（1）放射免疫分析法（radioimmunoassay，RIA）。RIA技術是使用以放射性同位素（如125I、32P、3H等）作標記的抗原或抗體，用γ－射線探測儀或液體閃爍計數器測定γ－射線或β－射線的放射性強度，來測定抗體或抗原量的技術。它包括以標記抗原為特點的放射免疫分析和以標記抗體為特點的免疫放射分析（immunoradiometricassay，IRMA）。前者以液相競爭結合法居多，既測大分子抗原又測小分子抗原；後者以固相法測大分子抗原為主。
RIA在早期建立的農葯免疫分析方法中佔了很大比重，建立了狄氏劑、艾氏劑、2，4－D和2，4，5－T、對硫磷和百草枯等農葯的放射免疫分析法。盡管該方法靈敏度非常敏銳（RIA通常為10-9g、10-12g，甚至10-15g），應用范圍廣，但進行RIA需使用昂貴的計數器，也存在放射線輻射和污染等問題，因此在農葯殘留檢測領域的應用和發展受到了一定的限制，並逐步為其他免疫分析方法所取代。
（2）酶免疫分析法（enzymeimmunoassay，EIA）。EIA是繼RIA之後發展起來的一項免疫分析技術。其檢測原理與放射免疫法類似，但所用的標記物為酶，它將抗原、抗體的特異性免疫反應和酶的高效催化作用有機結合起來，通過測定結合於固相的酶的活力來測定被測定物的量。用做標記物的酶有辣根過氧化物酶（horseradishperoxidase，HRP）和鹼性磷酸酶（alkalinephosphatase，AKP）、葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase，GO）、脲酶（urease）等。酶標記反應的固相支持物有聚苯乙烯塑料管、膜等。目前大多數採用96孔酶標板（MTP）作為固相支持物。這種板的檢測容量大，樣本數量多，只需有台簡單的酶標儀就可得出准確的檢測數據。也有學者採用磁珠作為固相材料進行EIA研究，其原理是將高分子材料（聚苯乙烯、聚氯乙烯等）包裹到金屬小顆粒（Fe2O3，Fe3O4）外面，再通過化學方法鍵合上氨基（－NH2）、羧基（－COOH）、羥基（－OH）等活性基團，再與抗體或抗原耦聯，製成免疫性微珠。該方法的優點是微珠比表面積大，吸附能力強，能懸浮在液相中快速均勻的捕獲樣品中的待測物，通過外加磁場後能夠實現微珠與樣品液的快速分離，從而減少檢測時間、提高檢測靈敏度。
由於酶標試劑制備容易、穩定、價廉，酶免疫分析的靈敏度接近放射免疫技術，故近年來EIA技術發展很快，已開發了多種EIA方法。其中酶聯免疫法（，ELISA）是目前農葯殘留檢測中應用最廣泛的酶免疫分析技術。
（3）熒光免疫分析法（fluorescenceimmunoassay，FIA）。FIA檢測的基本原理是將抗原抗體的高度特異性與熒光的敏感可測性有機地結合，以熒光物質作為示蹤劑標記抗體、抗原或半抗原分子，制備高質量的特異性熒光試劑。當抗原抗體結合物中的熒光物質受到紫外光或藍光照射時，能夠吸收光能進入激發態。當其從激發態回復基態時，能以電磁輻射形式放射出所吸收的光能，產生熒光。繪制農葯濃度－熒光強度曲線，可以定性、定量檢測樣品中的農葯殘留量。
適用於抗體、抗原或半抗原分子標記的熒光素須符合要求：①應具有能與蛋白質分子形成穩定共價鍵的化學基團，或易轉變成這類反應形式而不破壞其熒光結構；②標記後，熒光素與抗體或抗原各自的化學結構和性質均不發生改變；③熒光效率高，與蛋白質結合的需要量很少；④熒光素與蛋白質結合的過程簡單、快速，游離的熒光素及其降解產物容易除去；⑤結合物在一般儲存條件下性能穩定，可保存使用較長時間。
（4）化學發光免疫分析法（luminescentimmunoassay，LCIA）。LCIA又可分為化學發光免疫測定（chemiluminescentimmunoassay，CLCIA）和生物發光免疫測定（bio-luminescentImmunoassay，BLCIA）。
1976年，Shroeder首先用生物素（B）－親和素（A）系統建立了均相化學發光免疫測定技術，爾後Halman和Velan又將其引伸到非均相體系，現已滲入到生物學研究的各個領域。其原理是以發光指示抗原與抗體的結合，當發游標記物與相應的抗體或抗原結合後，底物與酶作用，或與發光劑產生氧化還原反應，或使熒光物質（例如紅熒烯等）激發，釋放光能。最後用光度計測定其發光強度，進行定量分析。常用發游標記物有辣根過氧化物酶（HRP）、魯米諾（luminol）、異魯米諾（isoluminol）、咯粉鹼（lophine）、光澤精（lucigen）、雙（2、4、6－三氯苯）草酸酯、聯苯三酚和6[N-（4－二氨基丁基）－N－乙基]－氨基-2，3－二氫吩嗪-1，4－二酮（ABEI）等。用上述發游標記物標記的抗體（或抗原）在一定的pH緩沖溶液中與相應的抗原（或抗體）結合時，在協同因子（例如H2O2等）的作用下發光，其發光強度與被測物的濃度成正比，故可以用於定量分析。
發光免疫測定具有特異性強、靈敏度高（檢測限量達10-15mol/L）、快速（1～3h）、發光材料易得等優點。但其發光過程和強度常受到發光物質本身的化學結構、介質的pH、協同發光物質和金屬離子雜質等影響。
（5）金免疫層析分析法（goldimmuno-chromatographyassay，GICA）。GICA檢測原理是將配體（抗體或抗原）以線狀包被固化於硝酸纖維素膜等微孔薄膜上，膠體金標記另以配體或其他物質並以干態固定在吸水材料上，通過毛細作用，使樣品溶液在層析條上泳動，當泳動至膠體金標記物處時，如樣品中含有待檢受體，則發生第一步高度特異性的免疫反應，形成的免疫復合物繼續泳動至線狀包被區時，發生第二步高度特異性的免疫反應，形成的免疫復合物被截留在包被的線狀區，通過標記的膠體金而顯紅色條帶（檢測帶），而游離的標記物則越過檢測帶，與結合的標記物自動分離。通過檢測帶上顏色的有無或色澤深淺來實現定性或定量測定2。
2金標試紙條檢測
GICA法具有快速（5～20min）、廉價、結果明確、無需復雜操作技巧和特殊設備、攜帶方便等優點。但相對於其他免疫分析方法，該方法檢測靈敏度稍低，主要適合現場快速定性或半定量測定。目前該方法已被應用於醫學和生物學等眾多研究領域，尤其在發達國家已經得到了廣泛的應用。
（6）免疫分析與儀器分析技術的聯用技術。使用單一的IA技術進行農葯殘留分析獲得的信息量少，而理化分析方法的選擇性又比較差。Kramer等人將免疫分析法和液相色譜法（LC）聯合起來使用，從而簡化了分析方法，提高了檢測效率。LC-IA的聯用，將LC的高分離能力和IA的高靈敏性和高特異性融為一體。該分析法尤其適合多組分殘留分析和微量分析。免疫分析與氣相色譜/質譜（GC/MS）的聯用可減少結構相似的農葯或代謝產物分析中的交叉反應，以降低假陽性。
Ⅱ 免疫學的檢測方法有哪些
免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫。
Ⅲ 免疫學的檢測方法
免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫。
Ⅳ 免疫組化結果有幾種分析方法
有陽性細胞區域直接測試方法。
免疫組化，是應用免疫學基本原理——抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內抗原（多肽和蛋白質），對其進行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(immunocytochemistry)。
免疫組織化學技術按照標記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。
這些常用免疫組織化學方法的原理如下：
1. 免疫熒光細胞化學技術
將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當抗原抗體復合物中的熒光素受激發光的照射後會發出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量.
2. 免疫酶細胞化學技術
是目前免疫組織化學研究中最常用的技術．基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用，然後加入酶的底物，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞或組織內的相應抗原進行定位或定性研究．
3. 免疫膠體金技術
就是用膠體金標記一抗，二抗或其他的能特異性的結合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作為探針對組織或細胞內的抗原進行定性，定位或定量研究．由於膠體金的電子密度高，多用於免疫電鏡的單標記或多標記的定位研究．
Ⅳ 免疫學檢驗常用技術有哪些
以下是幾種常用的免疫學技術：
1．免疫熒光技術
免疫熒光技術是利用熒光素標記的抗體（或抗原）檢測組織、細胞或血清 中的相應抗原（或抗體）的方法。由於熒光抗體具有安全、靈敏的特點，因此已 廣泛應用在免疫熒光檢測和流式細胞計數領域。根據熒光素標記的方式不同，可 分為直標熒光抗體和間標熒光抗體。間標熒光抗體中一抗並不直接連接熒光素， 而是先將一抗結合到蛋白，然後帶有熒光素的二抗再結合至一抗。通過二抗的結 合，能將信號進行放大，因此能在一定程度上提高檢測的靈敏度，但是隨之帶來 的高背景也降低了檢測的特異性。近年來，隨著熒光素和熒光檢測技術的不斷進 步，熒光檢測的靈敏度已經接近同位素檢測的水平，直接標記的熒光抗體逐漸取 代間接標記抗體。這些標記了熒光素的抗體直接結合至抗原，大大提高了檢測的 特異性，使檢測的結果更加准確可靠。熒光檢測技術的發展，使得免疫熒光技術 在傳染病診斷上有廣泛的用途，如在細菌、病毒、螺旋體感染的疾病，檢查IgM 抗體，做為近期接觸抗原的標志。利用單克隆熒光直接標記抗體鑒定淋巴細胞的 亞類。通過流式細胞儀，針對細胞表面不同抗原，可以同時使用多種不同的熒光 抗體，對同一細胞進行多標記染色。
2．放射免疫檢測
放射免疫檢測技術是目前靈敏度最高的檢測技術，利用放射性同素標記抗 原（或抗體），與相應抗體（或抗原）結合後，通過測定抗原抗體結合物的放射 性檢測結果。放射性同位素具有pg 級的靈敏度，且利用反復曝光的方法可對痕 量物質進行定量檢測。但放射性同位素對人體的損傷也限制了該方法的使用。
3．酶聯免疫吸附試驗（ELISA）
酶聯免疫檢測是目前應用最廣泛的免疫檢測方法。該方法是將二抗標記上 酶，抗原抗體反應的特異性與酶催化底物的作用結合起來，根據酶作用底物後的 顯色顏色變化來判斷試驗結果，其敏感度可達ng 水平。常見用於標記的酶有辣 根過氧化物酶(HRP)、鹼性磷酸酶（AP）等。由於酶聯免疫法無需特殊的儀器， 檢測簡單，因此被廣泛應用於疾病檢測。常用的方法有間接法、夾心法以及BAS －ELISA。間接法是先將待測的蛋白抱被在孔板內，然後依次加入一抗、標記了 酶的二抗和底物顯色，通過儀器（例如酶標儀）定量檢測抗原。這種方法操作簡 單但由於高背景而特異性較差。目前已逐漸被夾心法取代。夾心法利用二種一抗 對目標抗原進行捕獲和固定，在確保靈敏度的同時大大提高了反應的特異性。近 年來，抗原的定量檢測技術也不斷推陳出新。近年來，在夾心法ELISA 的基礎上， 開發了多抗原檢測試劑盒，能同時檢測微量液相樣本中多個抗原含量。這項技術 的應用大大縮短了診斷的時間，提高診斷的可靠性和及時性。
4．免疫金膠體技術
膠體金技術經過30 多年的發展到現在已日趨成熟，該方法是將二抗標記上 膠體金顆粒，利用抗原抗體間的特異性反應，最終將膠體金標記的二抗吸附於滲 濾膜上，此方法簡單，快速，廣泛應用於臨床篩查。
Ⅵ 免疫分析法的基本特點是什麼
1)在實驗葯物動力學和臨床葯物學中測定生物利用度和葯物代謝動力學參數等生物葯劑學中的重要數據，以便了解葯物在體內的吸收、分解、代謝和排泄情況；(2)在葯物的臨床檢測中，對治療指數小、超過安全劑量易發生嚴重不良反應或最佳治療濃度和毒性反應濃度有交叉的葯物血液濃度進行監測；(3)在葯物生產中從發酵液或細胞培養液中快速測定有效組分的含量，以實現對生產過程的在線監測；(4)對葯品中是否存在特定的微量有害雜質進行評價。
Ⅶ 標記免疫分析技術的種類，有何區別
免疫標記分析技術主要包括：放射物標記、酶標記、發游標記、熒游標記和金標記方法。
1 放射物標記分析：
用放射物標記抗原或抗體發展的放射免疫分析(radio immunoassay, RIA)是美國科學Yalow
和Berson於1959年創立的一種微量分析法,它是將具有高靈敏度的放射性核素示蹤技術和特異性免疫化學技術相結合而建立的新方法。該技術利用核素標記物的放大效應,改善了待測物的檢測下限,同時以抗體或抗原作為結合試劑,大大提高了檢測方法的特異性。
2 熒游標記分析：
以熒游標記的熒光免疫分析(fluorescein immunoassay, FIA)是由Conn等首創於20世紀40年代的一種標記免疫學技術,其所用標記物是熒光素和熒光染料,是將抗原或抗體標記以熒光物質與相應抗原或抗體結合,在熒光顯微鏡或紫外線照射下,檢測熒光強度和熒光現象的一種檢測方法。熒游標記免疫法靈敏度高,但熒光素常會產生生物學毒性,導致抗體或抗原的靈敏度和選擇性下降
3.酶標記分析技術：
是繼免疫熒光抗體技術和放射免疫分析之後發展起來的一大新型的血清學技術。1966年，Nakane等和Avrameas等分別報道用酶代替熒光素標記抗體，建立了酶標抗體技術(enzyme-labelled antibody technique)，用於生物組織中抗原的定位和鑒定。1971年，Engvall Van Weemen等報道了酶聯免疫吸附試驗，從而建立了酶標抗體的定量檢測技術。20世紀80年代，基於酶標記抗體檢測和鑒定蛋白質分子的免疫轉印技術問世。目前，免疫酶標記技術已成為免疫診斷、檢測和分子生物學研究中應用最廣泛的免疫學方法之一。
4.發游標記分析
20世紀80年代末,國外開始用化學發光試劑來標記抗原或抗體,從而建立了發光免疫分析技術。狹義的發光免疫分析( luminescence immunoassay,LIA )主要是指化學發光免疫分析(chemiluminescence immunoassay, CLIA)。另外,還有酶放大化學發光免疫分析和電化學發光免疫分析( electrochemiluminescence immunoassay , ECLIA)。CLIA是Sohrocler和Halman在20世紀70年代末期建立的,該方法兼有發光分析的高靈敏度和免疫反應的特異性。其基本原理同酶標記分析法,是用化學發光反應的試劑(可以是發光劑或催化劑等)標記抗原或抗體,
標記後的抗原和抗體與待測物經過一系列的免疫反應和理化步驟(如離心分離、洗滌等),最後以測定發光強度形式測定。
5 超順磁微粒標記分析
以磁性粒子標記的磁性免疫分析技術(Magnetic Immuno Chromatofraphic Tes,tMICT)是現代物理學與生物技術結合研發生產的磁性分析檢測技術,最早應用於基礎醫學領域[13,14]。與其它標記技術不同,該技術一個顯著的優點就是用磁性粒子標記不受有色雜質干擾,可用於直接測量血液、食品、污水等有色樣品。其原理是利用超順磁性納米微粒作為標記物,由高靈敏度磁性檢測儀器測定結合在免疫復合物上的磁性微粒所產生的局部磁場效應,從而得出所測分析物的定量結果。
Ⅷ 化學發光免疫分析法有哪三類
1、直接化學發光，標記物為吖啶酯（雅培）或者ABEI（新產業）
2、酶促化學發光，標記物為鹼性磷酸酶（廈門波生）或者辣根過氧化物酶（強生）
3、電化學發光，標記物為三聯吡啶釕（羅氏）
註：括弧內為代表廠家。
Ⅸ 化學發光免疫分析法有哪三類
1、直接化學發光，標記物為吖啶酯（雅培）或者ABEI（新產業）
2、酶促化學發光，標記物為鹼性磷酸酶（廈門波生）或者辣根過氧化物酶（強生）
3、電化學發光，標記物為三聯吡啶釕（羅氏）
註：括弧內為代表廠家。
Ⅹ 簡介免疫分析技術
免疫技術為20世紀90年代優先研究、開發和利用的農葯殘留分析技術，世界糧農組織(FAO)已向許多國家推薦此項技術。免疫分析法(immunoassay，IA)是將免疫反應與現代測試手段相結合而建立的超微量測定技術。免疫分析法是生物酶技術、熒光光譜技術、輻射技術、免疫分析技術應用於農葯殘留分析領域的一門新技術，是基於抗原和抗體之間的特異性識別和結合反應為基礎的一種微量分析方法。免疫是機體識別和排除進人體內的抗原性異物的保護性應答反應。較大分子的農葯可以直接作為抗原進入脊椎動物的體內產生免疫應答，從而得到可以和該農葯分子特異性結合的抗體；小分子量的農葯(相對分子質量<2500)一般不具備免疫原性，不能刺激動物產生免疫反應，但有與相應抗體在體外發生吸附反應的能力，即有反應原性，這類小分子物質在免疫學上稱為半抗原。農葯是半抗原，一般不具備抗原性，不能刺激動物產生免疫反應，需要首先將該小分子通過與一定碳鏈長度、大分子的載體蛋白質(通常使用牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、鑰孔血藍蛋白、卵清蛋白)以共價鍵偶聯制備成人工抗原，使動物產生免疫反應，產生識別該農葯並與之特異性結合的抗體。以共價鍵偶聯成人工抗原使動物產生免疫反應從而產生識別該農葯並與之相結合的抗體(多克隆抗體)，通過對半抗原或抗體進行標記(酶、熒光物質、放射性同位素等)，利用標記物的生物、物理、化學放大作用，對樣品中的特定的農葯殘留進行定性或定量檢測。通過對半抗原或抗體進行標記(放射性核素、酶、熒光素標記等)，利用標記物的生物或物理或化學放大作用來進行工作，它集測定的高靈敏性和抗體反應的強特異性於一體。它的開發過程需要投入較多資金和較長時間，但具有簡單、快速、靈敏度高、特異性強、價廉、樣品所需量少等優點。目前多用於單一農葯殘留檢測，不適合應用於多殘留檢測。1971年Ercegovich[塢。]最先討論了農葯DDT、馬拉硫磷及氨三唑(amino—triazole)的免疫測定。隨後，大量研究免疫分析法在農葯殘留中的應用。Kun等報道了利用免疫分析測定對硫磷殺蟲劑農葯殘留，最低檢測限達到26ng／mL，相對標准偏差小於10
9／6。Laura等[塢0]報道利用化學發光免疫分析(cL—IA)測定農葯殘留。Anne等報道用非同位素免疫分析法(cMIA)測定氯麥隆殺蟲劑，採用傅里葉變換紅外光譜(FTIR)作為檢測器，極大提高靈敏度。農葯殘留的免疫學技術檢測食品的范圍很廣，包括水果、蔬菜、飲料、啤酒、葡萄酒、乳、肉、動植物油、蜂蜜、豆類、穀物等。一些商品化的試劑盒也相繼開發出來。國家農業部環保所李治祥和黃土忠於1990年研製了農葯殘毒速測箱，其原理就是有機磷和氨基甲酸酯類農葯對動物和昆蟲的致毒作用是通過特異性抑制膽鹼酯酶(chE)來實現的。將chE與樣品提取液反應，若chE受到抑制，表明樣品提取液中含有OPS和氨基甲酸酯類農葯，這時基質不能水解，就不能變色；否則ChE不受到抑制，基質水解產生藍色。另外，國外還推出了多種酶標試劑盒應用於常規分析及田間檢測的快速篩選，作為儀器分析的輔助方法發揮了一定的作用。免疫分析法作為農葯殘留快速篩選檢測方法受到重視。 更多相關資訊/技術資料，請參考國家標准物質網www.rmhot.com.