均三嗪的分析方法

① 關於三聚氰胺

三聚氰胺（英文名：Melamine），是一種三嗪類含氮雜環有機化合物，重要的氮雜環有機化工原料。簡稱三胺，俗稱蜜胺、蛋白精，又叫2,4,6-三氨基-1,3,5-三嗪、1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺、2,4,6-三氨基脲、三聚氰醯胺、氰脲三醯胺。

(1)標准樣品配製：

取50mg三聚氰胺標准品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的標准溶液，使用時，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀釋至所要的濃度。

(2)提取：

稱取飼料樣品5g，加入50ml0.1%三氯乙酸提取液，充分混勻，加入2mL2%乙酸鉛溶液，超聲20min。

然後取部分溶液轉移至10mL離心管中，8000rpm/min離心10min，取上清液3mL過混合型陽離子交換小柱(PCX)。

(3)凈化(PCX小柱，60mg/3mL)：

a)活化及平衡：3mL甲醇，3mL水

b)上樣：加入提取液3mL

c)淋洗：3mL水;3mL甲醇;棄去淋洗液並將小柱抽干。

d)洗脫：5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脫。(5%氨化甲醇的配製：5mL氨水+95mL甲醇)。

e)濃縮：50℃，氮氣吹乾，20%甲醇/水定容至2mL，HPLC分析或衍生後GC/MS分析。

3.2HPLC檢測方法

3.2.1三聚氰胺HPLC-UV檢測方法

三聚氰胺是強極性化合物，在傳統的反相C18柱上保留很差，需要用離子對試劑色譜方法才能有良好的保留與分離，按照美國食品葯品監督管理局(FDA)的三聚氰胺檢測方法和中國農業部公布的三聚氰胺檢測方法，採用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，可以得到良好的分離效果，分析色譜圖如下：

(a)色譜柱：VenusilASBC84.6×250mm;標准：FDA方法;流動相：緩沖液：乙腈=85：15;緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調pH為3.0;流速：1.0mL/min;柱溫：40oC;波長：240nm

(b)色譜柱：VenusilASB-C184.6×250mm;標准：中國農業部頒標准方法;緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉;流動相：緩沖溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min;柱溫：40℃;波長：240nm

3.2.2三聚氰胺LC-MS檢測方法

由於FDA公布的HPLC-UV方法中，流動相添加了離子對試劑，因此限制了液質聯用方法的使用;但不用離子對試劑色譜方法，三聚氰胺在傳統的C18柱上保留很差，不能得到較好的分離定量〔3〕。

基於此問題，艾傑爾科技公司自主開發了新的方法，採用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，不用離子對試劑也能得到有效的保留與分離。因此方法中流動相不含離子對試劑，可以用於質譜檢測。

與FDA2007年4月公布的《(HPLC-UV)》相比較，該方法大大降低了最低檢測限(MSD：0.5ppm;UV：2ppm)，提高了檢測靈敏度。

以該方法分別在ASB-C84.6×250mmASB-C184.6×250mm得到的譜圖如下：

圖3LC-MS方法檢測三聚氰胺的譜圖

緩沖液：10mM的NH4AC;流動相：Buffer:：ACN=95：5;流速：1.0mL/min;進樣量：樣品先用70%ACN溶解成約1mg/mL，用ACN稀釋成0.1mg/mL，進10uL;柱溫：40℃;波長：240nm

4結果與討論

4.1陽離子交換柱(PCX)

三聚氰胺呈弱鹼性(弱陽離子化合物)，凈化過程一般應選擇陽離子交換柱。混合型的陽離子交換柱(PCX)通過將磺酸基團(-SO3H)鍵合在極性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附劑上，具有陽離子交換和反相吸附兩種機理，並具有以下優點：

a)可通過兩種不同溶液的洗滌(水/一定pH值的緩沖溶液和有機溶劑)，使樣品更干凈，提高檢測的靈敏度。

b)批次重復性好。

c)回收率高，重現性好，即使小柱跑干也可以得到較高回收率。

4.2LC-MS方法優點：

(1)檢測過程簡便：無須添加離子對試劑，三聚氰胺就可得到良好的保留與分離，避免了配製離子對流動相的復雜過程。

(2)提高了檢測的靈敏度：無離子對試劑，可以用於質譜檢測器，大大降低了最低檢測限(MSD：0.5ppm;UV：2ppm)。

(3)降低了檢測成本：不用離子對試劑，就不再需要買價格較貴的離子對試劑了，從而降低了檢測成本。

(4)延長了色譜柱的使用壽命：避免了使用離子對試劑減少色譜柱壽命的影響。

(5)該方法所使用的色譜柱具有通用性：無論是用FDA方法、中國農業部部頒標准方法和本公司開發的LC-MS方法，使用艾傑爾(Agela)ASB系列親水色譜柱均能得到一個很好的檢測結果，從而給客戶提供了多種選擇空間。

國家食品質量監督檢測中心有關人士說，在現有的國家標准奶粉檢測中，主要進行蛋白質、脂肪、細菌等檢測。三聚氰胺屬於化工原料，是不允許添加到食品中的，所以現有標准不會包含相應內容。也就是說，三聚氰胺不屬於常規檢測項目，正常情況下，很少有人會想到去檢測它。

② 復方阿米三嗪片的葯物分析

方法名稱：
復方阿米三嗪片—二甲磺酸阿米三嗪和蘿巴新的測定—高效液相色譜法
應用范圍：
本方法採用高效液相色譜法測定復方阿米三嗪片中二甲磺酸阿米三嗪和蘿巴新的含量。
本方法適用於復方阿米三嗪片。
方法原理：
供試品經加流動相超聲提取後，提取液進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，於波長222nm處檢測二甲磺酸阿米三嗪和蘿巴新的吸收值，計算出其含量。
試劑：
甲醇
儀器設備：
1. 儀器
1.1 高效液相色譜儀
1.2 色譜柱
十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數按二甲磺酸阿米三嗪和蘿巴新分別計算均不低於900。
1.3 紫外吸收檢測器
2. 色譜條件
2.1 流動相：甲醇 水 =85 15，每1000mL中加二乙胺5μL。
2.2 檢測波長：222nm
2.3 柱溫：室溫
試樣制備：
1. 稱取供試品
取本品10片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當於二甲磺酸阿米三嗪30mg和蘿巴新10mg）。
2. 對照品溶液的制備
精密稱取二甲磺酸阿米三嗪和蘿巴新對照品適量，加流動相溶解並定量稀釋製成每1mL約含二甲磺酸阿米三嗪0.3mg和蘿巴新0.1 mg的溶液。
3. 供試品溶液的制備
將上述供試品置於100mL量瓶中，加流動相適量，超聲處理30分鍾，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。
註：「精密稱取」系指稱取重量應准確至所取重量的千分之一。「精密量取」系指量取體積的准確度應符合國家標准中對該體積移液管的精度要求。
操作步驟：
分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各20μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，於波長222nm處測定二甲磺酸阿米三嗪和蘿巴新的吸收值，計算出其含量。
參考文獻：
中華人民共和國葯典，國家葯典委員會編，化學工業出版社，2005年版，二部，p.428。

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檢測內容①耐寒耐熱：將樣品放置在40°C和-5~-15°C的環境中保持24h，觀察樣品外觀，是否變色、分層，pH值、黏度是否超出規定范圍。②離心實驗：在離心機中以3000轉/min的速度離心30min，觀察產品是否分層。③色澤穩定性：檢驗有顏色化妝品的色澤是否穩定，如花露水的色澤穩定性採用乾燥箱加熱法。④pH值、黏度、濁度：通過pH計、黏度計檢測化妝品的pH值和黏度值。，濁度一般直接目測，是否有不溶解的沉澱物出現。⑤微生物指標：化妝品中不得檢出的微生物有糞大腸菌群、銅綠假單胞菌和金黃色葡萄球菌，限制化妝品中黴菌和酵母菌的總數，此外，眼部、口唇類及兒童、嬰兒用的化妝品中限制的菌落總數比其他化妝品要低。⑥x物質：化妝品中可能存在的x污染物有汞、鉛、砷、甲醇，分別限量在1mg/kg、40mg/kg、10mg/kg、2000mg/kg。化妝品功效宣稱評價機構，找微譜。
檢測項目：化妝品：微生物指標：菌落總數、黴菌和酵母計數、大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、沙門氏菌、銅綠假單胞菌、軍團菌等理化指標：總活性物、鉛、砷、汞等重金屬，甲醇、甲醛、黃麴黴x、耐寒、耐熱、磷酸鹽、pH、水分含量等毒性試驗：鼠傷寒沙門氏菌/細菌回復突變試驗、急性經口毒性試驗、急性經皮毒性試驗酶活性檢測：纖維素酶、糖化酶、澱粉酶、蛋白酶、耐熱澱粉酶、超氧化物歧化酶（SOD）等安全性檢測：殺菌劑、防腐劑、防霉劑和抗菌劑等化妝品配方分析，找微譜。四川化妝品功效評價認證機構
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