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工業上用什麼方法去除核酸

發布時間:2022-04-23 23:23:44

Ⅰ 去除核酸中蛋白質的方法有哪些

可以用氯仿抽提之後離心啊,這樣的話,離心後分三層,下層有機層中有一些脂溶性的雜質,中間層白色絮狀沉澱是蛋白,上清液中即含有核酸;
現在也有很多試劑盒,是可以把核酸掛在柱子上,把蛋白質等雜質離心掉,這個方法即快捷又方便。(摘抄自網路,供參考)

Ⅱ 提蛋白時如何去掉核酸

這跟你提取蛋白質的方法有關。
如用蛋白質等電點沉澱法,那麼蛋白質沉澱了,核酸還在水溶液中,離心棄上清液便可去掉核酸。
因此 設計實驗的時候,要綜合考慮蛋白質的特性和核酸特性。
如果你有已知方法 可拿出來探討一下。

Ⅲ 怎樣提取核酸中DNA,RNA

高中生物必修2中有DNA的粗提取實驗,你可以去看看。
DNA:1.實驗材料必須准備充足。本實驗所用的實驗材料是雞血細胞液,由活雞的鮮血經沉澱後獲得。每組(2個學生)需用5 mL 雞血細胞液,則每班(50人)至少需要130 mL,而雞血細胞液與雞血的體積比為1:3,這樣每班至少需要390 mL 雞血細胞液。宰殺1隻中等大小的活雞,一般可得120 mL 左右的鮮血,因此,1個班實驗需要買4隻活雞。如果不具備購買活雞的條件,也可以到市場售活雞處去索取雞血,但所帶燒杯中必須提前放入抗凝劑。

2.盛放雞血細胞液的容器,最好是塑料容器。雞血細胞破碎以後釋放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由於細胞內DNA的含量本來就比較少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就會更少。因此,實驗過程中最好使用塑料的燒杯和試管,這樣可以減少提取過程中DNA的損失。

3.獲取較純凈的DNA的關鍵步驟。

(1)充分攪拌雞血細胞液DNA存在於雞血細胞的細胞核中。將雞血細胞液與蒸餾水混合以後,必須用玻璃棒沿一個方向快速攪拌,使雞血細胞加速破裂,並釋放出DNA。

(2)沉澱DNA時必須用冷酒精實驗前必須准備好大量的體積分數為95%的酒精,並在冰箱(至少5S以下)中至少存放24 h。

(3)正確攪拌含有懸浮物的溶液實驗步驟3、5、7,都需要用玻璃棒攪拌。教師應提醒學生注意,在進行步驟3、5時,玻璃棒不要直插燒杯底部,而且攪拌要輕緩,以便獲得較完整的DNA分子。進行步驟7時,要將玻璃棒插入燒杯中溶液的中間,用手緩慢轉動510 min。

RNA:酵母RNA的提制(濃鹽法)
一、目的
學習和掌握從酵母中提制RNA的原理和方法,以加深對核酸性質的認識。
二、原理
酵母含 RNA 2.67%~10.0%,DNA很少(0.03%~0.516%),而且菌體容易收集,RNA也易於分離,所以選用酵母為實驗材料。
RNA提制過程是先使RNA從細胞中釋放,並使它和蛋白質分離,然後將菌體除去。再根據核酸在等電點時溶解度最小的性質,將pH調至2.0~2.5,使RNA沉澱,進行離心收集。
提取RNA的方法很多,在工業生產上常用的是稀鹼法和濃鹽法。前者利用稀鹼溶解細胞壁,使RNA釋放出來,這種方法提取時間短,但RNA在此條件下不穩定,容易分解;後者在加熱的條件下,利用高濃度的鹽改變細胞膜的透性,使RNA釋放出來,此法易掌握,產品顏色較好。
三、儀器、試劑和材料
1.儀器
(1)量筒(50ml)
(2)三角瓶(100ml)
(3)燒杯(250ml,50ml,10ml)
(4)布氏漏斗(40mm)
(5)吸濾瓶(125ml)
(6)表面皿(6cm)
(7)751型分光光度計
(8)離心機(4000r/min)
(9)恆溫水浴
(10)葯物天平
(11)烘箱
2.試劑
(l)NaCl(化學純)
(2)6mol/L HCI
(3)95%乙醇(化學純)
3.材料
鮮酵母或乾酵母;pHO.5~5.0的精密試紙。
四、操作步驟
1.提取
稱取鮮酵母 159或乾酵母粉 2.5g,倒入 100ml三角瓶中,加 NaCl 2.5g,水25ml,攪拌均勻,置於沸水浴中提取lh。
2.分離
將上述提取液用自來水冷卻後,裝入大離心管內,以4000r/min離心10min,使提取液與菌體殘渣等分離。
3.沉澱RNA
將離心得到的上清液傾於50ml燒杯內,並置入放有冰塊的250ml燒杯中冷卻.待冷至10℃以下時,用6mol/L HCI 小心地調節pH值至2.0~2.5(注意嚴格控制pH)。調好後繼續於冰水中靜置10min,使沉澱充分,顆粒變大。
4.洗滌和抽濾
上述懸浮液以 4000r/min離心 10min,得到 RNA沉澱。將沉澱物放在 10ml小燒杯內,用95%的乙醇 5~10ml充分攪拌洗滌,然後在布氏漏鬥上用射水泵抽氣過濾,再用 95%乙醇5~10ml淋洗 3次。
5.乾燥
從布氏漏鬥上取下沉澱物,放在6cm表面皿上,鋪成薄層,置於80℃烘箱內乾燥。將乾燥後的RNA製品稱重,存放於乾燥器內。
6.含量測定
將乾燥後RNA產品配製成濃度為 10—50pg/ml的溶液,在751型分光光度
計上測定其260nm處的吸光度,按下式計算RNA含量:

式中,A260為260nm處的吸光度;L為比色杯光徑(cm);0.024為lml溶液含lμg
RNA的吸光度。
五、結果處理
根據含量測定的結果按下式計算提取率

六、注意事項
1.用濃鹽法提取RNA時應注意掌握溫度,避免在20~27℃之間停留時間過長,因為這是磷酸二酯酶和磷酸單酯酶作用活躍的溫度范圍,會使RNA降解而降低提取率。
2.加熱至90~100℃使蛋白質變性,破壞兩類磷酸酯酶,有利於RNA的提取。

Ⅳ 核酸的提取方法有幾種

DNA的提取方法有7種:酚抽提法、甲醯胺解聚法、玻璃棒纏繞法、異丙醇沉澱法、表面活性劑快速制備法、加熱法快速制備、鹼變性快速制備。核酸是一類生物聚合物,是所有已知生命形式必不可少的組成物質。核酸是脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的總稱。
脫氧核糖核酸(英文DeoxyriboNucleicAcid,縮寫為DNA)是生物細胞內含有的四種生物大分子之一核酸的一種。DNA攜帶有合成RNA和蛋白質所必需的遺傳信息,是生物體發育和正常運作必不可少的生物大分子。DNA由脫氧核苷酸組成的大分子聚合物。脫氧核苷酸由鹼基、脫氧核糖和磷酸構成。其中鹼基有4種:腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)。

Ⅳ 核酸的分離方法有什麼

核酸(nucleic acid)是遺傳信息的攜帶者,是基因表達的物質基礎.無論是進行核酸結構還是功能研究,首先需要對核酸進行分離和純化.核酸樣品質量將直接關繫到實驗的成敗.核酸分離、純化原則:1.保持核酸分子一級結構的完整性.因為遺傳信息全部儲存在一級結構之中,核酸的—級結構還決定其高級結構的形式以及和其他生物大分子結合的方式.2.分離核酸原則:1)溫度不要過高;2)控制pH值范圍(pH值5-9); 3)保持一定離子強度; 4)減少物理因素對核酸的機械剪切力.
在核酸分離提取中最重要的是要防止核酸的生物降解,細胞內或外來的各種核酸酶能消化核酸鏈中的磷酸二酯鍵,破壞核酸一級結構.所用器械和一些試劑需高溫滅菌,提取緩沖液中需加核酸酶抑制劑.
常用的DNA酶抑制劑有1.金屬離子螯合劑:如EDTA-Na2(乙二胺四乙酸二鈉)、8-羥基喹啉.2.陰離於型表面活性劑如SDS,該試劑除對核酸酶有抑製作用外,還能使蛋白質變性,並與變性蛋白結合成帶負電荷的復合物,該復合物在高鹽溶液中沉澱.
常用的RNA酶(RNAase)抑制劑有:1.皂土(bentonite )作用機制:皂土帶負電荷,能吸附RNase,使其失活.2. DEPC(二乙基焦碳酸鹽) (C2H5OCOOCOOC2H5)粘性液體,很強的核酸酶抑制劑.作用機制:與蛋白質中His結合使蛋白變性.

Ⅵ 去除核酸中的蛋白質的方法有哪些

想要在已經抽提的蛋白標本中去除核酸,可以考慮以下幾種方法:

  1. 凝膠過濾,這是很容易去除小分子雜質物質的方法。

  2. 如果蛋白樣本和核酸的分子大小差別比較大,可以考慮用超濾的方法。

    超濾是以壓力為推動力的膜分離技術之一,以大分子與小分子分離為目的。

  3. 加入核酸酶消化三個小時。

    比如加一定量的DNAase 和RNAse酶消化。

  4. 核酸用AIEX也可以除去,不過要選擇合適的pH值。

  5. 使用超聲把核酸降解。

  6. 用氯仿抽提之後離心。

Ⅶ 如何除實驗室核酸污染

實驗室去除核酸污染推薦採納歐菲姆OXY-30000的過氧化氫干霧消毒方案,它巧妙地利用了特殊的干霧滅菌設備+諾福過氧化氫殺孢子劑(高純低濃度)的完美配合,組成無懈可擊的空間清潔消毒方案。
而過氧化氫消毒技術當中,據大數據得知,採用全球領先干霧技術打造的歐菲姆OXY-30000消毒機,是行業專業消毒去除PCR核酸污染的佼佼領航者。OXY-30000精妙之處在於其專業的解決方案,避免了過氧化氫蒸汽的腐蝕性以及解決了擴散性問題。其特點為:1、滅菌效果好,生物指示劑挑戰降低6lg對數值,能徹底殺滅環境中的MRSA、VRE、結核分枝桿菌、芽孢、病毒和多重耐葯的革蘭陰性菌(鮑曼不動桿菌);2、活性氫氧基團能氧化DNA、RNA污染源及核酸酶等分子物質,而諾福過氧化氫殺孢子劑中的活性銀離子,可以抑制DNA聚合酶等有害病菌的生長,從而更有效的防止外源DNA的干擾;
3、1.5小時完成滅菌,人員可進入。預防核酸實驗室環境空氣污染及核酸片氣溶膠污染,及快速高效去除實驗室核酸污染源;4、小於3微米干霧氣體,擴散性優越,能擴散到每一個角落,空氣中做布朗運動,消毒干霧無孔不入,專門對付小分子核酸污染源物質;
具備國際化的CNAS檢測報告和消毒產品備案,可以提供完善的符合歐盟GMP要求的驗證文件和報告。

Ⅷ 蛋白純化怎麼去除核酸

1、根據所選蛋白的性質,選擇合適的介質和條件,想辦法把蛋白結合在柱子上,(有tag的話用這個方法最好了),然後用高鹽(0.5-3M NaCl)洗,一般會洗下來一個峰,就是被洗下來的核酸了。
2、試試在高鹽條件下加Mn2+,因為高鹽可以讓核酸和蛋白分離,而Mn2+對核酸沉澱有一定的效果。
但是要十分小心的是,這類蛋白本身的天然性質就是要結合核酸的,有的時候核酸去除干凈了,蛋白也沉澱了,所以沒那麼容易,很多小條件要結合所選的蛋白自己去摸索。

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