細胞周期分析方法

『壹』 流式細胞周期結果 怎麼分析

細胞周期至少有兩種做法，最常見的如下圖分析：

比如這個圖，是DNA染料單染，其中粉色部分是G1期，黃色部分是S期，綠色部分是G2/M期。中間的分布一般是通過FlowJo這樣的軟體計算自動生成的。

『貳』 Br檢測細胞周期結果如何用Flow J分析

你要先在FSC和SSC散點圖上gate出細胞，然後SSC-W和SSC-Hgate出單細胞，然後在用BrdU/PI 散點圖打開才能開的比較清楚的圖。

『叄』 stk1 細胞周期分析 1.22怎麼樣

1、細胞周期指由細胞分裂結束到下一次細胞分裂結束所經歷的過程,所需的時間叫細胞周期時間.可分為四個階段（見圖）：① G1期(gap1),指從有絲分裂完成到期DNA復制之前的間隙時間；② S期(synthesis phase),指DNA復制的時期；③ G2期(gap2),指DNA復制完成到有絲分裂開始之前的一段時間；④ M期又稱D期(mitosis or division),細胞分裂開始到結束.2、從增殖的角度來看,可將高等動物的細胞分為三類：①連續分裂細胞,在細胞周期中連續運轉因而又稱為周期細胞,如表皮生發層細胞、部分骨髓細胞.②休眠細胞暫不分裂,但在適當的刺激下可重新進入細胞周期,稱G0期細胞,如淋巴細胞、肝、腎細胞等.③不分裂細胞,指不可逆地脫離細胞周期,不再分裂的細胞,又稱終端細胞,如神經、肌肉、多形核細胞等等.細胞周期的時間長短與物種的細胞類型有關,如：小鼠十二指腸上皮細胞的周期為10小時,人類胃上皮細胞24小時,骨髓細胞18小時,培養的人了成纖維細 胞18小時,CHO細胞14小時,HeLa細胞21小時.不同類型細胞的G1長短不同,是造成細胞周期差異的主要原因.3、流式細胞結果圖各參數的意義：前面講過,常用的流式細胞術分析細胞周期的方法是依據細胞DNA含量（橫坐標）來分析的：G1期：細胞DNA復制還沒有開始,也是DNA含量最少的,即流式檢測結果圖的第一個峰；S 期：細胞開始復制,到完成復制,是一個一倍DNA到二倍DNA的過程,在流式結果圖中顯示期跨度特別大（第二個不高但很寬的峰）；G2期：DNA復制完成至分裂的一段時間,此時細胞內含二倍DNA,在流式結果圖中的第二個峰；M期：細胞分裂過程,此時細胞內也是二倍DNA,用DNA含量的方法是無法與G2期分開,所以有第三峰明顯升高時報告：G2/M期阻滯.上圖是DOS系統下分析細胞周期的一個示意圖.不同的機器分析結果參數表示略有不同,但主要看G1、G2、S三個期的數值即可.1、縱坐標Cell Number：即計數到的有效細胞數；2、橫坐標DNA Content：即DNA量,為什麼用DNA量來區別各周期我們等下再講；3、G1、G2、S三期在上圖已經用箭頭標示；4、右側數字含義：Mean G1=195.4即G1期DNA含量平均值為195.4；%G1=73.6即G1期細胞數占總數的73.6%；以此類推

『肆』 怎樣用modfit分析細胞周期

採用PI染色法,以流式細胞術通過檢測DNA含量分析細胞凋亡,比較ModFit LT及CELLQuest軟體的分析數據.結果顯示:ModFit LT與CELLQuest軟體均可分析細胞凋亡,ModFit LT軟體更客觀、准確.我們建議使用ModFit LT軟體進行細胞凋亡相對定量分析,CELLQuest軟體只用於細胞凋亡的定性分析.

『伍』 請教細胞周期分析原理和分析結果解釋

博凌科為生物科技-為你解答：1、細胞周期指由細胞分裂結束到下一次細胞分裂結束所經歷的過程，所需的時間叫細胞周期時間。可分為四個階段（見圖）：① G1期(gap1)，指從有絲分裂完成到期DNA復制之前的間隙時間；② S期(synthesis phase)，指DNA復制的時期；③ G2期(gap2)，指DNA復制完成到有絲分裂開始之前的一段時間；④ M期又稱D期(mitosis or division)，細胞分裂開始到結束。2、從增殖的角度來看，可將高等動物的細胞分為三類：①連續分裂細胞，在細胞周期中連續運轉因而又稱為周期細胞，如表皮生發層細胞、部分骨髓細胞。②休眠細胞暫不分裂，但在適當的刺激下可重新進入細胞周期，稱G0期細胞，如淋巴細胞、肝、腎細胞等。③不分裂細胞，指不可逆地脫離細胞周期，不再分裂的細胞，又稱終端細胞，如神經、肌肉、多形核細胞等等。細胞周期的時間長短與物種的細胞類型有關，如：小鼠十二指腸上皮細胞的周期為10小時，人類胃上皮細胞24小時，骨髓細胞18小時，培養的人了成纖維細 胞18小時，CHO細胞14小時，HeLa細胞21小時。不同類型細胞的G1長短不同，是造成細胞周期差異的主要原因。3、流式細胞結果圖各參數的意義：前面講過，常用的流式細胞術分析細胞周期的方法是依據細胞DNA含量（橫坐標）來分析的：G1期：細胞DNA復制還沒有開始，也是DNA含量最少的，即流式檢測結果圖的第一個峰；S 期：細胞開始復制，到完成復制，是一個一倍DNA到二倍DNA的過程，在流式結果圖中顯示期跨度特別大（第二個不高但很寬的峰）；G2期：DNA復制完成至分裂的一段時間，此時細胞內含二倍DNA，在流式結果圖中的第二個峰；M期：細胞分裂過程，此時細胞內也是二倍DNA，用DNA含量的方法是無法與G2期分開，所以有第三峰明顯升高時報告：G2/M期阻滯。上圖是DOS系統下分析細胞周期的一個示意圖。不同的機器分析結果參數表示略有不同，但主要看G1、G2、S三個期的數值即可。1、縱坐標Cell Number：即計數到的有效細胞數；2、橫坐標DNA Content：即DNA量，為什麼用DNA量來區別各周期我們等下再講；3、G1、G2、S三期在上圖已經用箭頭標示；4、右側數字含義：Mean G1=195.4即G1期DNA含量平均值為195.4；%G1=73.6即G1期細胞數占總數的73.6%；以此類推

『陸』 細胞周期檢測方法即PI法的操作步驟

1. 細胞培養：取對數生長期的細胞，按1×106cells/ mL以1mL接種24孔板或2mL接種於6孔板內，進行所需的處理（比如加入葯物），特定時間後終止培養，進行下一步的實驗。

2. 細胞固定： 800rpm離心5min，收集細胞沉澱，棄上清，用預冷PBS洗滌兩次，加入預冷75%乙醇，於4℃固定4h以上。

3. 細胞染色：1500rpm離心5min，棄上清，以3mL的PBS洗滌一次，加入400uL溴化乙錠（PI，50ug/mL），100ul RNase A（100ug/mL ），4℃避光孵育30min。

4. 流式分析： 以標准程序用流式細胞儀檢測，一般計數2~3萬個細胞，結果用細胞周期擬和軟體ModFit分析。

『柒』 細胞周期數據分析求助

細胞周期至少有兩種做法，最常見的如下圖分析：

這個是BrdU和7-AAD方法檢測細胞周期。紅色的gate就是G1期，綠色的就是S期，橙色的就是G2/M期。BrdU, PI, 或者EdU方法和這個一樣分析

如果單用PI等DNA染料染色，需要專業軟體來分析計算了。

比如這個圖，是DNA染料單染，其中粉色部分是G1期，黃色部分是S期，綠色部分是G2/M期。中間的分布一般是通過FlowJo這樣的軟體計算自動生成的。

『捌』 細胞周期測定

兒童白血病細胞DNA含量及細胞周期的臨床分析
劉愛國 胡 群 陶紅芳 張柳清 胡 迎
華中科技大學附屬同濟醫院兒科(湖北 武漢) 430030
中國圖書分類號 R725·2 文獻標識碼 B 文章編號 1001-4411 (2008) 07-0980-03
【摘 要】 目的:探討小兒急性白血病(AL)患者骨髓細胞周期分布與分型和治療的關系。方法:應
定96例小兒AL骨髓單個核細胞DNA含量和細胞周期。結果:不同類型的AL異倍體發生率不同,急性淋巴
異倍體率55·7% (44/79),明顯高於急性非淋巴細胞白血病(ANLL)的29·41% (5/17), T-ALL異倍體
高於B-ALL (41·67% ),統計學差異均有顯著意義。AL初診病例和復發病例的G0/G1期細胞比例高於完全
G2M+S期比例低於完全緩解組和對照組(P<0·05),完全緩解組和對照組無顯著差異。結論:圖像分析系統
異倍體的分析,有利於判斷高危ALL,對細胞周期的測定給化療個體化提供了具體的參考指標。
【關鍵詞】 兒童白血病 DNA含量 細胞周期 圖像分析系統
C linical implication ofDNA content assay and cell cycle distribution in
cute leukem ia
LIUAi-Guo, HU Qun, TAO Hong-Fang et al·Department ofPediatrics, TongjiHospital, HUST,
China
〔Abstract〕 Objective:To investigate the distribution ofmarrow cell cycle and the relationshipwith the types o
peutic effects in childhood acute leukemia (AL)·M ethods:Mononuclear cellularDNA contents in bonemarrowwere
nalysis system in 96 patientswith childhoodAL·Results:The proportion ofpatientswith DNA-aneuploidwas differen
ofAL: DNA-aneuploid in the patientswithALLwas 55·7% (44/79), much higher than that in the children withA
17)·Statistically significantdifferenceswere found between the T-ALL group and B-ALL group in the DNA- aneu
vs 41·67%,P<0·05)·The leukemia cell cycle distribution indicated thatG0/G1-phase compartment in untreate
group were higher than in complete remission group and normal controls, G2M+S-phase compartmentwere lower tha
sion group and normal controls (P<0·05)·There were no significant differences in cell cycle distribution between
group and normal controls·Conclusion:The analysis ofAL, especiallyALL aneuploid, by image analysis system can
guishing the high riskALL from the standard riskALL, and the determination of cell cycle distribution can provide a c
for chemotherapy·
〔Key words〕 Childhood leukemia; DNA content; Cell cycle; Image analysis system
細胞DNA含量及細胞周期的變化與白血病發生、發展及
轉歸有密切的關系。快速分析白血病細胞的動力學變化,可
以評估其增殖能力,初步判斷化療的療效。研究白血病細胞
的DNA指數和細胞周期的變化,對協助臨床診斷和制定個體
化的化療方案有著重要意義。經典的細胞周期分析方法為流
式細胞儀,但儀器和試劑昂貴限制了其在臨床的廣泛應用。
筆者採用圖像分析系統檢測不同病程的兒童白血病細胞DNA
指數、倍體的改變和細胞周期的變化,以及這種變化與臨床
的關系,報道如下。
1 資料與方法
1·1 對象及分組 2003年4月~2005年8月兒科血液病房
住院急性白血病(AL) 96例,,男60例,女36例,年齡8個
月~14歲,平均7·1歲。其中急性淋巴細胞白血病(ALL )
79例(初治31例,復發/難治5例,完全緩解43例),急性
非淋巴細胞白血病(ANLL) 17例(初治8例,復發/難治4
例,完全緩解5例)。所有病例均經細胞學及免疫學檢查確
診。
1·2 方法 分別選取不同病程的白血病患兒及正常對照組骨
髓穿刺塗片標本,空氣中乾燥至少1 h,多聚甲醛固定30 min,
然後進行Feulgen染色〔1〕。採用CMIAS-B圖像分析系統測定
細胞核DNA相對含量及DNA指數(DI),同時分析不同細胞
周期的細胞所佔百分比。
1·3 DNA倍體判斷標准 根據DI判斷, DI系樣本的G0/G1
期細胞與正常二倍體G0/G1期細胞熒光強度之比。DI正常范
圍為0·9~1·1, DI<0·9為亞二倍體, DI>1·1為超二倍體,
亞二倍體和超二倍體均為異倍體。
1·4 統計學方法 應用SPSS 8·0軟體,進行χ2檢驗和t檢
驗。
2 結果
2·1 DNA異倍體檢出情況 79例ALL檢出DNA-異倍體
44例,異倍體率55·7%其中48例B-ALL檢出異倍體20
例,異倍體率41·67%, 31例T-ALL檢出異倍體24例,異
倍體率77·42% ,兩個不同免疫類型ALL出現異倍體的陽性
率有顯著差異(χ2=9·76, P<0·05)。檢出的5例亞二倍體
中,全部為T-ALL。17例ANLL檢出異倍體5例,異倍體率
29·41%,與ALL組比較有顯著性差異(χ2= 3·84, P<
0·05)。見表1。對照組10例無異倍體檢出。
2·2 細胞周期分布 AL初治組患兒的G0/G1(% )明顯高
於完全緩解組(t=2·83,P<0·05)和
P<0·05), S+G2/M (% )則明顯低於
2·06,P<0·05)和對照組(t=2·74,P<
復發/難治組差異無顯著意義(t分別為1·
0·05)。進一步分析ALL組和ANLL組,各
著差異性。見表2。
表1 AL異倍體檢出率(
組別初診緩解
ALL 58·06 (18 /31) 48·84 (21 /43)
B-ALL 55·00 (11 /20) 26·92 (7 /26)
T-ALL 90·91 (10 /11) 64·71 (11 /17)
ANLL 25·00 (2 /8) 20·00 (1 /5)
表2 AL不同病情細胞周期
組別nG0/G1S G
初診39 89·8±5·3 9·4±8·9 2·7
完全緩解48 72·9±6·5 19·1±10·1 7·4
復發/難治9 83·5±7·1 8·3±5·3 9·4
對照10 70·4±5·4 22·1±4·5 7·3
3 討論
DNA異倍體是腫瘤的特異性標志已為
體改變在白血病中很常見,國內外均有報
體檢出率約為50%〔1〕,本試驗79例AL異
與文獻報道相符,其中T-ALL異倍體檢出
二倍體集中出現於T-ALL中,而B-ALL
41·67% ,明顯低於T-ALL。從診斷AL
T-ALL、亞二倍體均作為高危因素,由此
不好與異倍體的出現特別是亞二倍體有關〔
檢出率明顯高於ANLL組,從遺傳學角度
制,表明ANLL患兒的染色體異常較多地
而不是數目異常,這可能是臨床ANLL較
因之一〔2〕。
ALL初診組及難治/復發組DNA異倍
其中難治/復發組與CR組的差異更為顯著,
義。隨著患者的完全緩解, DNA異倍體率
有部分CR患者存在DNA異倍體。故此類
師重視,以最大限度地延長患者長期生存率
文獻記載,白血病細胞的細胞周期比
處於S期和G2M +S期的細胞比例比正
劉愛國等 兒童白血病細胞DNA含量及細胞周期的臨床分析 第7期
G2M+S期比例代表該細胞群體中增殖細胞的數量,從另一側
面反映細胞的增殖狀態。本實驗顯示, AL組患兒骨髓細胞的
G0/G1(% )明顯高於緩解組和正常對照組,而S%及S+
G2/M (% )明顯低於緩解組和對照組,說明了白血病骨髓細
胞從G0/G1期至S期之間存在運行阻滯,表明白血病骨髓細
胞的增殖能力低於正常。亞二倍體ALL患兒的骨髓細胞增殖
能力低,故預後相對較差。而超二倍體骨髓細胞的增殖分化
需要復制合成更多的遺傳物質, S期相對延長,進入S期的細
胞增多,因而臨床上對於超二倍體的ALL患兒,聯合使用作
用於S期白血病細胞的葯物,能達到更佳的治療效果〔3〕。
故我們認為,在評定AL患者危險度和制定化療方案時,
除可以MDR作為依據外,患者DNA指數及DNA異倍體率以
及細胞周期分析均可作為重要參考指標。
4 參考文獻
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op