己唑醇原葯液相色譜分析方法

⑴ 如何建立高效液相色譜法測定有關物質的方法

摘要 本文就如何建立TLC法測定有關物質的方法進行論述，系統地闡述了薄層色譜法各條件確定的原理，並列舉了質量標准制訂中存在的某些問題。
關鍵詞 薄層色譜法（TLC法） 有關物質 方法建立
有關物質是研究葯品中除主成分以外的雜質，它可能是原料葯合成過程中帶入的原料、中間體、試劑、降解物、副產物、聚合體、異構體以及不同晶型、旋光異構的物質，也可能是制劑過程中產生的降解物，或是在貯藏、運輸、使用過程中產生的降解物等[1]。這些雜質的存在直接反映葯品的有效性和安全性，故要對其進行研究，特別是在葯品申報的質量研究資料中需建立其檢測方法，並根據生產、穩定性考核等實際情況考慮是否在質量標准中制訂該檢查項，規定其限度。目前，有關物質的常用測定方法有高效液相色譜法(HPLC法)和薄層色譜法(TLC法)。
TLC的特點是快速、簡便，尤其是對無紫外吸收的雜質測定，更具有其應用價值。如能將TLC法與HPLC法有機地結合、或彼此間進行比對研究，便可得到更多、更為准確的有關雜質信息，做到兩方法間的相輔相成，相益得彰！本文將著重討論如何建立薄層色譜法測定有關物質的方法。
1．測定方法類型
常用的方法有雜質對照品法（適用於已知雜質）和自身（稀釋）對照法（適用於一般雜質檢查，雜質成分少且尚不能取得雜質對照品）。目前國內由於難以獲得雜質對照品、故一般均採用自身對照法。
2．展開劑的確定（即專屬性試驗）
專屬性的研究是提供被分析物在雜質和輔料存在時能被區分的證明，該點是色譜條件建立的關鍵。通常採用在被分析物的對照品或精製品中加入一定量的雜質或輔料，證明色譜條件可將各雜質與被分析物分離[1]。這里的關鍵是：將多少量的雜質加入到多少量的主成分中。正確的作法是將1%(w/w)濃度量的各雜質加入到100%濃度的主成分中，配製這樣的溶液來
驗證系統適用性。之所以如此配製，目的是模仿樣品中有可能存在的狀態，即有少量（1%左右）雜質存在時是否能與主成分達到完全分離，只有這樣才能比較客觀、科學地反映樣品中實際存在情況的（見圖1）；而不應把該溶液配製成：主成分與中間體相同濃度的。因為一者實際檢測時樣品中不可能存在此種情況；二者該濃度不易確定，目前國內申報資料中一般的作法均是配製成較低的一致濃度，這樣各斑點當然易於完全分離了（見圖2），但在實際測定時，由於主斑點急劇增大，很易將相鄰雜質包含於主成分斑點中。同樣，質量標准中的系統適用性試驗用溶液的配製方法亦如此。

（1，3，4為雜質，2為主成分）
圖1 圖2 （雜質濃度均為供試品溶液濃度的1%）
3．檢出條件的確定
其基本出發點是：主成分與相關雜質均應在該條件下顯色，且在相同濃度下，斑點大小應基本一致。薄層板的類型根據被測物質的性質來選用，測定有紫外吸收的物質通常選用GF254或GF365板；測定無紫外吸收、需噴顯色劑的，常選用硅膠G板或H板，選用該類薄層板時，顯色方法根據被測物質的結構式選取，但當有多個顯色方法時，應分別進行試驗，選取靈敏度最高的顯色方法。如醋酸氫化可的松有關物質的測定，中國葯典2000年版採用鹼性四氮唑藍試液顯色，美國葯典26版採用硫酸-乙醇(10:90)溶液顯色，兩者均為激素類葯物的顯色方法。醋酸氫化可的松屬於激素類中的腎上腺皮質激素，四氮唑法是腎上腺皮質激素的重要顯色方法；而硫酸-乙醇顯色法則主要是針對激素類中的雌激素的顯色反應，對於屬於腎上腺皮質激素類的醋酸氫化可的松則反應活性不強，結果兩法的靈敏度相差10倍以上。因此，檢出條件的確定，一定要在查閱文獻的基礎上，並根據試驗結果進行綜合考慮。
4．供試品溶液濃度的確定（靈敏度試驗——最低檢出限的測定）
供試品溶液濃度的設定在有關物質檢測中是至關重要的，濃度越高、越能反映樣品中雜質存在的情況，但若設定得過高，則會產生主斑點嚴重拖尾、「斷腰」等超載現象的發生，產生錯誤結論；若設定太低，又將達不到檢測雜質的目的，觀測不到雜質量的變化。其設定是根據最低點樣量和最大點樣量來綜合考慮的。
最低檢出限雖然是個絕對值，但真正的意義卻是其相對值，即相對於供試品溶液的濃度多少而言，所以測定結果不僅要羅列出其絕對值又應列出其相對值，這樣最低檢出限才有意義！最大點樣量則是通過不斷加大供試品溶液濃度，直至主斑點嚴重拖尾、「斷腰」等情況出現時來得到的。然後根據最低檢出限，採用「上推法」來確定：如一般設定雜質斑點小於1.0%對照斑點，對照溶液的濃度至少應為最低檢出濃度（即最低檢出限）的20~50倍，則供試品溶液濃度是最低檢出濃度的2000~5000倍；反過來，最低檢出濃度應至少達到供試品溶液濃度的0.02%~0.05%。應注意的是：由於最低檢出量和最大點樣量因試驗環境、薄層板質量以及即時試驗時其他各因素的不同而改變（即耐受性因數），故供試品溶液的濃度在保證小於最大進樣量的情況下，可在此基礎上設定得再高一些，以保證該濃度可適用於各種條件下。舉例說明見表1（規定雜質限度為1.0%）。

表1 最低檢出量、最大點樣量、供試品溶液和對照溶液濃度之間的比例關系

最大點樣量
供試品溶液
對照溶液
最低檢出量 濃 度 8mg/ml 3mg/ml 30μg/ml 1μg/ml 點樣量 10μl 10μl 10μl 10μl 絕對量 30μg 0.3μg 10ng 相對於樣品測定濃度的 100% 1.0% 0.02% 倍 數 關 系 5000倍 30倍 「基準點」
供試品溶液濃度也可設定得再高些，但不可超過最大點樣量。
5．加樣回收試驗（即准確性試驗）
准確性試驗可採用在預經有關物質測定後的樣品中，加入已知量雜質的方法來評價。准確稱取各雜質，將含有1%(w/w)濃度的各雜質加入到樣品溶液中，以驗證所採用的薄層測定條件是否可分離檢測出相應的各雜質以及樣品中已存在的雜質是否累加，斑點是否加深。該原理同前面所述的專屬性研究是一致的。
6．強力破壞試驗
該項研究是為了揭示原料葯內在穩定性的特性，它是開發研究的一部分。這些試驗是在比加速試驗更劇烈的條件下進行的，其能夠包含葯品在銷售過程中所遇到的劇烈條件。可取一批樣品通過強光、高溫、高濕、氧化破壞、以及酸鹼破壞來證明該展開條件能分離檢測出雜質。
7．展開距離
測定時一定要採用25cm、長薄層板，展開距離應盡可能長一些，以使雜質與主成分盡量分離。如用短板，易造成臨近主斑點的雜質斑點「躲進」主斑點中。但同時又應注意，距離拉大，斑點分散，會損失最低檢出限，降低靈敏度，故應綜合考慮。
8．其它的因素
展開溫度應盡量控制在20~25℃之間，尤其在冬季，應注意環境的溫度，如太低，將嚴重影響展開效果。另層析缸的蓋兒，應塗抹凡士林油，以保證整個試驗過程中，層析缸的密封，避免展開劑揮發；並應在展開前，預先傾入展開劑，以使層析缸內的空氣飽和，達到最佳的展開效果。薄層板由於有自製、市售，質量不一也應注意。
二．討論
1． 質量標准中的系統適用性試驗，最好能將最難分離的雜質訂入系統適用性試驗用溶液的配製，將此雜質的濃度配製為主成分濃度的1%，或0.5%，或0.2%（依據雜質限度而定）進行試驗，驗證分離度後，再進行樣品的測定，以確保試驗的准確進行。
2． 質量標准中，應配製系列濃度的對照溶液（即梯度對照），以對雜質有「半定量」的概念，這可更好地評價雜質存在的情況；並應規定雜質的個數及最大雜質斑點的限度，使質量標准更完善、科學。經查閱，中國葯典薄層色譜法測定有關物質的有70個品種，僅有2個品種採用了梯度對照，絕大部分品種僅是制定了對照溶液，均未規定雜質個數，和最大雜質斑點限度，如有若干個雜質斑點也無法判定；而英國葯典和美國葯典則幾乎每個品種均採用梯度對照，並規定雜質個數和最大雜質斑點限度，這一點值得學習和推廣。
3． 錯誤的一種誤區，認為HPLC法完全替代了TLC法，這是不正確的，一定要做到相互補充、相互論證、相互參考才是最客觀、最科學的！
本文是在參閱了日本《分析方法驗證》一書和大量日本國內新葯申報資料中質量研究部
分的內容所寫而成。

⑵ 高分子聚合物可以用高效液相色譜法分析么

高分子聚合物可以用高效液相色譜法分析
高效液相色譜法，只要求試樣能製成溶液，而不需要氣化，因此不受試樣揮發性的限制。對於高沸點、熱穩定性差、相對分子量大（大於400以上）的有機物（這些物質幾乎佔有機物總數的75%～80%）原則上都可應用高效液相色譜法來進行分離、分析。據統計，在已知化合物中，能用氣相色譜分析的約佔20%，而能用液相色譜分析的約佔70～80%。
1、環境中有機氯農葯殘留量分析
固定相：薄殼型硅膠(37 ～50mm)
流動相：正己烷
流速：1.5 mL/min
色譜柱：50cm´；2.5mm（內徑）
檢測器：差示折光檢測器
可對水果、蔬菜中的農葯殘留量進行分析。
2、稠環芳烴的分析
稠環芳烴多為致癌物質。
固定相：十八烷基硅烷化鍵合相
流動相：20%甲醇-水 ～100%甲醇；線性梯度淋洗2%/min
流速：1mL/min
柱 溫：50℃
柱壓：70 ´104 Pa
檢測器：紫外檢測器
3．陰離子分析
雙柱；薄殼型陰離子交換樹脂分離柱(3×250mm),
流動相：0.003mol·L-1 NaHCO3 / 0.0024 mol·L-1Na2CO3，流量138 mL/hr。
七種陰離子在20分鍾內基本上得到完全分離，各組分含量在3～50 ppm。

⑶ 液相色譜圖定量分析抑霉唑時，出峰成直角三角形狀，且拖尾，請各位大俠指導！

沒有譜圖很難做出准確判斷。
出現三角峰直觀上的第一判斷是檢測器信號採集點不夠密。另外，不知道你說的三角峰是整個峰是一個三角形還是有很多鋸齒小芽組成一個大峰。
如果整個峰就一個三角形說明檢測器采點過稀。可增加檢測器信號採集頻率解決。
如果是鋸齒狀的峰則是色譜分離效果不理想(主要與色譜柱，流動相和溫度有關系)。我認為這種情況的可能性較大，這種情況下色譜柱的關系最大，建議先確認色譜柱的適用性，新舊狀況及有無污染，然後再考慮流動相和溫度。

⑷ 進行氣相色譜，液相色譜分析時常用的衍生化方法有哪些

1.硅烷化衍生化方法
硅烷化衍生化方法是氣相色譜樣品處理中應用最多的方法，它是利用質子性化合物（如醇，酚，酸，胺，硫醇等）與硅烷化試劑反應，形成揮發性的硅烷衍生物。硅烷化反應一般在數分鍾內即可完成。
能進行硅烷化的化合物反應活性一般為：醇>酚>羧酸>胺>醯胺，反應活性還受空間位阻的影響，其醇的反應活性為伯醇>仲醇>叔醇，胺的反應活性為：伯胺>仲胺。

2. 酯化衍生化方法
有機酸由於極性較強，易產生嚴重的拖尾現象，而且大多數有機酸揮發性差，熱穩定性也較低。因此，許多有機酸（特別是長碳鏈的有機酸）在進行氣相色譜分析之前都要衍生為相應的酯。常用的酯化方法有以下一些。
（1）甲醇法。有機酸與甲醇在催化劑的存在下加熱，可以發生酯化反應，生成有機酸的甲酯。當催化劑使用H2SO4、HCl時，需要迴流，反應時間較長。若用三氟化硼作催化劑，反應可在室溫下完成，通常是將三氟化硼通入甲醇中配製酯化劑，然後再進行酯化反應。
（2）重氮甲烷法。重氮甲烷可與有機酸反應，生成有機酸的甲酯，放出氮氣。
此方法簡便有效，反應速度快，轉化率高，很少有副反應，不引入雜質，但反應要在非水介質中進行。反應條件雖溫和，但重氮甲烷不穩定，有爆炸性，有毒（致癌），制備和使用時要特別小心。常溫下酚羥基可與重氮甲烷緩慢反應，但在0℃以下時可避免酚羥基反應。
（3）三氟乙酸酐法。在三氟乙酸酐的存在下有機酸和酸可以反應生成酯。此法特別適於空間位阻較大的有機酸和醇或酚的酯化。
（4）其他酯化方法。為了提高方法的靈敏度和選擇性，有時需要制備甲酯以外的酯，這些酯化方法有的類似於甲酯化反應，如以重氮乙烷、重氮丙烷、重氮甲苯代替重氮甲烷，可製得相應的酯。而且這些試劑穩定性好、爆炸性小。用BF3的丙醇、丁醇或戊醇溶液與有機酸反應，也可制備相應的丙酯、丁酯或戊酯。

3. 醯化衍生化方法
醯化能降低羥基、氨基、巰基的極性，改善這些化合物的色譜性能（減少峰的拖尾），並能提高這些化合物的揮發性，也能增加某些易氧化化合物（如兒茶酚胺）的穩定性。當醯化時引入含有鹵離子的醯基時，還可提高使用電子捕獲檢測器（ECD）的靈敏度。常用的醯化試劑有醯鹵、酸酐和反應活性的醯化物（如乙酸咪唑）。
常用的醯化方法有以下一些。
（1）乙醯化法。標準的乙醯化法是將樣品溶於氯仿（5ml）中，與0.5ml 乙酸酐和1ml乙酸在5℃反應2-6h，真空除去剩餘試劑。還可以乙酸鈉為鹼性催化劑，以乙酸酐為乙醯化試劑進行乙醯化反應，用於糖類的分析。吡啶、三乙胺、甲基咪唑等也可作為鹼性催化劑。乙醯化反應通常在非水介質中進行，但胺類和酚類化合物乙醯化時可在水溶液中進行。
（2）多氟醯化法。常用的多氟醯化試劑是三氟乙醯（TFA），五氟丙醯（PFP）和七氟丁醯（HFB），其反應活性是TFA>PFP>HFB。TFA和PFP的衍生物揮發性較強，而HFP的衍生物ECD靈敏度高。多氟醯化反應的時間除取決於多氟醯化試劑的活性外，還取決於目標化合物的活性。如：麻黃鹼和偽麻黃鹼及其同系物與三氟乙酸酐（TFAA）在60℃時5min可完成反應：三環類抗抑鬱葯物與七氟乙酸酐（HFBA）在60℃時10min 可完成反應：而哌可酸，脯氨酸，谷氨酸，γ - 氨基丁酸的甲酯與HFBA的反應需在120℃時+20min 完成。多數情況氟醯化反應不需溶劑，但也有些需在溶劑中進行。此外，有時還需加鹼性催化劑。如胺和酸的多氟醯化常以苯為溶劑，三乙胺為催化劑；糖類的三氟乙醯化是在三氯甲烷溶劑中，以吡啶為催化劑進行的。

4. 鹵化衍生化方法
在目標化合物中引入鹵原子後可使用ECD檢測器，提高檢測的靈敏度（降低檢測限），同時也可改善揮發性和穩定性，常用的鹵化衍生化方法有以下一些。
（1）鹵素法。用鹵素直接作為衍生化試劑處理樣品，鹵素的作用是加成或取代。
（2）鹵化氫法。常用HCl和HBr為衍生化試劑與不飽和鏈發生加成反應或與羥基發生置換反應。
（3）N - 溴代丁二醯亞胺（NBS 法)。NBS是選擇性很強的鹵化衍生試劑，可使烯丙位的氫原子發生溴代反應。

⑸ 正丁醇和正己醇用哪種高效液相色譜法分離分析

正丁醇和正己醇可以用氨基柱進行分離。
氨基色譜柱屬於極性色譜柱，有三種分離方式：正相、反相和陰離子交換。正相採用低極性溶劑，可分離極性化合物，如芳胺取代物、酯類、甾族化合物、氯代農葯；反相採用高極性溶劑分離單糖、雙糖和多糖等碳水化合物；陰離子交換和分離酚、有機羧酸和核苷酸。
正丁醇和正己醇採用氨基柱進行分離，宜採用正相的分離方法。

⑹ 如何用高效液相色譜儀檢測雙氧威原葯

純氧為無色晶體，屬於氨基甲酸酯類農葯，是一種低毒、安全、保幼的新型農葯，廣泛用於倉儲、蔬菜、果樹等害蟲的防治。本文採用反相高效液相色譜外標法測定了雙氧化合物的含量。取得了令人滿意的結果。該方法簡單、重現性好、准確。1儀器和試劑儀器奧普斯APS80_16PLUS液相色譜儀，34400計算機積分器試劑雙氧標準的已知含量；甲醇再蒸餾高級醇；水，亞蒸餾水。2色譜操作條件:220爪，4.6不銹鋼柱；流動相甲醇+水=70+30體積；波長254納米；；柱狀溫室的溫度；流速1毫米；注射量為50L。在上述色譜條件下，雙氧分子的保留時間約為18分鍾。lD雙加氧標准葯物雙加氧標准樣品溶液的制備稱取0.04克雙加氧標准。p精確到0.00028/25，容量瓶中，加入甲醇溶解4個結果，並討論雙氧標准樣品的質量；將樣品質量和雙氧標准物質質量百分比稀釋至刻度，搖勻，過濾0.45，得到雙氧標准樣品溶液。樣品溶液的制備方法是:稱取含有約0.048倍雙氧的樣品，在25分鍾內混合均勻至0.00028倍，加入人甲醇溶解並在容量瓶中稀釋至刻度，搖勻，過濾0.45倍，得到雙氧樣品溶液。在上述色譜條件下，儀器基線穩定後，連續注入人針標准樣品溶液以平衡系統。樣品溶液、樣品溶液、樣品溶液、樣品溶液、樣品溶液、樣品注射和測定應依次進行。樣品中雙氧的百分比含量根據以下公式計算。SAi標准樣品溶液中雙氧峰面積的平均檢測波長為4.1根據雙氧對紫外波長的反應靈敏度，254納米更合適。4.2流動相的組成和選擇根據選定波長下雙氧和未知物質的分離以及分析測定時間選擇甲醇7水=7030作為流動相的合適比例。4.3線性相關准確制備5種不同雙加氧標准樣品溶液。當橫坐標被選擇並且峰面積是縱坐標時，雙加氧的線性相關曲線被獲得，值，2樣品溶液中雙氧峰面積的平均值；12，3，毛細管柱在王學豐中原石化乙烯生產中的應用操作條件及樣品分離效果該方法特別適用於乙烯生產中的集中控制分析。乙烯裂解裝置生產過程長，工藝復雜。從裂解氣到聚合級乙烯丙烯，分析控制點多，組分變化大，要求分析員採用有效的分析方法，為工藝操作提供准確的數據。美國測試與材料學會的美國材料試驗學會提出了幾種使用氧化鋁多孔層開放柱測定碳氫化合物雜質的方法。用0丁基72031彈性應時毛細管柱分析了乙烯生產過程中的幾個分析點。兩年的實踐證明效果良好。1分析實驗第1.1部分儀器和材料氣相色譜儀；進樣口填充有色譜柱的進樣口，進樣口內設有大口徑毛細管色譜柱組件號；注射器微型注射器，50；載氣氮氣、氣瓶氣體，純度大於99.99；氫氣由氫氣發生器產生，乾燥凈化；空氣計風，乾燥後，凈化；探測器擺動10；成分與待測成分相似的標准氣體。1.2操作條件溫度柱箱初始溫度40；入口溫度250；探測器溫度250；柱溫加熱程序401保持在2，51。如果溫度上升到190度，溫度保持在20.1度。加壓氮氣1.3定性和定量分析1.3.1定性分析是指色譜柱出廠試驗報告中對各成分進行定性分析的峰序。峰值階數為0，1.3.2。定量分析採用外標法，結合校正因子，用峰面積定量。根據上述操作條件，典型色譜圖顯示了從2開始的良好線性關系。線性回歸方程4.4精密度的測定稱量六份雙氧樣品，並在上述色譜條件下平行測定其雙氧含量。結果1。該方法的精密度從1。精密度激發結果樣品中含有兒童平均標准偏差系數的變異4.5方法准確度測定採用添加回收率的方法，將人的定量標准分別添加到已知含量的樣品中，並在此色譜條件下測定回收率。回收率為99.01.0，表明該方法准確。

⑺ 己唑醇的使用方法

摘要 它可以有效地防治子囊菌、擔子菌和半知菌所致病害，尤其是對擔子菌綱和子囊菌綱引起的病害如白粉病、銹病、黑星病、褐斑病、炭疽病等有優異的保護和鏟除作用。對水稻紋枯病有良好防效。

⑻ 高效液相色譜儀的使用和原理分析

高效液相色譜儀(HPLC)是分析實驗室常用的測試儀器之一，其應用越來越廣泛。此種儀器在使用過程中，難免會出現各種各樣的問題，並將直接影響到所測數據的准確性和儀器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因，即可清楚預防和排除這些故障的方法，就可正確地使用儀器並最大限度地發揮儀器的性能。今天我們要從以下幾個方面和您分享下在使用高效液相色譜儀中需注意的幾個問題。

一、使用試管的問題

1、試管的潔凈問題。

高效液相色譜分析法是一個很靈敏的分析方法，如果因使用不潔凈的試管，便會影響試驗結果的准確性。例如，在用甲醇作溶劑來溶解樣品時，所用的小試管是用橡膠塞來做蓋子的，因此，在每次進樣時，都有一個保留時間固定的干擾峰存在，後經證實，此干擾峰是由甲醇浸泡橡膠塞而溶下的組分所產生，換用玻璃試管後，干擾峰消除。

2、塑料試管的溶解問題。

近年來，一次性塑料試管給試驗人員帶來了極大的方便，但是，在使用過程中一定要注意有機溶劑對試管的溶解現象，在利用此種試管提取樣品時，有些有機溶劑(如氯仿等)對管壁有溶解現象，這些被溶解下來的物質有時也能在檢測器上產生信號，從而干擾樣品的測定。這時，可用相同的實驗條件先行試驗一下，看看不含被抽提物時，提取液在檢測器上能否產生干擾信號，如確有干擾信號存在，就只能換用耐有機溶劑的玻璃試管了。

3、被測樣品在試管壁上的吸附問題。

這個問題也應引起注意，否則也會影響測試結果的准確性，在治療葯物監測(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)中，有些被測葯物如阿米替林，丙咪嗪等易吸附在玻璃試管的管壁上，因此，操作中宜採用聚丙烯管，為防止提取中吸附現象的發生，可採用0.5%的已二胺已烷液做為提取劑，可有效地防止吸附。

二、操作進樣閥的問題

目前，在分析型高效液相色譜儀中常用的進樣閥是7725型進樣閥，其內部的六通閥結構使進樣操作非常方便，但是，如果使用不當，也會帶來問題。例如，在高效液相色譜法的試驗過程中，有時會有異常色譜峰的出現以及重現性不好的問題，這主要是由於操作方法不當所引起，要想解決此類問題，需從以下幾個方面入手。

1、進樣量的控制。

用進樣閥來進樣時，閥內的樣品環是定量的，(一般分析型進樣閥的樣品環體積為20ul)，由於進樣時，注射到進樣閥內的樣品溶液在樣品環的管路中有徑向的速度梯度(即管軸處比管壁處的液流速度快)。因此，要想使樣品環中充滿樣品溶液，從而使用進樣閥來准確地定量，則必須使進樣量大於樣品環體積的2倍。如果用注射器來控制進樣量，則最大隻能注射樣品環體積1/2的量，這樣才能防止部分樣品由溢流管溢出從而導致定量分析的誤差。

2、進樣閥的清潔問題。

如果樣品環中有上次進樣時樣品的殘留，必然會污染下次注射進的樣品，為防止這種現象的發生，應按下列步驟操作：a.進樣閥有2個位置，INJECT和LOAD。首先在LOAD位置時，以注射器將流動相注入進樣閥內清洗幾次，每次用量大約40ul；b.然後將進樣閥板手扳至INJECT位置時，再以流動相清洗幾次，每次用量還是40ul；c.最後，再將樣品注射到進樣閥里。

按照上述的步驟操作，可以避免由進樣閥引起的污染，從而使干擾峰消除並提高分析結果的准確性。

3、進樣閥溢流管的堵塞。

有時，進樣閥的溢流管會發生堵塞現象，向進樣閥內注射樣品時，注射針推不動。此故障是由於溢流管的堵塞所致。堵塞的原因多半是由於溶解樣品的流動相用的是鹽溶液，而其中的鹽在溢流管的排空埠處結晶所致。此時，可用小燒杯盛少量蒸餾水對溢流管口稍加浸泡，埠處鹽的結晶就能被溶解掉，故障排除。如能在每次進樣完成之後，用蒸餾水反復沖洗至溢流管中的鹽分全部沖出，則可避免此故障的發生。

三、流動相(MOBLLE PHASE)的問題

甲醇和乙腈在高效液相色譜分析法中常常被用來配製流動相。高效液相色譜法中常用的試劑最好是高等級的專用試劑，如色譜純試劑。在要求不太嚴格時，優級純甚至分析純的試劑也能用。高效液相色譜分析法中常用的是紫外檢測器，因此，從降低基線噪音和提高分析靈敏度上來考慮，應該使用紫外吸收小且雜質含量少的色譜純試劑。

1、流動相的過濾。

配製好的流動相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來過濾。這是因為溶液中含有很多肉眼難以發現的微小顆粒，如果不把它們濾除掉，就會堵塞泵口、柱頭上的過濾器，這樣就堵塞了流動相的正常通道，使色譜柱的阻力增加，柱壓升高，柱效下降。碰到這種情況時，要換用經過濾的流動相，並將堵塞的濾器拆下來浸泡在20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機清洗20分鍾，以除去濾片上的堵塞物。

2、流動相的脫氣。

流動相在使用前必須脫氣，以盡可能的除去溶解在流動相中的氣體，否則，這些氣體會使柱填料的性能降低，還能夠對檢測器的信號產生很大的干擾。脫氣有多種方法，如超聲脫氣、真空脫氣、氮氣脫氣等。真空脫氣法和氮氣流脫氣法是目前最常用的脫氣法。水和甲醇混合後會產生大量的氣泡，如果不脫氣就使用，氣泡就會進入色譜柱和檢測器，並將影響分析工作的正常進行。

四、色譜柱的使用和保養

色譜柱是高效液相色譜儀最主要的部件，被測物質能否被很好的分離和測定，色譜柱的性能起著決定性的作用。因此，在日常工作中，應特別注意色譜柱的正確使用和維修保養，以延長色譜柱的使用壽命。

1、使用預柱和保護柱。

預柱(pre-column)安裝於泵和進樣器之間，它給色譜柱中的流動相提供了完全的平衡，並防止了對柱填料有破壞作用的組分或污染物進入色譜柱。保護柱(guard column)可以阻擋能夠牢固地吸附於色譜柱上的組分進入色譜柱，保護柱應與色譜柱的填料相同。預柱和保護柱可以經常更換，而不需要經常更換色譜柱，這就延長了色譜柱的使用壽命。

2、防止氣體進入色譜柱。

有些色譜柱(如凝膠柱)是不允許氣泡進入的，否則將會使柱效降低甚至形成微小的難以驅除的氣室。因此，為了防止氣泡進入色譜柱，一定要使用經過脫氣的流動相，並且要嚴格按照下列步驟來安裝色譜柱。a.拆卸下色譜柱入口處的密封螺絲，觀察是否有溶劑滲出；b.如有溶劑滲出，即可將色譜柱接到管路上，以避免氣泡的進入；c.如無溶劑滲出時，表明色譜柱的此端已經進去空氣了，此時，可將色譜柱的出口端接到進樣閥上，以流動相來反方向沖洗色譜柱，以便將柱內的空氣排除。最好以0.2ml/min的小流量來沖色譜柱，如果溶劑的流速太快或者是壓力突然的上升都將會導致柱性能的降低；d.如果流出的溶劑里不含有氣泡，說明柱內的氣體已經被排出了，再將色譜柱以正確的方向接好，這樣氣泡就進不到色譜柱裡面了。

3、色譜柱的清洗。

為了不使被測物質和雜質停留在色譜柱中，在每次的樣品分析工作完成之後，都應及時地清洗色譜柱。首先要用對被測樣品洗脫能力強的溶劑來洗脫色譜柱，以分析工作中常用的反相色譜分析法為例，因其先流出的物質是極性大的物質，此時應用100%的甲醇或使用異丙純、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內的極性小的物質洗脫下來，洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動相是緩沖溶液，則應先用蒸餾水來沖洗色譜柱，以沖掉柱內的鹽，然後再用合適的溶劑來沖洗。

凝膠濾過色譜法(Gel Filtration Chromatography)中所使用的凝膠柱常用緩沖溶液做流動相，用完之後當然要用蒸餾水來沖洗。如果是連續操作，可以將緩沖溶液置於柱內過夜，但最好是維持小流速(＜0.5ml/min)以防止緩沖鹽的析出，如果流動相中含有鹵化物，即使是停一夜，也必須要用蒸餾水將色譜柱沖洗干凈，以防止它們對柱體的腐蝕。

4、色譜柱的存放。

如果色譜柱暫時不用，存放時要注意以下幾點：

a.幾天之內的短期放置，應先用溶劑沖洗好色譜柱(如凝膠柱則用蒸餾水來沖洗)，再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。

b.如果色譜柱長期不用，僅用上述方法來處理就不行了，這時應使用色譜柱使用說明書中所指明的溶劑來充滿色譜柱，反相柱一般使用甲醇，正相柱則可用正已烷或庚烷，而凝膠柱則不能用水了，因柱內如果有微生物的生長則會使柱效降低，此時應用0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)來沖洗色譜柱，再將色譜柱封嚴。色譜柱長期放置時，一定要將色譜柱的兩端封嚴，以防止由於溶劑揮發而造成的柱填料干縮現象，因這可導致柱效的嚴重降低。

c.色譜柱應貯存在室溫下，如果放置於0℃以下的環境里，柱內就會結冰，這也將導致柱效的降低。

高效液相色譜儀的構造高效液相色譜儀（HPLC）一般由高壓輸液系統、進樣系統、分離系統、記檢測系統、數據處理系統等幾部分組成。制備型儀器還需配有餾份收集系統。為了取得較好的分析結果，HPLC儀器對於准確度、精確度、靈敏度及結果重現性有較高的要求。

高效液相色譜儀的工作原理

儲液器中的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內，由於樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式列印出來。

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高效液相色譜儀的構造高效液相色譜儀（HPLC）一般由高壓輸液系統、進樣系統、分離系統、記檢測系統、數據處理系統等幾部分組成。制備型儀器還需配有餾份收集系統。為了取得較好的分析結果，HPLC儀器對於准確度、精確度、靈敏度及結果重現性有較高的要求。

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高壓輸液系統

高壓輸液系統包括：溶劑儲液瓶、溶劑脫氣裝置、高壓輸送泵以及梯度洗脫裝置。其中，高壓輸液泵是高效液相色譜儀的主要部件之一，輸送壓力達150—350×105Pa。輸液系統要為HPLC儀器提供流量恆定、准確、無脈沖的流動相，流量的精度和長期的重復性要好，同時還要提供精度好、准確度高、重現性好的多元溶劑梯度。因此，輸液泵的好壞直接影響著整個系統的質量和分析結果的可靠性。

進樣系統：進樣能在試樣引入色譜柱，有六個介面：1,4之間接定量環；2接高壓泵；3接色譜柱；5,6接廢液管。

色譜分離系統：色譜柱通常為不銹鋼柱，內裝各種填充劑。常用的填料為硅膠，可用於正相色譜;化學鍵合固定相，根據鍵合的基團不同，可用於反相或正相色譜。其中、最常用的是十八烷基鍵合硅膠，即ODS柱，可用於反相色譜或離子對色譜。

檢測系統：檢測系統用於連續檢測色譜柱流出的物質，進行定性定量分析。要求其靈敏度高、噪音小、基線穩定、響應值的線性范圍寬等。近年來各國都在研究開發新的檢測技術，進一步擴大了HPLC的應用。

根據檢測需要的不同檢測器可分為紫外檢測器(UVD)、示差折光檢測器(RID)、電化學檢測器(ECD)、紅外檢測器(IRD)、核磁共振檢測器(NMRD)、質譜檢測器(MSD)、蒸發光散射檢測器(ELSD)、小角度激光散射檢測器(LALLSPD)。

數據處理系統：高效液相色譜的分析結果除可用記錄儀繪制譜圖外，還可使用微處理機和色譜數據工作站來記錄和處理色譜分析的數據。

⑼ 怎麼做液相色譜分析方法檢出限實驗

怎麼做液相色譜分析方法檢出限實驗
信噪比為3以上即可，軟體可以自己計算。另外要使用陰性樣品來做檢出限。標准溶液做的話只是儀器檢出限而不是方法檢出限

⑽ 提高高效液相色譜柱效的方法

1、選用細顆粒的填料，可獲得高柱效。

2、降低流動相流速，使得滲透時間變長，有利於達到高柱效。

3、流動相粘度低，溶質在流動相中的擴散系數大，有利於加快傳質，可獲得高柱效。

4、採用低配比固定液，有利於減小固定相傳質阻力，可提高柱效。

5、提高溫度，可減小流動相和固定相的粘度，增大組分的擴散系數，改善傳質，提高柱效。

6、組分的擴散系數還取決於組分本身的結構，過大分子的擴散系數小，對獲得高柱效不利。

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高效液相色譜法有「四高一廣」的特點：

①高壓：流動相為液體，流經色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。

②高速：分析速度快、載液流速快，較經典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鍾，有些樣品甚至在5分鍾內即可完成，一般小於1小時。

③高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。

④高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μL數量級。

⑤應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩定性差化合物的分離分析，顯示出優勢。