A. 葯物中測定某物質含量的常用方法有那些(3種以上)
方法的驗證： 訂入質量標準的含量測定法不同於一般質量考察的方法，須經過嚴格的方法學驗證，不同原理的測定法具有不同的驗證內容及要求：
（1）容量分析法的驗證：①精密度：用原料葯精製品考察方法精密度，平行試驗5個樣本的RSD≤0.2%；②准確度：以測定原料精製品（含量>99.5%）的回收率（測定值與理論值的比值）計算，應在99.7%～100.3%之間（n＝5,RSD≤0.1%）；③滴定終點確定的依據：包括滴定曲線的繪制，如用指示劑法確定終點，應用電位法校準終點顏色，提供指示劑顏色與電位變化情況的對比結果；④耐用性：考察測定條件（供試液穩定性、樣品提取次數、時間等）有微小變動時，測定結果不受影響的承受程度，如測試條件要求苛刻時則應在方法中註明。
（2）HPLC法的驗證：①精密度：RSD≤2%（n＝5）；②准確度：用於制劑時，要考察輔料的影響，將一定量葯物加到按處方比例配製的輔料中（為標示量的80%～120%）製成高、中、低三個劑量，混合均勻後，每個劑量取三份樣品，按擬定方法測定回收率，應在98%～102%之間（n＝9, RSD≤2%）。③線性范圍：用已知含量的精製品配製一系列濃度的溶液（n＝5～7），用濃度C對峰面積A或峰高h或被測物的響應值之比進行回歸處理，線性方程的相關系數r≥0.999，截距應趨於零，並提供線性關系圖；④專屬性：輔料、有關物質或降解產物峰對主葯峰應無干擾；⑤耐用性：考察測定條件（供試液穩定性、流動相組成和pH值、不同品牌或批號的同類色譜柱、柱溫、流速、樣品提取次數、時間等）有微小變動時，測定結果不受影響的承受程度，如測試條件要求苛刻時則應在方法中註明；⑥靈敏度：作為常量分析法，此項可不作主要要求。
（3）UV法的驗證：①精密度：RSD≤1%（n＝5）；②准確度：方法同HPLC法，回收率應在98%～102%之間（n＝9, RSD≤2%），同時要求輔料、有關物質或降解產物在測定波長處無吸收。③線性范圍：用已知含量的精製品配製一系列濃度的溶液（n＝5～7，吸收度A在0.2～0.7間），用濃度C對峰面積A或峰高h或被測物的響應值之比進行回歸處理，線性方程的相關系數r應≥0.999，截距應趨於零，並提供線性關系圖；④耐用性：考察測定條件（供試液穩定性、樣品提取次數、時間、比色法中顯色劑用量、反應溫度、時間、pH值等）有微小變動時，測定結果不受影響的承受程度，如測試條件要求苛刻時則應在方法中註明；⑤靈敏度：作為常量分析法，此項可不作主要要求。
吸收度A在0.2～0.8間其線形關系好，利用標准品建立標准曲線後，受測溶液做適當的稀釋，使其吸收度在0.2～0.8，如果太小或太大，都將影響測定的准確性的。
B. 高效液相色譜法測定中葯含量採用的方法有哪些
遵照下面的要求選擇合適的方法，HPLC法外標、內標兩種，檢測器一般UV即可。
含量測定分析方法驗證的可接受標准簡介
摘要：本文介紹了在對含量測定所用的分析方法進行方法學驗證時，各項指標的可接受標准，以利於判斷該分析方法的可行性。
關鍵詞：含量測定 分析方法驗證 可接收標准
在進行質量研究的過程中，一項重要的工作就是要對質量標准中所涉及到的分析方法進行方法學驗證，以保證所用的分析方法確實能夠用於在研葯品的質量控制。為規范對各種分析方法的驗證要求，我國已於2005年頒布了分析方法驗證的指導原則。該指導原則對需要驗證的分析方法及驗證的具體指標做了比較詳細的闡述。但是文中未涉及各具體指標在驗證時的可接受標准，國際上已頒布的指導原則中也未發現相關的要求。隱睜宴另一方面，大多數葯品研發單位在進行質量研究時，已逐步認識到分析方法驗證的必要性與重要性，大都也在按照指導原則的要求進行分析方法驗證，但驗證完後卻因沒有一個明確的可接受標准，而難以判斷該分析方法是否符合要求灶銀。本文結合國外一些大型葯品研發企業在此方面的要求，提出了在對含量測定方法進行驗證時的可接受標准，供國內的葯品研發單位在進行研究時參考。
1．准確度
該指標主要是通過回收率來反映。驗證時一般要求分別配製濃度為80％、100％和120％的供試品溶液各三份，分別測定其含量，將實測值與理論值比較，計算回收率。
可接受的標准為：各濃度下的平均回收率均應在98.0%-102.0%之間，9個回收率數據的相對標准差（RSD）應不大於2.0%。
2．線性
線性一般通過線性回歸方程的形式來表示。具體的驗證方法為：
在80％至120％的濃度范圍內配製6份濃度不同的供試液，分別測定其主峰的面積，計算相應的含量。以含量為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸分析。
可接受的標准為：回歸線的相關系數（R）不得小於0.998，Y軸截距應在100％響應值的2％以內，響應因子的相對標准差應不大於2.0%。
3．精密度
1）重復性
配製6份相同濃度的供試品溶液，由一個分析人員在盡可能相同的條件下進行測試，所得6份供試液含量的相對標准差應不大於2.0%。
2）中間精密度
配製6份相同濃度的供試品溶液，分別由兩個分析人員使用不同的儀器與試劑進行測試，所得12個含量數據的相對標准差應不大於2.0%。
4．專屬性
可接受的標准為：空白對照應無干擾，主成分與各有關物質應能完全分離，分離度不得小於2.0。以二極體陣列檢測器進行純度分析時，主峰的純度因子應大於980。
5．檢測限
主峰與噪音峰信號的強度比應不早耐得小於3。
6．定量限
主峰與噪音峰信號的強度比應不得小於10。另外，配製6份最低定量限濃度的溶液，所測6份溶液主峰的保留時間的相對標准差應不大於2.0%。
7．耐用性
分別考察流動相比例變化±5％、流動相pH值變化±0.2、柱溫變化±5℃、流速相對值變化±20％時，儀器色譜行為的變化，每個條件下各測試兩次。可接受的標准為：主峰的拖尾因子不得大於2.0，主峰與雜質峰必須達到基線分離；各條件下的含量數據（n=6）的相對標准差應不大於2.0%。
8、系統適應性
配製6份相同濃度的供試品溶液進行分析，主峰峰面積的相對標准差應不大於2.0%，主峰保留時間的相對標准差應不大於1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大於2.0，主峰與雜質峰必須達到基線分離，主峰的理論塔板數應符合質量標準的規定。
C. CDE「混合均勻度指導原則」解讀提煉,含量RSD標准為±5%!
9月26日，國家葯監局葯品審評中心發布了《** 口服固體制劑混合均勻度和中控劑量單位均勻度研究技術指導原則****（徵求意見稿）**》。
文件重點摘錄如下：文件提供了 混合階段和壓片/填充階段均勻性研究的決策樹
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混合階段的取樣 ：壓片或填充操作步驟前的最終混合物均勻度是保證成品含量均勻度的基礎，也是取樣開展混合均勻度研究的最佳階段， 原則上不應跳過該階段的混合均勻度研究而直接進行終產品含量均勻度檢測。
取樣點應均勻分布且具有代表性。應結合混合設備的結構特點，確定混合設備的死角，運用合適的工具，選取不同位置的取樣點進行分析，以考察樣品的混合效果。並提供方錐型混合機、V-型混合機、雙錐型混合機取樣示意圖。混合取樣建議的取樣點數為至少 10個，每個取樣點至少取 3份混合樣品。
壓片/填充階段取樣****： 應根據壓片/填充工序的全過程預設適宜的取樣位置和取樣間隔，對劑量單位進行取樣和檢測。取樣點必須覆蓋整個壓片/填充運行過程。取樣點應大致分布均勻，並重點關注重要事件（例如，儲料罐和中間體容器的加料過程、生產設備停機再啟動過程等）對樣品的影響。建議的取樣點數為不少於 20個，每個取樣點至少取樣 7個劑量單位。
混合均勻度的接受標准：
01
每個取樣點檢測一個樣品，計算所有樣品的相對標准偏差（RSD），所有單值在均值的±10.0%（絕對）以內。
（1）如果 RSD ≤ 5.0％，進行中控劑量單位均勻度的測定。（2）如果 RSD > 5.0％，則測定剩餘樣品（每個取樣點的另外 2份樣品）的混合均勻度。
02
剩餘樣品的混合均勻度檢測：測定每個取樣點的其他混合樣品，計算所有樣品的 RSD，所有單值在均值的±10.0%（絕對）以內。
（1）如果 RSD ≤ 5.0％，進行中控劑量單位均勻度的測定（至少測定 20個取樣點，每個取樣點至少檢測 7個劑量單位）；（2）如果 RSD > 5.0％，則進行調查，以確定變異性是否是由產品/工藝問題或取樣/分析誤差引起的。 壓片/充填過程均勻度接受標准：
01
測定每個取樣點中至少 3個劑量單位，每個取樣點的平均值在目標劑量的 90.0%－110.0%之間，所有單值在目標劑量的 75.0%－125.0%之間。
（1）如果 RSD≤6.0%，則該批次樣品中控劑量單位均勻度可被接受；（2）如果 RSD＞6.0%，則測定剩餘樣品（每個取樣點所有未檢驗的單劑量）的中控劑量單位均勻度。
02
剩餘樣品的中控劑量單位均勻度檢測：測定未檢驗的剩餘樣品，計算所有樣品的 RSD。每個取樣點的平均值在目標劑量的 90.0%－110.0%之間。所有單值在目標劑量的 75.0%－125.0%之間。
（1）如果 RSD≤6.0%，則該批次樣品中控劑量單位均勻度可被接受；（2）如果 RSD＞6.0%，則該批次樣品含量不均勻。需對兩個階段的所有數據進行分析，以確定潛在的變異性來源，從而對生產工藝加以改進。[圖片上傳失敗...(image-73956f-1632725878663)]
[圖片上傳失敗...(image-86a798-1632725878663)]
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** 口服固體制劑混合均勻度和中控劑量單位均勻度研究技術指導原則****（徵求意見稿）****一、概述 口服固體制劑是指片劑、膠囊劑、顆粒劑等經口服給葯的固體制劑。混合和壓片/填充步驟是口服固體制劑生產工藝的關鍵工藝步驟，如何使混合物料的混合均勻度和中控劑量單位均勻度滿足生產需求，確保每個單位劑量的物料中含有均等的活性物質，是實現成品含量均勻的前提。為進一步加強國際人用葯品注冊技術協調會（InternationalCouncil forHarmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticalsfor HumanUse，ICH）質量源於設計（QbD）理念在實際生產中的運用，提高口服固體制劑生產過程中的風險控制水平，明確混合均勻度和中控劑量單位均勻度研究的技術要求，制定本指導原則。本指導原則主要參考國際相關技術文件/指導原則起草制定，旨在解決工業上關注的過程式控制制粉末混合均勻度和中控劑量單位均勻度的問題，提供粉末混合均勻度和中控劑量單位均勻度的一種研究策略，以期為葯物研發和生產過程中混合均勻度和中控劑量單位均勻度的研究提供參考。本指導原則適用於口服固體制劑，制劑申請人/葯品生產企業應基於風險評估的原則，結合產品和生產工藝的特點，對混合或壓片/填充工藝步驟評估為中高風險的品種進行研究。例如，中國葯典要求進行含量均勻度測定的口服固體制劑，其混合不均勻的風險較高，應進行混合均勻度和中控劑量單位均勻度的研究。應對產品全生命周期中關鍵批次進行考察，如工藝驗證、臨床研究、上市後變更等批次。考察批次需結合產品特點進行評估，確保產品質量始終如一。根據研究結果並結合質量風險管理，評估建立商業化生產批次混合均勻度和中控劑量單位均勻度的有效控制措施的必要性。本指導原則僅代表葯品監管部門當前的觀點和認識，隨著科學研究的進展，本指導原則中的相關內容將不斷完善與更新。應用本指導原則設計和實施研究時，可同時參考葯品生產質量管理規范 (Good Manufacturing Practice，GMP)和其他國內外相關的技術文件。 二、總體考慮 混合均勻度和中控劑量單位均勻度是口服固體制劑生產過程中的關鍵考察指標，影響混合不均勻的原因，通常與物料的理化性質（如物料粒徑及其分布、引濕性等）、工藝特點（如濕法制粒、粉末直壓等）等相關。制劑申請人/葯品生產企業作為責任主體，應依據質量源於設計（QbD）的理念，結合產品和生產工藝的特點，對可能影響混合均勻度或中控劑量單位均勻度的因素進行風險評估，設計合理的取樣計劃，以充分的反映物料的混合效果，建立合理的驗收標准，以確保成品含量均勻度滿足擬定目標的要求。本指導原則旨在提供一種混合均勻度和中控劑量單位均勻度的研究策略，故決策樹（詳見附件 1）未明確具體的取樣計劃和驗收標准。制劑申請人/葯品生產企業在有充分合理理由時，可靈活的選用優選的取樣計劃和驗收標准。無論選取何種方法，制劑申請人/葯品生產企業均應充分證明方法的合理性，以確保成品含量均勻性。 三、取樣計劃 本指導原則推薦採用分層取樣方法，該方法可以在預定的時間/位置間隔收集單劑量樣品，或在壓片/填充過程中收集可能造成成品含量均勻度不合格的較高風險位點的樣品。這些試驗結果可用於監控生產中最有可能引起成品差異的過程，並指導開發單獨的控製程序，以確保混合均勻度和中控劑量單位均勻度符合要求，最終保證成品的含量均勻性。 （一）混合階段取樣計劃 生產過程中的任何混合操作均可進行混合均勻度評估，其中，壓片或填充操作步驟前的最終混合物均勻度是保證成品含量均勻度的基礎，也是取樣開展混合均勻度研究的最佳階段，原則上不應跳過該階段的混合均勻度研究而直接進行終產品含量均勻度檢測。制定混合階段取樣計劃時，取樣點應均勻分布且具有代表性。應結合混合設備的結構特點，確定混合設備的死角，運用合適的工具，選取不同位置的取樣點進行分析，以考察樣品的混合效果。這些取樣點既應涵蓋全部物料，也應包括能夠代表整個混合容器中最容易發生混合不均勻的位置。例如，對於滾筒式混合設備(如方錐型混合機、V-型混合機、雙錐型混合機)，取樣點應至少分布在混合物料的上、中、下三層及卸料區域（總混取樣示意圖可參考附件 2）。建議在混合設備和/或中間體物料容器中至少選取 10個取樣點，每個取樣點至少取 3份混合樣品。單份樣品取樣量通常應在 1-10倍單位劑量范圍內，樣品應全量用於混合均勻度檢測。建議評估粉體取樣量的影響，當取樣量大於 3倍劑量時，需進行論證或科學說明，並提供相關依據，應避免出現二次取樣情況，以確保取樣量能夠用於測定混合物的真實混合均勻度。在混合器和/或中間體容器中廣泛取樣，對多批次的混合物料進行分析，並應用合適的統計分析方法，對混合物料的混合均勻度進行評估，定量評估樣品中出現的任何偏差。判斷出現樣品偏差的原因是混合不充分，還是由於取樣誤差。單處取樣點出現了顯著性偏差，可能是由一個因素引起的，如混合不充分、取樣錯誤或物料聚集，或是多個因素的組合效應。不同取樣點之間顯著性偏差則提示混合不充分。 （二）壓片/填充階段取樣計劃 制定壓片/填充階段取樣計劃時，應根據壓片/填充工序的全過程預設適宜的取樣位置和取樣間隔，對劑量單位進行取樣和檢測。取樣點必須覆蓋整個壓片/填充運行過程。取樣點應大致分布均勻，並重點關注重要事件（例如，儲料罐和中間體容器的加料過程、生產設備停機再啟動過程等）對樣品的影響，這些取樣點的考察結果可用於監控生產過程中最有可能影響成品含量均勻度的步驟。建議對壓片/填充工序的整個批次中一般不少於 20個取樣點進行在線取樣，每個取樣點至少取樣 7個劑量單位。對於部分特殊情況，例如批量較小、工藝時長較短等，無法達到建議的取樣點，在提供了充分的科學說明後，可以適當減少取樣點。對比上述混合物料混合均勻度和中控劑量單位數據的結果。調查對比結果中出現的任何差異，分析產生差異的根本原因。根據分析結果考慮是否需重新進行處方開發以優化粉末的物理性質，或進行生產工藝的優化。 四、驗收標准 制劑申請人/葯品生產企業在評估混合均勻度和中控劑量單位均勻度時，應依據產品含量及含量均勻度的控制范圍，擬定合理的驗收標准。應結合風險控制的理念，確定適宜的檢測量，以充分評估產品的含量均勻性。以下為本指導原則依據上述第三部分列舉的取樣計劃提供的一種驗收標準的舉例。 （一）混合均勻度驗收標准**
如果高 RSD歸因於取樣/含量測定誤差，則進行中控劑量單位均勻度（至少測定 20個取樣點，每個取樣點至少檢測 7個劑量單位）；如果高 RSD歸因於產品/工藝相關的原因，混合均勻性則是不可接受的。 （二）中控劑量單位均勻度驗收標准
五、其他考慮 本指導原則推薦的取樣計劃並不適用於所有生產情況，當制劑申請人/葯品生產企業在執行過程中遇到特殊情況時，例如，取樣點無法達到建議的 20個取樣點，或生產工藝經風險評估需增加取樣點，或取樣量不在建議的單位劑量范圍內，制劑申請人/葯品生產企業也可以採用其他取樣計劃，可以對驗收標准進行相應的調整。但是，應提供替代取樣計劃的理論依據及科學說明，擬定的驗收標准應合理，以確保混合均勻度和中控劑量單位均勻度滿足擬定目標的要求。對於窄治療指數葯物，由於其單位劑量的准確性對葯物有效性、安全性有較大的影響，建議制劑申請人/葯品生產企業基於對產品的科學認知和風險評估，制定更加嚴格的取樣計劃，進行混合均勻度和中控劑量單位均勻度的考察，擬定更嚴格的驗收標准。 六、附件****附件 1:混合階段和壓片/填充階段決策樹 [圖片上傳失敗...(image-e7ef47-1632725878665)]
附件 2：總混取樣示意圖 方錐型混合機[圖片上傳失敗...(image-ba6488-1632725878665)]
V-型混合機[圖片上傳失敗...(image-e09eed-1632725878665)]
雙錐型混合機[圖片上傳失敗...(image-1fbd67-1632725878664)]
七、名詞解釋****混合均勻度（Powder mix uniformity）： 是指混合物料的均勻度。 中控劑量單位（In-process dosage unit）： 是指生產中的未經包衣或包裝的單個膠囊和葯片。 分層取樣（Stratified sampling）： 是指一種收集代表性樣品的方法。可以從研究批次的各個確定位置選取單劑量樣品，或者從生產過程的不同階段或時期選取單劑量樣品，取樣點在覆蓋全生產過程的同時，還應選取可能造成成品含量均勻度不合格的較高風險的位點。 重量校正（Weight correct）： 是指一種用於消除片重差異對混合均勻度影響的數學校正方法。例如，規格為 20mg的片劑，理論片重為 100mg，實測主葯含量和片重分別為19.4mg和 98mg，經重量校正的結果為（19.4÷98）÷（20÷100）×100=99%。 RSD： 是指相對標准偏差。相對標准偏差（RSD）=【標准偏差（SD）/計算結果的算術平均值（X）】×100%。 八、參考文獻 [1]《葯品 GMP指南：口服固體制劑》中國醫葯科技出社，2010.[2]《中國葯典》（ 2020年 版）中國醫葯科技出社，2020.[3] FDAGuidance for Instry ANDAs: Blend Uniformity Analysis [4] FDA Guidance for Instry Powder Blends andFinished Dosage Units----Stratified In-Process Dosage Unit Sampling andAssessment [5] Recommendations for the Assessment of Blend andContent Uniformity: Modifications to Withdrawn FDA Draft Stratified SamplingGuidance. Journal of Pharmaceutical Innovation 2015,10 76-83 [6] Assessment of Blend and Content Uniformity.Technical Discussion of Sampling Plans and Application of ASTM E2709/E2810.Journal of Pharmaceutical Innovation 2015,10 84-97
原文在這; CDE「混合均勻度指導原則」解讀提煉,含量RSD標准為±5%! (aisoutu.com)
D. 滴定分析測含量方法驗證要怎麼做
1、需要用基準物質的測定進行驗證比對。
2、例如，測定小蘇打含量，就要測定基準物碳酸氫鈉的含量的准確性進行方法驗證。
3、滴定方法：採用鹽酸標准溶液進行滴定，需要按照標准規定，經雙人8平行滴定。取其平均值作為分析結果。
4、將分析結果與基準物的標准值比對，誤差小於正負0.2%時，即為合格。
5、所有滴定的儀器（滴定管、容量瓶、吸量管）都必須進行體積校準。