全血離心方法如何獲得血清

1. 從血液如何獲取血清

最簡單的方法是 放在那裡 第2天去標本分層了，上層為血清下層為細胞。

常用的方法是將標本放在試管里離心，上層是血清。

2. 全血分離獲得血清的方法及步驟 謝謝

材料與方法

1.1 血清採集 MG患者全血來自2004～2005年就診於遼寧中醫學院附屬醫院的門診患者。根據典型臨床表現、新斯的明試驗、低頻重復電刺激及單纖維肌電圖等確診，無其他自身免疫性疾病，未經其他免疫抑制治療，並參照1994年版《中醫病證診斷療效標准》辨證為脾腎虛型。正常人血清取自同時期健康志願者。-70 ℃冰箱冷凍保存備用。

1.2 主要試劑 固相pH梯度干膠條IPG strip（Amersham公司產品， 非線性pH 3～10， 7 cm）。3-〔3-（膽醯胺基丙基）二甲氨基〕丙磺酸鹽｛3-〔（3-cholamidopropyl） dimethylamino〕-1-propanesul-fonate， CHAPS｝，二硫蘇糖醇（DL-dithiothreitol， DTT），三丁基膦（tributyl phosphine， TBP），尿素，硫脲，碘乙醯胺（iodoacetamide， IAA），丙烯醯胺（acrylamide）、甲雙丙烯醯胺（N， N'-methylenebi-sacrylamide），四甲基乙二胺（N， N， N， N-tetram-ethyl-ethylenediamine， TEMED），過硫醯胺（am-monium persulfate， APS），三羥甲基氨基甲烷〔tris （hydroxymethyl） aminomethane〕、甘氨酸（glycine， Gly）和十二烷基磺酸鈉（sodium dodecyl sulfate， SDS）均為Bio-Rad公司產品。瓊脂糖為華美生物公司產品。其他試劑均使用國產分析純試劑。所有溶液均用MilliQ水配製。

1.3 主要儀器 高速冷凍離心機，德國Eppendorf公司產品;EttanTMIPGphorⅡ，Amersham Biosci-ences公司產品;P-2000分光光度儀，Hitachi公司產品;SE-600電泳儀，Amersham公司產品;純水裝置，Millipore公司產品;GS-710光密度掃描儀，Bio-Rad公司產品;冷卻水循環系統，Cole-Parmer公司產品;Bruker-Daltonics AutoFlex TOF-TOF LIFTMass Spectrometer，美國Bruker-Daltonics公司產品;LCQ Deca XP Plus，美國Thermo Finnigan公司產品。

1.4 雙向電泳

1.4.1 血清總蛋白質的提取及定量 血清-70 ℃反復凍融4次後，用Agilent Multiple Affinity Re-moval Column處理去除高豐度蛋白。使用Agilent 5K超濾管進行濃縮除鹽，凍干回收的樣品，-70 ℃保存。用裂解液（9 mol/L 尿素、4% CHAPS、 65 mmol/L DTT和cocktail酶抑制劑）進行復溶，並採用考馬斯亮藍法進行蛋白質定量。

1.4.2 等電聚焦 自-20 ℃取出的膠條，室溫下平衡10 min，以500 μg上樣量在每份樣本中加入上樣緩沖液（8 mol/L尿素、2% CHAPS、1% Bio-lyte和1% TBP）以及標准蛋白質分子，上樣於泡脹槽中，加入礦物油覆蓋。程序設置如下:30 V 12 h，500 V 1 h，1 000 V 1 h，8 000 V 6 h。恆溫20 ℃。等電聚焦電泳後IPG膠條在平衡液1（Tris-base 50 mol/L 、尿素 6 mol/L、甘油 30%、SDS 2%、溴酚藍0.002%和DTT 100 mg）中於振盪器上振盪 15 min; 然後置入平衡液2（成分同平衡液1，用 400 mg 碘乙醯胺代替100 mg DTT）同樣於振盪器上振盪15 min。

1.4.3 SDS-PAGE垂直電泳 採用12.5%的均勻SDS2聚丙烯醯胺凝膠（水23.2 ml，30%丙烯醯胺溶液32.46 ml，1.5 mol/L Tris-HCl緩沖液pH 8.8 20 ml，10% SDS 0.8 ml，10% APS 0.4 ml，TEMED 3.76 μl，膠總體積80 ml）。將平衡後的IPG膠條移至凝膠的上方，膠條一端放入低分子量蛋白質標准，0.5%的瓊脂糖封膠。上下槽加入電極緩沖液（Tris 5 mmol/L，Gly 192 mmol/L和SDS 0.1%）。初始電流為每塊膠40 mA，電泳20 min，然後以每塊膠60 mA電流，直至溴酚藍前沿。

1.4.4 銀染色 電泳結束後，採用硝酸銀染色法，通過固定，硝酸銀染色，顯影，停顯及脫色，至背景清晰。

1.5 圖像分析 每個樣品常規進行3次二維電泳，用GS-710光密度掃描儀對電泳後的膠圖分別進行掃描，所得掃描圖像輸入計算機，採用Image-master軟體對圖像進行背景消減、蛋白質點檢測和校正，獲取蛋白質點的位置坐標和表達量等分析。選取 Ratio ≥1.5的蛋白質點認為有差異。所有數據的統計分析均採用SPSS 12.0軟體，統計學分析採用 t 檢驗。

1.6 基質輔助激光解吸電離-飛行時間質譜分析 用手術刀片切下膠上目標條帶，進行切膠、膠上胰蛋白酶酶解 20 h ，抽提酶解肽段，Zip Tip脫鹽後點樣，行基質輔助激光解吸電離-飛行時間質譜（matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry， MALDI-TOF-MS）分析（飛行管長2.7 m，加速電壓 20 kV ，反射電壓23 kV）。將第1級質譜得到的肽片段質量指紋圖譜、肽質量指紋圖譜與第2級質譜得到的肽序列信息一起用來檢索蛋白質資料庫，找出匹配的蛋白質。

1.7 資料庫檢索 將質譜鑒定所得的肽質量指紋譜（peptide mass fingerprinting， PMF）數據於Bio-Works（Thermo Finnigan， San Jose， CA）軟體搜索相應的庫。搜索使用的資料庫為IPI human蛋白庫（SEQUEST結果過濾參數為:當Charge+1，Xcorr≥1.9;當Charge+2，Xcorr≥2.2;當Charge+3，Xcorr≥3.75;其中DelCN≥0.1）以及NCBI上 Homo sapiens的非冗餘蛋白庫（rendant data-base）。檢索參數為胰蛋白酶解;氨基酸固定修飾方式為脲甲基半胱氨酸;模式為單同位素峰;肽片斷最大誤差控制在100 ppm;肽片斷最大分子量誤差為±0.5 Da;每個肽允許有1個不完全裂解位點。

2 結果

2.1 脾腎虛型重症肌無力患者血清雙向電泳圖譜 的建立及分析 經2-DE技術及銀染色後，得到了兩組血清的雙向凝膠電泳圖，並於相同的條件下重復實驗3次。在正常對照組細胞蛋白質組雙向電泳圖譜上可觀察到1 463±179個蛋白點，而脾腎虛型重症肌無力組可見到1 508±89個蛋白點

3. 如何獲取血清問題

serum，血清，詳細資料見網路http://ke..com/view/42775.htm?fr=aladdin

先糾錯，紅細胞是血細胞而非生物大分子。

嚴格的講，添加了抗凝劑的血液在高速離心機離心後得到的上清液為血漿而非血清，前者與後者相比含有多種凝血因子比如纖維蛋白原或纖維蛋白。離心的方法可以使血液分層，使血細胞（紅細胞、白細胞）、血液中的其他成分（血小板、血漿清蛋白、球蛋白等）沉澱於管底，從而獲取新鮮血漿。血清可以用離心新鮮膠凍狀血凝塊獲得。

常用的注射器過濾器一般是0.46um和0.22um兩種規格，可以過濾掉部分細菌、液體中的雜質等，理論上可以通過過濾方式得到血漿，但實際上沒人這么做——因為紅細胞直徑為6~9um很快就能堵塞過濾器濾孔，使得過濾沒法進行；手術中自體血液回輸機的過濾不同於普通的注射器過濾器。

綜上所述，用注射器過濾得到的血漿和離心機獲得的差異不大，但注射器過濾基本上是不可能實現的。

4. 如何制備血清和血漿

全血不抗凝分離的是血清，抗凝分離的血漿
相對來說抗凝收集血漿量還是比較多一點的，且不易出現溶血現象的發生

收集好的全血分離血清（漿）時一般採用低溫低速離心效果比較好，速度太大會使紅細胞壓積，造成溶血，最終影響測定

如將收集好的全血，靜置一些時間（加抗凝劑一般靜置半小時左右，不加抗凝劑一般靜置一小時左右），然後採用低溫低速離心10分鍾（人血2000rpm左右、小鼠1000rpm左右、大鼠2500rpm左右），上層黃色液體為收集的血清或血漿，如上層液體出現紅色則出現溶血，應棄用

5. 抽的血怎樣弄成血清

從人體里出過的全血，然後打入抗凝管裡面過以後。然後再震盪機上面正當自然的話。就可以把血清分離出來了。然後的話，就可以進行化驗，或者是其他的進行一些項目啦！這個應該說是化驗室最常規用的一種辦法。

6. 實驗室如何製造全血、血清、血漿

全血可以直接採取人的或動物的
血液凝固後最上層的清澈淡黃色的液體為血清
血漿：離開血管的全血經抗凝處理後，通過離心沉澱，所獲得的不含細胞成分的液體，即血漿。

7. 如何獲取血清問題

serum，血清，詳細資料見網路http://ke..com/view/42775.htm?fr=aladdin
先糾錯，紅細胞是血細胞而非生物大分子。
嚴格的講，添加了抗凝劑的血液在高速離心機離心後得到的上清液為血漿而非血清，前者與後者相比含有多種凝血因子比如纖維蛋白原或纖維蛋白。離心的方法可以使血液分層，使血細胞（紅細胞、白細胞）、血液中的其他成分（血小板、血漿清蛋白、球蛋白等）沉澱於管底，從而獲取新鮮血漿。血清可以用離心新鮮膠凍狀血凝塊獲得。
常用的注射器過濾器一般是0.46um和0.22um兩種規格，可以過濾掉部分細菌、液體中的雜質等，理論上可以通過過濾方式得到血漿，但實際上沒人這么做——因為紅細胞直徑為6~9um很快就能堵塞過濾器濾孔，使得過濾沒法進行；手術中自體血液回輸機的過濾不同於普通的注射器過濾器。
綜上所述，用注射器過濾得到的血漿和離心機獲得的差異不大，但注射器過濾基本上是不可能實現的。

8. 如何制備血清和血漿

血清和血漿均是不含細胞（包括血小板）等有形成分的血液液體部分，其主要區別是血清不含凝血因子和血小板，血漿則含有凝血因子，它們的制備方法如下：

1、血清的制備：獲得的血液不能抗凝，盛於離心管或可以離心的器皿中，靜置或置37℃環境中促其凝固，待血液凝固後，將其平衡後離心（一般為3000rpm，離心 5～10min），得到的上清液即為血清，可小心將上清吸出（注意切勿吸出細胞成分），分裝備用。

2、血漿制備：在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝劑（抗凝劑：血液 = 1：9，將血液加到一定量後顛倒混勻，離心（離心條件同上）後所得的上清液即為血漿。初用者最好將上清移至另一清潔容器，吸出血漿時用毛細吸管貼著液面逐漸往下吸，切忌不能吸起細胞成分。

3、富含血小板血漿制備：將獲得的血液經800rpm，離心5min，其上清即為富含血小板血漿。

(8)全血離心方法如何獲得血清擴展閱讀：

鑒別方法

1、血清

血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反應被激活，血液迅速凝固，形成膠凍。凝血塊收縮，其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清，也可於凝血後經離心取得。在凝血過程中，纖維蛋白原轉變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原，這一點是與血漿最大的區別。

而在凝血反應中，血小板釋放出許多物質，各凝血因子也都發生了變化。這些成分都留在血清中並繼續發生變化，如凝血酶原變成凝血酶，並隨血清存放時間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區別之處。但大量未參加凝血反應的物質則與血漿基本相同。為避免抗凝劑的干擾，血液中許多化學成分的分析，都以血清為樣品。

2、血漿

血漿是血液的液體成分，血細胞懸濁於其中。人體含有2750-3300毫升血漿，約占血液總體積的55%。血漿的絕大部分是水（體積的90%），其中溶解的物質主要是血漿蛋白，還包括葡萄糖、無機鹽離子、激素以及二氧化碳。血漿的主要功能是運載血細胞，同時也是運輸分泌產物的主要媒介。

將新鮮血液離心，使血細胞沉降，上層淡黃色清液即是血漿。血漿與血清的區別是血清中不含纖維蛋白原等凝血因子。

參考資料來源：網路-血清

9. 如何制備血清和血漿

血清和血漿均是不含細胞（包括血小板）等有形成分的血液液體部分，其主要區別是血清不含凝血因子和血小板，血漿則含有凝血因子，它們的制備方法如下：
（1）血清的制備：獲得的血液不能抗凝，盛於離心管或可以離心的器皿中，靜置或置37℃環境中促其凝固，待血液凝固後，將其平衡後離心（一般為3000rpm，離心
5～10min），得到的上清液即為血清，可小心將上清吸出（注意切勿吸出細胞成分），分裝備用。
（2）血漿制備：在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝劑（抗凝劑：血液
=
1：9，將血液加到一定量後顛倒混勻，離心（離心條件同上）後所得的上清液即為血漿。初用者最好將上清移至另一清潔容器，吸出血漿時用毛細吸管貼著液面逐漸往下吸，切忌不能吸起細胞成分。
（3）富含血小板血漿制備：將獲得的血液經800rpm，離心5min，其上清即為富含血小板血漿。

10. 在實驗室如何制備全血血清和血漿樣品

1、區別血液經抗凝處理後的全部血液為全血；離心除去血細胞後所得到的淡黃色液體為血漿。 如血液不經抗凝處理，讓其自行凝固，則在抽血後的一段時間內，血液會自動在一系列凝血因子的作用下發生凝集，血液首先凝固成一個整體，再經過一段時間或用離心機離心，血液中凝固的部分會與一些清澈淡黃色的液體分離開，這些液體稱為血清。血清與血漿從表面上看似乎沒有什麼不同，但其內在的主要區別是血清中不含纖維蛋白原，是未經抗凝處理過的血液凝固後得到的。抽血做化驗中常遇到某些化驗要求用血清測定、用全血測定、用血漿測定，即是指血液標本的三種主要處理方式和要求。2、用途不同血清多用於血液生化、免疫等方面的測定；血漿多用於凝血等方面的測定；全血則多用在血細胞、血常規、血沉等方面的測定。血液的抗凝處理需要抗凝劑，選用什麼抗凝劑應根據具體的實驗要求進行選擇。