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研究遺傳物質用的物理方法

發布時間:2024-12-19 14:26:01

A. 誘變育種常用的方法有

誘變育種:是用物理或化學的誘變劑使誘變對象內的遺傳物質(DNA)的分子結構發生改變, 引起性狀變異並通過篩選獲得符合要求的變異菌株的一種育種方法。

物理方法:射線(紫外線、X光線、Y射線,中子線),激光微束,離子束,微波,超聲波,熱力等
化學誘變常用方法:浸漬法、塗抹法、滴液法、注射法、施入法和熏蒸法。化學誘變劑(鹼基類似物、烷化劑,移碼誘變劑,硫酸二乙酯(DFS)、5-溴尿嘧 啶(5-BU)、氮芥(Nm)、N'廣甲基N'亞硝基胍(NTG))。

生物方法:空間條件處理誘變,病原微生物誘變,轉基因誘變

秋水仙素是從百合科植物秋水仙(Colchicum autumnale)的根、莖、種子等器官中提煉出來的一種葯劑,分子式為C22H25O6N。積水仙素是淡黃色粉末,純品是針狀無色結晶性,性極毒,融點為155℃,易溶於水、酒料、氯仿和甲醛中,不易溶解於乙醚、苯。
秋水仙素能抑制細胞分裂時紡錘絲的形成,使已正常分離的染色體不能拉向兩極,同時秋水仙素又抑制細胞板的形成,使細胞有絲分裂停頓在分裂中期。由於它並不影響染色體的復制,因而造成加倍後的染色體仍處於一個細胞中,導致形成多倍體。處理過後,如用清水洗凈秋水仙素的殘液,細胞分裂仍可恢復正常。
人工誘導多倍體常用秋水仙素的水溶液。配製方法為,將秋水仙素直接溶於冷水中,或先將其溶於少量酒精中,再加冷水。配製好的溶液應放入棕色玻璃瓶內保存,且保存時應置於暗處,避免陽光直射,此外瓶蓋應擰緊,以減少與空氣的接觸,避免造成葯效損失。
3.秋水仙素的濃度與處理時間
秋水仙素溶液的濃度及處理時間的長短是誘導多倍體成功的關鍵因素。一般秋水仙素處理的有效濃度有0.0006%~1.6%,比較適宜的濃度為0.2%~0.4%。處理時間長短與所用秋水仙素的濃度有密切關系,一般濃度俞大,處理時間則要愈短,相反則可適當延長。多數實驗表明,濃度大,處理時間短的效果比濃度小,處理時間長要好。但處理時間一般不應小於24小時或以處理細胞分裂的1~2個周期為原則。
由於不同植物,不同器官或組織在一定條件下對秋水仙素的反應不同,因此,須根據不同情況來掌握處理的濃度和時間。例如,東北林業大學張敩方等人用白花類型金魚草種子進行多倍體誘變,採用濃度0.3%~0.5%的秋水仙素處理24小時誘變效果較好。另有實驗表明,處理矮牽牛種子的適宜濃度為0.01%~0.1%,以0.05%處理時間24小時效果最佳。在不同器官方面,處理種子的濃度可稍高些,持續時間可稍長(一般為24~48小時);處理幼苗時,濃度應低些,處理時間可稍短點;植物幼根對秋水仙素比較敏感,極易受損害,因此,對根處理時應採用秋水仙素溶液與清水交替間歇的方法較好。
秋水仙素溶液只是影響正在分裂的細胞,對於處於其他狀態的細胞不起作用。因此,對植物材料處理的適宜時期是種子(干種子或萌動種子)、幼苗、幼根與莖的生長點、球莖與球根的萌動芽等。如果處理材料的發育階段較晚,被誘導的植株易出現嵌合體。

4.秋水仙素處理的方法
(1)浸漬法
此法適合於處理種子,枝條盆栽小苗的莖段生長點。
一般,選干種子或萌動種子,將它們放於培養器內,再倒入一定濃度的秋水仙素溶液,溶液量為淹沒種子的2/3為宜。處理時間多為24小時,濃度0.2%~1.6%。浸漬時間不能太長,一般不超過6天,以免影響根的生長。最好是在發根以前處理完畢。處理完後應及時用清水洗凈殘液,再將種子播種或沙培。對於百合類植物,常采二倍體鱗片浸於0.05%~0.1%的秋水仙素溶液,處理1~3小時後洗凈扦插。唐菖蒲實生小球也可用浸漬法促使染色體加倍。
盆栽幼苗,處理時將盆倒置,使幼苗頂端生長點浸入秋水仙素溶液內,以生長點全部浸沒為度。對於組織培養試管苗也可採用浸漬法處理,只是處理時須用紗布或濕濾紙覆蓋根部,處理時間因材料可從幾個小到幾天。對插條,一般處理1~2天。
(2)滴定法
用滴管將秋水仙素水溶液滴在子葉、幼苗的生長點上(即頂芽或側芽部位)。一般6~8小時滴一次,若氣候乾燥,蒸發快,中間可加滴溜餾水一次,如此反復處理一至數日,使溶液透過表皮滲入組織內起作用。若水滴難以停留在芽處,則可用棉球包裹幼芽,再滴芽液處理。此法與浸種法相比,可避免植株根系受到傷害,也比較節省葯液。
(3)毛細管法
將植株的頂芽、腋芽用脫脂棉或紗布包裹後,將脫脂棉與紗布的另一端浸在盛有秋水仙素溶液的小瓶中,小瓶置於植株近旁,利用毛細管吸水作用逐漸把芽浸透,此法一般多用於大植株上芽的處理。
(4)塗抹法
將秋水仙素乳劑塗抹在牙上或梢端,隔一段時間再將乳劑洗去。
(5)套罩法
保留新梢頂芽,除去牙下數葉,套上一個膠囊。內盛0.65%的瓊脂加適量秋水仙素,經24小時即可除去膠囊。
(6)注射法
採用微量注射器將一定濃度的秋水仙素溶液注入植株頂芽或側芽中。
(7)復合處理法
據日本山川邦夫(1973年)報道,將好望角苣苔屬(Streptocarpus,屬苦苣苔科植物)中的一些種用秋水仙素處理11天,又用 0.04~0.05Gy(4~5rad)的X射線照射,可提高染色體加倍植株的出現率達到60%。而單獨用秋水仙素處理時為30%。採用復合處理法還獲得了兩株八倍體。

5.秋水仙素誘導多倍體需注意的事項
(1)幼苗生長點的處理愈早愈好,獲得全株四倍性細胞的數目就愈多,處理時間愈晚,則大多是混雜的嵌合體。
(2)植物組織經秋水仙素處理後,在生長上會受到一定影響,如果外界條件對它生長不適宜,也會使試驗失敗,要注意培育、管理。對形成嵌合體的可採用摘頂、分離繁殖、細胞培養等方法。
(3)處理期間,注意處理時的室溫,當溫度較高時,處理濃度應低一些,處理時間要短些;相反,當室溫較低時,處理濃度應高些,處理時間應長點。
(4)誘導多倍體時,處理的植物材料應選二倍體類型,且生長發育處理幼苗期,材料數量上應盡量多數,以便選擇有利變異。
(5)處理完後,須用清水沖洗干凈,以避免殘留葯液繼續使染色體加倍,從而對植株造成傷害。
(6)秋水仙素屬劇毒物質,配製和使用時,一定要注意安全,避免秋水仙素粉末在空中飛揚,以免誤入呼吸道內;也不可觸及皮膚。可先配成較高濃度溶液,保存於棕色瓶中,蓋緊蓋子,放於黑暗處,用時再稀釋。

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