Ⅰ 如何預測miRNA的靶基因
預測miRNA的靶基因,是研究miRNA功能和調控網路的關鍵步驟。以下為常用預測方法:
首先,基於序列匹配的方法通過比較miRNA序列與靶基因3'非翻譯區(3' UTR)序列,尋找互補配對的miRNA靶位點。常用工具如TargetScan、miRanda、PicTar等。
其次,基於保守性的方法利用跨物種基因組序列比對,預測miRNA靶位點上的保守序列區域,識別可能的靶基因。PhyloP、PhastCons等工具適合進行此類保守性分析。
再者,基於結構的方法考慮miRNA與靶基因的結構和穩定性,通過預測二級結構和自由能等參數,預測結合位點。RNAhybrid、miRanda等工具支持結構預測。
最後,集成方法綜合運用多種預測方法,結合序列匹配、保守性和結構信息,提高靶基因預測准確性。
值得注意的是,miRNA靶基因預測存在不確定性。為驗證預測,常通過實驗方法如Luciferase reporter assay、Western blotting、qPCR等。同時,利用公開的miRNA和基因表達數據進行miRNA與靶基因關系分析,有助於驗證預測結果。