分析細胞器的方法

① 分離各種細胞器的方法有哪些

把細胞研磨成漿，注意是在低溫下，使酶的活性降低，從而不會使溶酶體中的酶使細胞器分解，同時不損壞酶，然後離心，根據理性的速度不同，析出的物質也不同，速度由高到低，將質量由高到低的細胞結構分離出。

② 研究細胞內各種細胞器的組成和功能，要將這些細胞器分離出來，常用方法是（）A．紙層析法B．沉澱法C

差速離心法是交替使用低速和高速離心，用不同強度的離心力使具有不同質量的物質分級分離的方法．可用來分離細胞器．
故選：C．

③ 分離各種細胞器常用的方法是什麼

什麼是差速離心法， 就是根據細胞器的密度不同，用旋轉離心的方法將細胞器沉澱，密度大的在下邊，密度小的在上邊，這是分離細胞器的基本方法

④ 細胞器的觀察方法

1. 用鍍銀法染色的豚鼠脊神經節光鏡切片：神經細胞因合成運輸大量的蛋白質而含有發達的內質網和高爾基復合體，在低倍鏡下觀察，神經節的假單極細胞體被神經束分隔成群。
2. 神經細胞的胞體呈圓形或橢圓形。
3. 轉換高倍鏡觀察，細胞中央不著色的圓形區為細胞核。
4. 在核的周圍有黑褐色顆粒狀或呈不規則的條索狀結構即為高爾基復合體。
圖1 神經節細胞（示高爾基復合體） 1. 甲苯胺蘭染色的牛脊髓塗片，尼氏小體即光鏡下的粗面內質網。
2. 在低倍鏡卡觀察，染成藍色的大三角形、星形細胞就是脊髓前角神經細胞，染色較深的小細胞為神經膠質細胞。
3. 轉換高倍鏡觀察，可見脊髓前角神經細胞的細胞質中許多藍色顆粒或網狀結構即為尼氏小體。
圖2 脊髓前角神經細胞的尼氏小體 1. 鐵蘇木素染色的馬蛔蟲子宮切片，在低倍鏡下觀察可見許多受精卵細胞，細胞的外面有卵殼，細胞與卵殼之間的腔叫卵殼腔。
2. 在某些卵細胞內，於核附近有圓形的小粒-中心粒，它與周圍緻密的細胞質-中心球，組成中心體。
3. 轉換高倍鏡觀察，可見中心體的外圍還有星狀的放射細絲即星體。
染色體中心體
圖3 馬蛔蟲受精卵細胞、分裂中期（示中心體）

⑤ 獲得各種細胞器的方法

（1）從細胞中分離各種細胞器的方法是先將細胞膜破壞（細胞置於清水中，吸水脹破）獲得各種細胞器和細胞中其他物質組成的勻漿，再用差速離心方法獲得各種細胞器．
（2）①～④中屬於生物大分子的是②tRNA、④蛋白質
（3）葉綠素存在於葉綠體中，提取它所用的溶劑是無水乙醇，分離它的方法是紙層析法．
（4）能夠合成③ATP的細胞器有C葉綠體、A線粒體．
（5）E存在於 動物細胞的低等植物細胞中．
故答案為：
（1）細胞膜破壞（細胞置於清水中，吸水脹破） 差速離心
（2）②④
（3）C葉綠體 無水乙醇 紙層析法
（4）A 線粒體 C葉綠體
（5）動物細胞的低等植物

⑥ 要研究細胞內各種細胞器的結構和功能，需要將這些細胞器分離出來。常用的方法是什麼

真的不敢吃，為了寶寶的健康。泡麵里添加有微量的防腐劑，對胎兒極為不利。

⑦ 細胞器的分離與測量操作過程中應注意什麼

1新鮮取出的小鼠肝臟為組織塊，為了得到細胞核和線粒體，首先需要進行勻漿，將細胞從組織塊中分離出來，然後再經過進一步勻漿，使細胞膜破碎，細胞解體，各種細胞器被分離出來；同時，0.25mol/L蔗糖溶液，使肝臟細胞在勻漿的過程中處於低滲條件下，使得細胞更容易破碎，勻漿徹底；

2.2細胞中，各種細胞器的結構、大小、比重及在同一介質中的沉降系數都是不同的。因此，細胞器的分離，通常使用的方法是最勻漿液進行離心，根據細胞器不同的大小、比重及沉降系數，選擇合適的離心方法組合，就可以將不同的細胞器進行分離，得到富集的某種細胞器。常用的細胞器離心分離技術有差速離心和密度梯度離心：

2.21密度梯度離心（density gradient centrifugation）

用一定的介質在離心管內形成一連續或不連續的密度梯度，將細胞混懸液或勻漿置於介質的頂部，通過重力或離心力場的作用使細胞分層、分離。這類分離又可分為速度沉降和等密度沉降平衡兩種。密度梯度離心常用的介質為氯化銫，蔗糖和多聚蔗糖。分離活細胞的介質要求：1）能產生密度梯度，且密度高時，粘度不高；2）PH中性或易調為中性；3）濃度大時滲透壓不大；4）對細胞無毒。

在實驗中，我們使用的介質為蔗糖，稱為蔗糖密度梯度離心法。原理是：採用不同濃度的蔗糖溶液，預先在分離超離心機的樣品地內制備出密度梯度，在其上面再加上一層少量的大分子溶液後，離心，大分子就形成層狀而沉降。若含有沉降系數不同的許多成分，就會出現許多層。這種情況採用適當的編排號碼，取出樣品池內的溶液，然後進行研究。

2.22差速離心（differential centrifugation）

差速離心主要是採取逐漸提高離心速度的方法分離不同大小的細胞器。起始的離心速度較低，讓較大的顆粒沉降到管底，小的顆粒仍然懸浮在上清液中。收集沉澱，改用較高的離心速度離心懸浮液，將較小的顆粒沉降，以此類推，達到分離不同大小顆粒的目的。

2.23離心力和轉速的換算公式

RCF = 1.118 × 10-5 × N2 × R

RCF表示相對離心力，單位為g

N表示轉速，單位為rpm轉/分

R表示離心半徑，單位為cm

2.3染色方法

2.31甲基綠-派洛寧染色

甲基綠、派洛寧為兩種鹼性染料，與帶負電和的磷酸根形成鹽鍵。甲基綠分子有兩個正電荷，易與雙鏈DNA分子結合，使DNA顯示綠色，派洛寧分子有一個正電荷，易與單鏈RNA分子結合，使RNA顯示紅色。也有人認為染色原理與核酸分子的空間構型有關。細胞核中，核仁的主要成分是RNA，而核仁外圍為DNA與RNA的混合物，在細胞的不同活性狀態下，外圍的DNA和RNA的比例是不一樣的，因此著色後的混合色也不一樣，但一般情況下DNA的含量占優勢，因此染色後，細胞核可以清晰地區分出被染成紅色的核仁和顯示混合藍綠色的外圍物質。

2.32中性紅-詹納斯綠染色

中性紅是一種弱鹼性 pH 指示劑，變色范圍 pH6.4～8.0之間（由紅變黃）。在中性或微鹼性環境中，中性紅的陽離子，與帶有一定負電荷的原生質及細胞核結合，而使原生質與細胞核染色。詹納斯綠 ，常用作線粒體專一性活體染色劑。線粒體中細胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態(即有色狀態)呈藍綠色,而在周圍的細胞質中染料被還原,成為無色狀態.

3.實驗材料及設備

3.1實驗工具設備：高速冷凍離心機、顯微鏡、玻璃勻漿器、解剖剪、天平、滴管、移液槍、移液管、洗耳球、鑷子、離心管、小燒杯、載玻片、蓋玻片、試管、吸水紙、注射器、牙簽等；

3.2實驗材料試劑：新鮮小鼠肝臟、生理鹽水、0.25mol/L蔗糖溶液、0.34mol/L蔗糖溶液、0.88mol/L蔗糖溶液、PBS溶液、95%乙醇、丙酮、甲基綠—派洛寧、中性紅—詹納斯綠、蒸餾水、冰塊。

4.實驗方法步驟及注意事項

4.1實驗方法步驟：

4.11稱取0.5g小鼠肝臟置於小燒杯中，用解剖剪將其剪碎，然後用生理鹽水清洗數次，最後用0.25mol/L的蔗糖溶液清洗一次；

4.12將清洗好的小鼠肝臟置於玻璃勻漿器中加入1.5ml0.25mol/L的蔗糖溶液即可進行細胞勻漿，待其充分勻漿後備用；

4.13取1.5ml勻漿置離心管中，600g（3000r/min）離心10min，上清液留作線粒體分離；

4.14沉澱用1ml0.25mol/L蔗糖溶液洗滌離心2次，每次1000g（3900r/min）離心10min；

4.15純化：將沉澱用500μL0.34mol/L蔗糖溶液懸浮，然後用注射器加入0.88mol/L蔗糖溶液400μL，1500g（4800r/min）離心15—20min；

4.16用PBS溶液懸浮——乾燥——95%乙醇固定（5min）——甲基綠-派洛寧染色20-30min——丙酮分離30S——蒸餾水漂洗——吸干鏡檢；

4.17步驟3的上清液置離心管，10000g（12270r/min）離心10min，沉澱用預冷0.25mol/L蔗糖溶液懸浮，然後10000g（12270r/min）離心10min兩次；

4.18在載玻片上滴加1-2滴中性紅—詹納斯綠，然後用牙簽挑取沉澱均勻塗抹於玻片上，蓋上蓋玻片，染色5min即可鏡檢。

4.2注意事項：

4.21整個實驗的操作都要在較低的溫度下進行，一般需要在4度以下，以保證經過勻漿之後，細胞器能夠在低活性狀態下，保持比較完整的形狀，所以實驗的操作過程中都需要採取冰浴或者通過其他方式保持低溫條件；

4.22使用離心機時應注意離心管內液體的配平；離心開始前或者離心完成後，不能保持離心機蓋長時間開放，以免使離心機溫度升高，影響離心效果；

4.23在對細胞核進行染色時，需要控制好甲基綠-派洛寧染色的時間，也要把握好用丙酮洗脫的時間，才能保證細胞核中的DNA能夠顯示甲基綠的染色效果。

4.24在進行線粒體的分離觀察時，需要保證所取的動物組織是新鮮的，才能觀察到明顯的線粒體的形態。

5.參考文獻

[1]翟中和，王喜忠，丁明孝.細胞生物學.北京：高等教育出版社，2007.

[2] 崔泳 王金生 張文海 周勇. 冷保存鼠肝臟細胞線粒體的分離[J].中國醫科大學學報.2000年8月.第29卷第4期.

二、實驗報告

1.實驗現象及結果分析

1.1細胞核的觀察

1.11現象：在顯微鏡下，可看到富集分離的細胞核，細胞核呈圓球形，核中央可見到兩個或多個被染成紅色的核仁，外圍的物質被染成藍綠色，但仔細觀察，發現細胞核中藍綠色的著色部分中混有紅色

1.12結果分析：核仁中的主要成分是RNA，被派洛寧染成紅色，外圍物質中主要是DNA，被甲基綠染成藍綠色，但是外圍物質中同樣分布有一定量的RNA，因此可看到藍綠色中混有的紅色。

1.2線粒體的觀察

1.21現象：在顯微鏡下，可以看到呈淡黃色，透亮的塊狀物質，但是不能找到被染成藍綠色的線粒體

1.22結果分析：顯微鏡下看到的淡黃色物質，是細胞破碎之後剩下的細胞膜脂質成分，不能被中性紅染色，故呈黃色透亮狀態；由於小鼠肝臟經過長期冷凍，線粒體可以已經解體或被消化，所以在實驗中很難找到線粒體的染色形態

2.實驗總結

在本次實驗中，我學習到了細胞器分離與觀察的基本方法、差速離心與密度梯度離心的基本原理、甲基綠-派洛寧和中性紅-詹姆斯綠的染色機理和方法，對於以後的學習和實驗都是很有幫助的；

從實驗的結果上看，沒有觀察到著色的線粒體，究其原因，可參考文章《冷保存鼠肝臟細胞線粒體的分離》（崔泳 王金生 張文海 周勇·2000年）中得到的實驗結果：4℃下保存1 h 見線粒體腫脹, 但大部分結構基本完整,輪廓和內膜嵴尚清楚。2 h 時見線粒體腫脹部分結構完整, 輪廓尚清晰, 內膜嵴不清晰, 可見空泡形成。3 h 時見線粒體腫脹結構不完整, 輪廓大清晰, 內膜嵴斷裂甚至消失, 可見大量空泡形成。4 h 時見線粒體結構基本消失, 僅見線粒體輪廓…… 鼠肝冷保存超過4 h, 由於肝細胞線粒體破壞重, 僅見輪廓, 尤其在需要測定生化指標時本法不適用。為提高分離線粒體獲取率。如果冷保存液改用UW 液則可獲得保存時間更長的肝細胞線粒體。我們認為: 在0～4℃生理鹽水保存下, 本法可以有效地分離保存3 h 以內的大鼠肝細胞線粒體。

⑧ 分離細胞器方法有哪些

細胞器的分離：制備某種生物大分子時，往往需要採用細胞中某一部分為材料；或者為了純化某一特定細胞器上的生物大分子，通常破碎細胞後，先分離各組分，以防干擾，這對制備—些高難度和高純度的生物大分子是必要的，細胞器的分離，一般採用差速離心法，此法是利用細胞各組分質量大小不同，在離心管不同區域沉降的原理，分離出所需組分，分離得到的細胞器，其純度可採用電子顯微鏡法、免疫學法或測定標志酶活力法進行鑒定。

⑨ 在科學實驗中 分離各種細胞器常用的方法是什麼

分離各種細胞器常用的方法是差速離心法。
在密度均一的介質中由低速到高速逐級離心，用於分離不同大小的細胞和細胞器。
在差速離心中細胞器沉降的順序依次為：核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內質網與高基體、最後為核蛋白體。
由於各種細胞器在大小和密度上相互重疊，而且某些慢沉降顆粒常常被快沉降顆粒裹到沉澱塊中，一般重復2～3次效果會好一些。
差速離心只用於分離大小懸殊的細胞，更多用於分離細胞器。通過差速離心可將細胞器初步分離，常需進一步通過密度梯離心再行分離純化。

⑩ 分離細胞器的方法是什麼

細胞器的分離，一般採用差速離心法，此法是利用細胞各組分質量大小不同，在離心管不同區域沉降的原理，分離出所需組分，分離得到的細胞器，其純度可採用電子顯微鏡法、免疫學法或測定標志酶活力法進行鑒定。