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研究受體一般用什麼方法

發布時間:2022-04-18 10:44:28

❶ 怎樣用生化手段證明一個蛋白是受體

一、酵母雙雜交系統:酵母雙雜交系統是當前廣泛用於蛋白質相互作用組學研究的一種重要方法。其原理是當靶蛋白和誘餌蛋白特異結合後,誘餌蛋白結合於報道基因的啟動子,啟動報道基因在酵母細胞內的表達,如果檢測到報道基因的表達產物,則說明兩者之間有相互作用,反之則兩者之間沒有相互作用。將這種技術微量化、陣列化後則可用於大規模蛋白質之間相互作用的研究。在實際工作中,人們根據需要發展了單雜交系統、三雜交系統和反向雜交系統等。Angermayr等設計了一個SOS蛋白介導的雙雜交系統。可以研究膜蛋白的功能,豐富了酵母雙雜交系統的功能。此外,酵母雙雜交系統的作用也已擴展至對蛋白質的鑒定。
二、噬菌體展示技術:在編碼噬菌體外殼蛋白基因上連接一單克隆抗體的DNA序列,當噬菌體生長時,表面就表達出相應的單抗,再將噬菌體過柱,柱上若含目的蛋白,就會與相應抗體特異性結合,這被稱為噬菌體展示技術。此技術也主要用於研究蛋白質之間的相互作用,不僅有高通量及簡便的特點,還具有直接得到基因、高選擇性的篩選復雜混合物、在篩選過程中通過適當改變條件可以直接評價相互結合的特異性等優點。目前,用優化的噬菌體展示技術,已經展示了人和鼠的兩種特殊細胞系的cdna文庫,並分離出了人上皮生長因子信號傳導途徑中的信號分子。
三、等離子共振技術:表面等離子共振技術(Surface Plasmon Resonance,SPR)已成為蛋白質相互作用研究中的新手段。它的原理是利用一種納米級的薄膜吸附上「誘餌蛋白」,當待測蛋白與誘餌蛋白結合後,薄膜的共振性質會發生改變,通過檢測便可知這兩種蛋白的結合情況。SPR技術的優點是不需標記物或染料,反應過程可實時監控。測定快速且安全,還可用於檢測蛋白一核酸及其它生物大分子之間的相互作用。
四、熒光能量轉移技術:熒光共振能量轉移(FRET )廣泛用於研究分子間的距離及其相互作用; 與熒光顯微鏡結合,可定量獲取有關生物活體內蛋白質、脂類、DNA 和RNA 的時空信息。隨著綠色熒光蛋白(GFP)的發展,FRET 熒光顯微鏡有可能實時測量活體細胞內分子的動態性質。提出了一種定量測量FRET效率以及供體與受體間距離的簡單方法,僅需使用一組濾光片和測量一個比值,利用供體和受體的發射譜消除光譜間的串擾。該方法簡單快速,可實時定量測量FRET 的效率和供體與受體間的距離,尤其適用於基於GFP 的供體受體對。
五、抗體與蛋白質陣列技術:蛋白晶元技術的出現給蛋白質組學研究帶來新的思路。蛋白質組學研究中一個主要的內容就是研究在不同生理狀態下蛋白水平的量變,微型化,集成化,高通量化的抗體晶元就是一個非常好的研究工具,他也是晶元中發展最快的晶元,而且在技術上已經日益成熟。這些抗體晶元有的已經在向臨床應用上發展,比如腫瘤標志物抗體晶元等,還有很多已經應用再眼就的各個領域里。
六、免疫共沉澱技術:免疫共沉澱主要是用來研究蛋白質與蛋白質相互作用的一種技術,其基本原理是,在細胞裂解液中加入抗興趣蛋白的抗體,孵育後再加入與抗體特異結合的結合於Pansobin珠上的金黃色葡萄球菌蛋白A(SPA),若細胞中有正與興趣蛋白結合的目的蛋白,就可以形成這樣一種復合物:「目的蛋白—興趣蛋白—抗興趣蛋白抗體—SPA|Pansobin」,因為SPA|Pansobin比較大,這樣復合物在離心時就被分離出來。經變性聚丙烯醯胺凝膠電泳,復合物四組分又被分開。然後經Western blotting法,用抗體檢測目的蛋白是什麼,是否為預測蛋白。這種方法得到的目的蛋白是在細胞內天然與興趣蛋白結合的,符合體內實際情況,得到的蛋白可信度高。但這種方法有兩個缺陷:一是兩種蛋白質的結合可能不是直接結合,而可能有第三者在中間起橋梁作用;二是必須在實驗前預測目的蛋白是什麼,以選擇最後檢測的抗體,所以,若預測不正確,實驗就得不到結果,方法本身具有冒險性。
七、pull-down技術:蛋白質相互作用的類型有牢固型相互作用和暫時型相互作用兩種。牢固型相互作用以多亞基蛋白復合體常見,最好通過免疫共沉澱(Co-IP) 、Pull-down技術或Far-western法研究。Pull-down技術用固相化的、已標記的餌蛋白或標簽蛋白(生物素-、PolyHis-或GST-),從細胞裂解液中釣出與之相互作用的蛋白。通過Pull-down技術可以確定已知的蛋白與釣出蛋白或已純化的相關蛋白間的相互作用關系,從體外傳路或翻譯體系中檢測出蛋白相互作用關系。

❷ 鑒定目的基因是否導入受體細胞一般採用什麼方法

檢測目的基因是否導入受體細胞的方法是:導入時用的運載體上如果有抗性基因(標記基因),就可以通過檢測抗性基因的表達來檢測,比如運載體PBR322 就帶有抗四環素基因和抗氨卞青黴素基因 要麼就等目的基因在受體細胞中表達以後,然後根據特定的性狀來區分. 還有DNA、mRNA、蛋白質雜交法. 合成所最終需要的蛋白質,即最終所需要的產品.

❸ 細胞膜受體研究方法

天,這不是一個網路知道可以回答的問題,如果你是做科研的話。目前還沒有一種方法可以研究所有膜受體。
你的分子是蛋白還好辦些,購買它的抗體。然後有幾種方法可以參考,western先確定是否存在該受體;用Ab-蛋白聯合的柱子去抓目的蛋白,然後做質譜,可以拿到部分序列,再搜索是否存在符合度高的已知蛋白;有了已知蛋白,查找其抑制劑或抗體,用競爭阻斷的方法反過去確證你的問題。
如果是非蛋白分子,那需要做很多工作,比如分子能否進入細胞?它引起什麼變化?是否能量依賴等?這些有助於確定方向。

❹ 簡述激素受體的研究方法

從分子上面做起,很大的。現在國外用得比較新的使基因挑除。也可以用單抗。總之比一個博士論文差不多。大工程啊。去專業外文文獻資料庫查一下吧。

如何研究信號傳導通路請問研究某種受體或蛋白的下游信號傳導通路,實驗設計的一般方法,都有哪些謝謝

在KEGG或BioCarta這些pathway資料庫里找到你感興趣的通路,在pathway圖上找到你感興趣的蛋白後就能確認它的下游。實驗方法大體上就是上調(瞬時表達、mimics)或下調(Knockout、RNAi)你的Gene of Interest,再檢測下游的蛋白發生了上調還是下調,看看你的GOI和它們什麼聯系。

❻ 基因工程的受體系統有哪些研究

作為目的基因表達的受體系統,早期應用的主要是大腸桿菌和酵母,已有定型的工業生產工藝,由這些受體系統生產的基因工程產品已投放市場。

近年來,高等植物細胞和哺乳動物細胞也被用作目的基因表達的受體系統,獲得了一系列轉基因細胞株和少數轉基因動植物個體。此外被用作目的基因表達受體系統的還有傷寒桿菌、巨大芽孢桿菌和藍藻等。

❼ 葯效學的研究方法

葯效學研究方法很多,概括講可分綜合和分析法。所謂綜合法是指在整體動物身上進行,是在若干其它因素綜合參與下考察葯物作用,根據實驗動物情況不同,可分為正常動物法和實驗治療法。醫學教|育網整理所謂分析方法是採用離體臟器,例如離體腸管、離體心臟、血管、子宮及離體神經肌肉制備等,單一地考察葯物對某一部分的作用。深入研究還包括細胞水平、分子水平的分析研究

❽ 受體影響寫作活動的方式與要素有哪些

第一節 寫作主體的「 受體意識」
寫作「受體」的閱讀(欣賞),是寫作主體勞動成果的接受者,這與讀者(欣賞者)的身份是一致的。但受體與讀者是有區別的。它們的區別表現在哪些地方呢?
傳統討論的受體,是讀者。寫作主體也閱讀自已的勞動成果,閱讀自已的作品,不叫受體。只有去閱讀別人的作品(文本),我們才稱之曰「受體」。因為作家、詩人也要閱讀與欣賞。
寫出來的文本是要給人看的。如同你生產的產品,要拿出去經銷。那些消費者需要你的產品么。一般來講,寫作者要研究受體的心態、愛好、趣味。一句話,你就是要研究讀者。有人說我寫的文章是給兩百年以後的人看的。你信嗎?

一、受體的含義及受體意識的作用
(一)「受體」的含義
1、含義。寫作受體即寫作行為活動的接受對象,也就是讀者。從信息傳播的角度來看,受體是信息傳遞的必要組成部分。一個信息傳遞過程是以預先設定的交際雙方作為前提和基礎的。信息傳遞的主體把信息置入一定的載體傳遞出去,直到受體把信息從一定的載體和載體符號中轉換出來,傳遞過程才算完成。這表明,盡管傳遞信息是主體獨自決定的行為,但這一行為的付諸實現,卻必須在交際的另一方——受體願意且又可能進入交際過程的前提下才具有現實性。這使受體在交際過程中獲得了不可或缺的地位,使受體與主體構成相反相成的夥伴關系。在這種關系中,受體在主體通過載體發出信息之後成為完全主動的一方,他可以自由選擇如何處理主體發出的信息。主體只能在傳遞信息的同時,在信息載體中為受體盡可能充分地接受信息提供某些條件,除此之外,別無它法。
寫作受體是指從寫作這種活動中接受信息的人。它的存在與否關繫到寫作活動能否最終完成,因此寫作受體是寫作系統中不可或缺的一個要素。英國文豪約翰生甚至說:「寫作的唯一目的,是幫助讀者更能享受或忍受生活。」(轉引自《餘光中散文》)受體是接受主體之簡稱。即詩的閱讀、詩的批評。廣義上包括詩的傳播主體,即詩的創造主體與接受主體之間的傳播媒介者。

2、受體與讀者(欣賞者)的區別
讀者是相對於文章而存在的,其閱讀習慣、審美趨向等直接受制於寫作主體的表達,盡管他們也可以通過一定的途徑將自己的感受和意見反饋到作者那裡,但其閱讀與反饋帶有「滯後性」。而受體是相對於寫作活動中的主體而存在的。受體對寫作活動的參與雖然同樣具有被動特點,但他們的變被動為主動的行為特徵更加明顯,並且他們介入的時間也不再是過去單純的「閱讀後」,在現代傳媒技術條件下,他們甚至可以在寫作行為中實施自己的介入。而寫作活動是一項特殊的活動,即使寫作主體已經「脫稿」,也並不意味著這一次寫作活動的結束,它還必須等待寫作受體的參與(閱讀認可),沒有受體參與的寫作活動是不完全的。有時來自受體方面的影響,在某些寫作活動中直接產生決定性作用。比如秘書為領導者代擬講話稿。
隨著寫作活動的結束,寫作的主體不復存在,則受體也自動轉變為傳統意義上的讀者了。
1)讀者是相對於文章而存在,受體相對於寫作主體而存在。
2)「受體」對寫作活動的介入的時間不再是單純的「閱讀後」,在現代傳媒條件下,他們可以在主體寫作過程中「介入」。(如秘書為領導寫講話稿,領導或班子成員在秘書寫作前和寫作中會提出建設性的意見;如新聞報導,受眾會參與,熱線電話。沒有受體參與的寫作活動是不完全的。如電視劇寫完開拍也會邊拍邊接納受體的意見)。
3) 寫作活動結束,其寫作主體不復存在,則受體轉變為傳統意義上的讀者(欣賞者)。

3、受體的分類
從最直觀的層面上看,受體」指的就是文章的接受者,包括文章的把關人(如編輯、領導)和廣大的讀者。這個層面的「受體」,粗略地可分為:
1)指定讀者、特定讀者、一般讀者、批審讀者
「指定讀者」,指文章所指定的讀者,它一般是某一個具體的人,或某一具體的群體。如日常書信的寫作,它的讀者是收信人;報請一類公文的寫作,它的讀者是自己的上級;通知決定一類公文,它的讀者是自己的下屬;規章制度一類文書的製作,它的讀者對象是單位、組織的每一個成員。「特定讀者」,指讀物所限定的「消費者」,它不是指向某一個人或某一個具體的群體,而是指向「某一類」。如科技文章的寫作,它的讀者是研究相關問題的專家和專業技術人員;少兒讀物,它的閱讀對象是青少年;「經濟消息」,它的讀者是從事經濟工作的有關人員。「一般讀者」,指讀物所廣泛適應的「消費者」,讀物對他們的年齡、性別、職業、文化程度、身份都沒有要求,只要具有一定的閱讀能力,並且有這方面的閱讀興趣,就可以拿來讀。「批審讀者」,主要指文章的把關人,包括單位領導人、報紙雜志以及出版社的編輯等。作者寫作,通常會考慮編輯是否同意的因素。一些特殊的文體,如公文,還得考慮領導的意志。
2)基本讀者、可能性讀者、理想讀者、非理想讀者
「基本讀者」指自己讀物所應擁有的讀者。「可能性讀者」不在基本讀者之列,但由於種種原因,有些讀者可能會讀到自己的文章,成為自己的「可能性讀者」。「理想讀者」是指完全能理解自己的寫作意圖、能接受自己獨特的表達方式的讀者,也就是平時所說的「知音」、「粉絲」。「非理想讀者」與此相反,是在理解自己寫作意圖及表達方式方面存在一定困難的讀者。
3)多層讀者
多層讀者的疊用,某種意義上說是一種敘述策略。它利用特定讀者的「接受場」以達到自己預定的敘述效果。如朱光潛寫《談美書簡》,採用的是書信體,茅盾寫《腐蝕》,採用的是日記體等。
由於劃分的標准不同,我們還可以從地區、性別、年齡上劃分。如港台讀者、大陸讀者、國外讀者;男性讀者、女性讀者;老年讀者,少兒讀者。等。

❾ 受體是如何被發現的

高濃度的CO2可以通過植物關閉氣孔來減少氣體交換和CO2的吸收。但是,目前為止,我們仍不知道植物如何環境中感知CO2,以及植物對高濃度CO2響應的分子機制。2020年5月10日,BioRxiv預印本雜志在線發表了來自波蘭波茲南大學的 Łukasz Gałgański課題組題為「Mitogen-

該研究研究表明有絲分裂原激活的蛋白激酶(MAPKs)是植物CO2的受體蛋白。這個結論還是有些意外的,畢竟MAPKs激酶研究歷史已經有幾十年了,從未有報道表明該激酶是CO2的受體。不過,值得一提的是,該研究結論仍然在預印本上,還有待同行評議正式發表。

氣孔由葉片表面上的成對保護細胞形成,以控制蒸騰水分損失和光合作用的CO2利用。植物需要精確調節氣孔,以適應環境壓力並在各種環境壓力下生存。氣孔的打開可以由藍光和紅光、葉片的細胞空間中的CO2濃度降低及相對空氣濕度增加觸發。而脫落酸(ABA)(見下圖1),黑暗,[CO2]升高和相對空氣濕度降低又能觸發氣孔關閉。氣孔關開的變化受到保衛細胞中離子濃度和滲透活性溶質的變化的控制,這些溶質驅動滲透水吸收或從保衛細胞流出(見下圖1)。

CO2濃度升高觸發氣孔關閉的感測和信號轉導機制仍然不太清楚。其中參與該過程的分子成分,包括βCA1和βCA4、HT1、OST1/SnRK2.6、SLAC1和ALMT12 / QUAC1陰離子通道等被鑒定為參與氣孔CO2信號轉導(見下圖2)。但是這些組件之間的詳細互動和調節機制以及包括未知CO2/HCO3-感測器在內的其他關鍵組件仍有待確定。

之前研究表明,ABA調節高濃度的CO2誘導的氣孔關閉,而CO2又能影響ABA誘導的氣孔閉合。然而,在沒有ABA和ABA信號轉導的關鍵因子的情況下,高[CO2]濃度仍然可以誘導氣孔的關閉。之前研究表明,MPK12和MPK4激酶是通過HT1失活而促進SLAC1介導的高CO2濃度誘導的氣孔關閉途徑的重要上游介質。此外,煙草中的NtMPK4沉默會破壞高[CO2]濃度和黑暗誘導的氣孔關閉運動。

該研究表明MPK4激酶在體內和體外都能被CO2激活,並且能夠結合CO2。此外,與與細菌感染引起的MPK4激活不同,CO2誘導的MPK4激活獨立於上游調節激酶MKK1和MKK2。此外,研究還表明一旦被激活,MPK4容易被碳酸氫鹽失活。

綜上所述,該研究認為將應激反應性MPK4作為CO2受體,為植物將各種環境信號的整合機制提供了新的思路。因此,該文認為MPK4是調節光合作用CO2可用性的主要樞紐,可能有助於尋找增加植物吸收CO2的新方法。不過該文章的結論還有待進一步驗證,並不能作為確認的研究結果來討論。

❿ 用作重組DNA受體的感受態細胞可以用哪些方法獲得

想要感覺到受態細胞可以採用標本取樣的方式進行獲得。

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