重組體篩選的方法和技巧

① 基因工程過程中篩選重組體的方式有什麼和什麼

一般有抗性篩選和藍白斑顯色篩選。

② 植物基因工程的內容(基因克隆方法、連接、轉化、篩選及鑒定)

1）目的基因制備和分離：一般通過文庫篩選、同源序列比對等方法進行克隆。
2）DNA重組載體的構建：選擇植物表達載體，根據載體選擇或添加酶切位點，然後進行酶切連接，構建重組載體。
3）轉化：轉化方法有多種：農桿菌法：將重組載體用電擊或熱激的方法將其轉入農桿菌中，再用農桿菌侵染植物；基因槍法：將重組載體與金粉混合後用基因槍轟擊組織塊；此外還有其他一些方法。
4）植物陽性植株的篩選和鑒定：一般先用抗性初次篩選後，在基因水平上用PCR擴增目的片段或做Southern雜交；在RNA水平上做半定量或Nouthern雜交.
5）基因表達產物的分離純化和鑒定：這是蛋白水平上的鑒定，一般是提取純化蛋白，做蛋白分析。

③ DNA克隆的重組體的篩選

通 過轉化、轉染或感染，重組體DNA分子被導入受體細胞，經適當塗布的培養板培養得到大量轉化子菌落或轉染噬菌斑。由於每一重組體只攜帶某一段外源基因，而 轉化或轉染時每一受體菌又只能接受一個重組體分子，如何將眾多的轉化菌落或轉染噬菌斑區分開來，並鑒定哪一菌落或噬菌斑所含重組DNA分子確實帶有目的基 因，這一過程即為篩選或選擇。根據載體體系、宿主細胞特性及外源基因在受體細胞表達情況不同，可採取直接選擇法或非直接選擇法。

④ 重組DNA的的鑒定方法有哪些

通過目的基因的特性來篩選、比如用青黴素或者其他抗性環境來擇選載入成功的重組體、活下來的就是目的基因表達成功的、

⑤ 如何篩選含有重組體的陽性菌落

重組體一般會帶有標志基因（報告基因）如抗青黴素，抗赤黴素，熒光蛋白等，可通過在培養基內加入相應的抗生素來淘汰掉沒有發生重組的細菌，或通過其他手段挑取目的菌落（熒光蛋白可在紫光燈下挑取）

⑥ 重組體篩選的常規方法。

根據載體 的遺傳特徵篩選重組子，如α-互補、抗生素基因等。現在使用的許多載體都帶有一個大腸桿菌的DNA的短區段，其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的調控序列和前146個氨基酸的編碼信息。在這個編碼區中插入了一個多克隆位點(MCS)，它並不破壞讀框，但可使少數幾個氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影響功能，這種載體適用於可編碼β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主細胞。因此，宿主和質粒編碼的片段雖都沒有酶活性，但它們同時存在時，可形成具有酶學活性的蛋白質。這樣，lacZ基因在缺少近操縱基因區段的宿主細胞與帶有完整近操縱基因區段的質粒之間實現了互補，稱為α-互補。由α-互補而產生的LacZ+細菌在誘導劑IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在時產生藍色菌落，因而易於識別。然而，當外源DNA插入到質粒的多克隆位點後，幾乎不可避免地導致無α-互補能力的氨基端片段，使得帶有重組質粒的細菌形成白色菌落。這種重組子的篩選，又稱為藍白斑篩選。如用藍白斑篩選則經連接產物轉化的鈣化菌平板37℃溫箱倒置培養12-16hr後，有重組質粒的細菌形成白色菌落。

⑦ 分子克隆技術包括哪些基本步驟

1、提取DNA基因組或則mRNA（可用試劑盒完成，一般問題都能解決）。
2、設計引物，PCR擴增目的片段。
3、選擇合適質粒載體，進行酶連接，構建亞克隆子（有商品化質粒可供選擇）。
4、用構建好的質粒轉化感受態細胞（方法生物技術實驗書中有詳細介紹）。
5、篩選陽性克隆。

⑧ 如何篩選和鑒定DNA重組體

通過目的基因的特性來篩選、
比如用青黴素或者其他抗性環境來擇選載入成功的重組體、
活下來的就是目的基因表達成功的、

⑨ 插入失活和插入表達法篩選重組體的主要差別是什麼

插入失活是外源目的基因插入到該載體的標記基因上，導致該基因失活，在相應的選擇培養基上生長，由於不能表達該蛋白，不能生長從而篩選出重組體。
插入表達篩選是由於外源基因插入到標記基因前的負調控序列，是該序列不能發揮作用，最終標記基因能夠表達，從而篩選出重組子。