCV RNA，如果為陽性可以確診為丙型肝炎病人，此時也有傳染性，需要治療。

㈧ hiv金標法篩查檢測是不是包含HIV所有的亞型和種類

HIV有兩個主要亞型，其中HIV-2主要在非洲南部流行，盡管如此我國基本上所有的金標法HIV檢測都是兩種亞型一起檢測的。
另外，快速法的准確性問題需要從兩個方面回答：1.和受檢者感染HIV的時間有關，如果在檢測的灰區，那麼即使感染也無法檢出，一般應該在懷疑感染後至少3個月後進行檢查。2.一般醫院的檢驗科都是HIV初篩實驗室，因此所配備的HIV檢測試劑都是敏感性比較高的，一般不會漏檢HIV陽性的患者。