A. 病毒學研究的基本方法有哪些
(一)生物學特性測定:在寄住上的反應——症狀、傳播等;
(二)病毒分離與培養:提純與純化,二元培養法;
(三)光鏡與電鏡觀察:病毒粒子和病毒與相應抗血清的特異性免疫吸附情況;
(四)免疫學技術:以血清學和組織免疫化學方法檢測材料帶毒情況,多克隆抗體,單克隆抗體;
(五)分子生物學技術:核酸分子雜交,PCR等。
B. 病毒感染的血清學診斷方法
常用的血清學方法有中和試驗、補體結合試驗、血凝抑制試驗等傳統的方法,以及應用免疫學標記技術發展的酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、放射免疫試驗(RIA)及免疫熒光試驗(IF)等特異、靈敏的微量血清學方法。
1.中和試驗(NT)是指病毒在活體內或細胞培養中,被特異性抗體中和而失去感染性的一種試驗。它既可用來檢查患病後或人工免疫後機體血清中抗體的增長情況,也可用來鑒定病毒或研究其抗原結構。中和抗體特異性高、持續時間較長,因此流行病學調查也常用此指征。
2.血凝抑制試驗許多病毒能凝集雞、豚鼠、人等的紅細胞,稱為血凝現象。這種現象能被相應抗體所抑制,稱血凝抑制試驗。其原理是相應抗體與病毒結合後,阻抑了病毒表面的血凝素與紅細胞的結合。
3.酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、放射免疫試驗(RIA)及免疫熒光試驗(IF)參見第八節細菌感染的血清學診斷方法的介紹。
4.蛋白印跡試驗(Westernblot,WB)用於檢測HIV抗體,是HIV感染的確認試驗。應用WB也可檢測病毒抗原,但一般不常用。
5.檢測病毒核酸的分子生物學試驗檢測患者血清等標本或病毒培養物中病毒基因或核酸片段的技術有多種:①病毒核酸擴增試驗即聚合酶鏈反應(PCR);②核酸雜交技術,包括點雜交、原位雜交、DNA-DNA印跡雜交(Southernblot)及RNA-DNA印跡雜交(Northernblot)等;③基因晶元技術(genechip);④病毒基因測序等。目前,分子生物學技術日益廣泛地應用於對病毒及其感染的檢測和研究中。