銅肽分析方法

㈠ 常用來測定蛋白質含量的方法有哪些優缺點是什麼

1、凱氏定氮法

凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品將有機氮都轉變成無機銨鹽，然後在鹼性條件下將銨鹽轉化為氨，隨水蒸氣蒸餾出來並為過量的硼酸液吸收，再以標准鹽酸滴定，就可計算出樣品中的氮量。

由於蛋白質含氮量比較恆定，可由其氮量計算蛋白質含量，故此法是經典的蛋白質定量方法。

優點：可用於所有食品的蛋白質分析中；操作相對比較簡單；實驗費用較低；結果准確，是一種測定蛋白質的經典方法；用改進方法（微量凱氏定氮法）可測定樣品中微量的蛋白質。

缺點：凱氏定氮法只是一個氧化還原反應,把低價氮氧化並轉為氨鹽來測定,而不能把高價氮還原為氮鹽的形式,所以不可以測出物質中所有價態的氮含量。

2、雙縮脲法

雙縮脲法是一個用於鑒定蛋白質的分析方法。雙縮脲試劑是一個鹼性的含銅試液，呈藍色，由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配製。

當底物中含有肽鍵時（多肽），試液中的銅與多肽配位，配合物呈紫色。可通過比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應的靈敏度為5-160mg/ml。鑒定反應蛋白質單位1-10mg。

優點：測定速度較快，干擾物質少，不同蛋白質產生的顏色深淺相近。

缺點：①靈敏度差； ② 三羥甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA等會干擾該反應。

3、酚試劑法

取6支試管分別標號，前5支試管分別加入不同濃度的標准蛋白溶液，最後一支試管加待測蛋白質溶液，不加標准蛋白溶液，在室溫下放置30分鍾，以未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照，於650nm波長處測定各管中溶液的吸光度值。

優點：靈敏度高，對水溶性蛋白質含量的測定很有效。

缺點：①費時，要精確控制操作時間；②酚法試劑的配製比較繁瑣。

4、紫外吸收法

大多數蛋白質在280nm波長處有特徵的最大吸收，這是由於蛋白質中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在，可用於測定0.1～0.5mg/mL含量的蛋白質溶液。

取9支試管分別標號，前8支試管分別加入不同濃度的標准蛋白溶液，1號試管不加標准蛋白溶液，最後一支試管加待測蛋白質溶液，而不加標准蛋白溶液，每支試管液體總量通過加入蒸餾水補足而保持一致，將液體混合均勻，在280nm波長處進行比色，記錄吸光度值。

優點：簡便、靈敏、快速，不消耗樣品，測定後能回收。 

缺點：①測定蛋白質含量的准確度較差，專一性差； ②干擾物質多，若樣品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等能吸收紫外光的物質，會出現較大的干擾。

5、考馬斯亮藍法

考馬斯亮藍顯色法的基本原理是根據蛋白質可與考馬斯亮藍G-250 定量結合。當考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合後，其對可見光的最大吸收峰從 465nm 變為 595nm。

在考馬斯亮藍 G-250 過量且濃度恆定的情況下，當溶液中的蛋白質濃度不同時，就會有不同量的考馬斯亮藍 G-250 從吸收峰為 465nm 的形式轉變成吸收峰為 595nm 的形式，而且這種轉變有一定的數量關系。

一般情況，當溶液中的蛋白質濃度增加時，顯色液在 595nm 處的吸光度基本能保持線性增加，因此可以用考馬斯亮藍 G-250 顯色法來測定溶液中蛋白質的含量。

優點：靈敏度高，測定快速、簡便，干擾物質少，不受酚類、游離氨基酸和緩沖劑、絡合劑的影響，適合大量樣品的測定。

缺點：由於各種蛋白質中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此用於不同蛋白質測定時有較大的偏差。

㈡ 大物藍銅勝肽精華吸收快嗎會不會搓泥

大物精華蠻好吸收的，一般不用擔心搓泥問題。精華都需要均勻的拍在臉部、按壓至吸收。精華輕拍在臉上會形成一種網狀膜，保證持續的補水，需要過幾分鍾會全部吸收。
如果在這時候就上後續保養品的話，就會破壞這層網狀膜，有時候會出現搓泥現象。所以建議你等精華先吸收後，再接著上後續的護膚品。

㈢ 雙縮脲試劑檢測蛋白質原理是什麼

雙縮脲試劑檢測蛋白質原理是雙縮脲在鹼性溶液中能與硫酸銅反應產生紅紫色絡合物，此反應稱為雙縮脲反應。

蛋白質分子中含有很多和雙縮脲結構相似的肽鍵，因此也能起雙縮脲反應，形成紅紫色絡合物。

雙縮脲試劑本是用來檢測雙縮脲，由於蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵，因此也能與銅離子在鹼性溶液中發生雙縮脲反應。當底物中含有肽鍵時，試液中的銅與多肽配位，絡合物呈紫色。可通過比色法分析濃度。

雙縮脲法測定蛋白質的優缺點：

優點：雙縮脲法測定蛋白質的測定范圍是1~10mg蛋白質，操作簡單、快捷。既適合手工操作，又適合自動化分析，重復性好、線性關系好，雙縮脲試劑可以長期保存。

缺點：靈敏度差，測定范圍窄，樣品需要量大，不同的蛋白質產生顏色的深淺相近，因此它常用於需要快速，但並不需要十分精確的蛋白質測定。

干擾測定的物質包括有：在性質上是氨基酸或肽的緩沖液，如TrIs緩沖液，因為它們產生陽性呈色反應，銅離子也容易被還原，有時出現紅色沉澱。

㈣ 如何進行小分子肽定量分析

既然你已經知道小分子肽的序列可以找公司做一個抗體，再做一個western檢測就可以了

㈤ signal4.0信號肽如何分析

還可以，現在基本上都用這個。不過要會看結果圖，因為結果中沒有直接的給出是否含有信號肽以及信號肽的位置。給樓主一個中文版本信號肽預測工具網頁鏈接，結果中直接展示是否含有信號肽及信號肽的位置，用起來還是比較方便的。

㈥ 生物等效性的研究常用的分析方法

色譜法：用於大多數葯物檢測
免疫法：多用於蛋白質多肽類物質檢測。
微生物學方法：可用於抗生素葯物的確定。

㈦ 如何選擇質譜分析方法

如何選擇質譜分析方法？
——是用於研究蛋白，核苷酸還是小分子，這里也許有理想的答案

正如其它先進的技術一樣，質譜技術沖擊帶來了市場的膨脹，造成了多選擇性的產品，專業性的術語，這也就無形中增加了研究人員選擇合適於他們的系統的困難性。正如西雅圖Fred
Hutchinson癌症研究中心蛋白組主任Philip
Gafken所說的那樣，「無論大家相信與否，這種技術並沒有如它們所被應用的那樣被逐漸的了解，研究人員沒有認識到利用這種技術的真正目的。」

比如說三級四極質譜儀(Triple Quadrupole Mass Spectrom）是一種相對便宜一點，但掃描速率（scan
rate）也相對比較慢的質譜儀，而目前精良的傅立葉變換離子迴旋共振質譜儀（Fourier transform ion cyclotron
resonance，FTICR）則在精確性和解析度都是首屈一指的，當然價錢也會比較貴。

Gafken說道，「人們總是傾向於購買一些頂級的產品，但是事實上，這些應用中很大一部分都能由一些相對便宜一點的儀器來完成」，所以我們需要購買適用於各自需要的正確儀器。

1.Protein Chemist級

對於protein
chemist而言，需要得到的僅僅就是知道他在研究的是什麼。通過分析一種蛋白的免疫共沉澱的成份，或者利用二維電泳識別特殊的蛋白斑點，protein
chemist就可以了解這種蛋白質的生物學特性了。對於這種應用，快速而並不需要太精確的方法就可以滿足需要了。

推薦系統：MALDI+TOF

理由：肽指紋圖譜（PePtide Mass Fingerprinting，PMF）和基質輔助激光解析電離飛行時間(matrix-assisted
laser desorption ionization-time of flight，MALDI-TOF)質譜是可以考慮的首選方法。

TOF是一種簡單的質譜分析系統，靈敏度高，能進行從10原子質量單位到上百上千單位的片段分析。另一個TOF的優點就是分析的速度，伊利諾斯大學的化學副教授Neil
Kelleher就表示「這就是它為什麼能與MALDI配合工作的原因，你可以以一種高重復率在激光上操作，每秒獲得許多光譜。」

而MALDI則是一種首先就可以考慮的方法，但是並不適合如何人，來自華盛頓大學的化學教授，Journal of the American
Society for Mass Spectrometry雜志的編輯Michael
Gross就說，「如果你的免疫共沉澱中有20或30個蛋白，每一個有50條特殊帶，那麼你就有1000條帶，利用MALDI並不能在氣相中打到全部的」，為了得到更多的信息，必需要考慮一個可以提供序列詳細信息的任意構造，比如MALDI-TOF-TOF，或者一個更加靈敏的儀器——離子捕獲。

2. 靈敏級

難題總是出在事實本質的詳細內容當中，對於蛋白而言，那就是指翻譯後修飾了。比如說，假設你正在研究包含有乙醯化和三甲基化修飾的組蛋白，但是一個標準的質譜也許無法區別出這兩種修飾，這時就需要高精度的儀器了，這種儀器能獲得二位或者四位小數位的報告。

推薦系統：LC+ESI+FTICR with ECD

理由：准確度高的儀器可以區別對於所謂的正常（nominal-mass）儀器而言相同的分子，一般認為選擇液相色譜（liquid
chromatography，LC）與電噴霧電離化（electrospray ionization，ESI），以及傅立葉變換離子迴旋共振質譜儀（Fourier
transform ion cyclotron resonance，FTICR）相結合能達到高精度和高靈敏度的要求。也許還需要電子捕獲解離技術（electron
capture dissociation，ECD）來獲得可重復的結果。

雖然經典的碰撞誘導解離技術(collision inced dissociation，CID）介導的串聯質譜方法可以進行斑點修飾（spot
modifications），但是對於識別包含了修飾的蛋白殘基而言，這並不是一種理想的方法，這主要是由於解離蛋白的時候常常會降解多肽的蛋白修飾，然而ECD則可以保持這種修飾的完整性。不過來自辛辛那提大學的Patrick
Limbach提出一個忠告：這些儀器偏差范圍小，因此可能會丟失掉一些未預期到的情況，比如天冬醯胺殘基的脫醯胺，或者磷酸化。

㈧ 雙縮脲法測定蛋白質的含量實驗分析與討論怎麼寫

雙縮脲法測定蛋白質含量的干擾因素有哪些：

• 雙縮脲法測定蛋白質含量的干擾因素有三羥甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA。
  

• 雙縮脲法是一個用於鑒定蛋白質的分析方法。雙縮脲試劑是一個鹼性的含銅試液，呈藍色，由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配製。當底物中含有肽鍵時，試液中的銅與多肽配位，配合物呈紫色。可通過比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應的靈敏度為5~160mg/ml。