⑴ 分光光度法和比色法有何異同
1、原理不同
(1)、分光光度法的原理基於朗伯一比爾(Lambert - Beer)定律,在分光光度計中,將不同波長的光連續地照射到一定濃度的樣品溶液時,便可得到與不同波長相對應的吸收強度。利用該曲線進行物質定性、定量的分析方法。
(2)、比色法的原理是基於被測物質溶液的顏色或加入顯色劑後生成的有色溶液的顏色,顏色深度和物質含量成正比,則根據光被有色溶液吸收的強度,即可測定溶液中物質的含量。
2、特點不同
(1)、分光光度法具有靈敏度高、操作簡便、快速等優點,是生物化學實驗中最常用的實驗方法。
(2)、比色法以生成有色化合物的顯色反應為基礎,針對性強,使用條件較為嚴格:反應應具有較高的靈敏度和選擇性,反應生成的有色化合物的組成恆定且較穩定,它和顯色劑的顏色差別較大。
3、歷史發展不同
(1)、比色法的歷史比分光光度法悠久。早在公元初古希臘人就曾用五倍子溶液測定醋中的鐵,1795年,俄國人也用五倍子的酒精溶液測定礦泉水中的鐵。比色法作為一種定量分析的方法,大約開始於19世紀30~40年代。而分光光度法是現代社會普遍使用的一種測定物質含量的方法。
(2)、隨著光學儀器製造技術的發展,紫外-可見分光光度計應用日益普及,精密度較高而價格又較低的紫外-可見分光光度計已逐漸代替光電比色計,分光光度法也隨之逐漸代替了比色法。
二、相同點
1、兩個方法均是用來進行物質含量測定地點定性、定量方法;均需要一定的條件和設備。
(1)比色法是什麼測定方法通常也稱為擴展閱讀:
一、常用的比色法有兩種:目視比色法和光電比色法,兩種方法都是以朗伯-比爾定律(A=εbc)為基礎。
1、常用的目視比色法是標准系列法,即用不同量的待測物標准溶液在完全相同的一組比色管中,先按分析步驟顯色,配成顏色逐漸遞變的標准色階。
2、試樣溶液也在完全相同條件下顯色,和標准色階作比較,目視找出色澤最相近的那一份標准,由其中所含標准溶液的量,計算確定試樣中待測組分的含量。
3、與目視比色法相比,光電比色法消除了主觀誤差,提高了測量准確度,而且可以通過選擇濾光片來消除干擾,從而提高了選擇性。
4、但光電比色計採用鎢燈光源和濾光片,只適用於可見光譜區和只能 得到一定波長范圍的復合光, 而不是單色光束,還有其他一些局限,使它無論在測量的准確度、靈敏度和應用范圍上都不如紫外-可見分光光度計。
5、在分光光度計中,將不同波長的光連續地照射到一定濃度的樣品溶液時,便可得到與不同波長相對應的吸收強度。
6、如以波長(λ)為橫坐標,吸收強度(A)為縱坐標,就可繪出該物質的吸收光譜曲線。利用該曲線進行物質定性、定量的分析方法,稱為分光光度法,也稱為吸收光譜法。
7、用紫外光源測定無色物質的方法,稱為紫外分光光度法;用可見光光源測定有色物質的方法,稱為可見光光度法。它們與比色法一樣,都以Lambert-Bee定律為基礎。
8、上述的紫外光區與可見光區是常用的。但分光光度法的應用光區包括紫外光區,可見光區,紅外光區。波長范圍:
(1)、200~400nm的紫外光區
(2)、400~760nm的可見光區
(3)、2.5~25μm(按波數計為4000cm-1~400cm-1)的紅外光區。
⑵ 什麼叫比色法操作上應該注意什麼問題
比色法是通過比較或測量有色物質溶液顏色深度來確定待測組分含量的方法。早在公元初古希臘人就曾用五倍子溶液測定醋中的鐵。原理是基於被測物質溶液的顏色或加入顯色劑後生成的有色溶液的顏色,顏色深度和物質含量成正比,則根據光被有色溶液吸收的強度,即可測定溶液中物質的含量。
操作注意事項:選擇適當的細胞接種濃度,保證細胞培養結束時濃度不至於過滿;實驗時應設置調零孔,溶媒孔,加葯孔;避免血清干擾:一般選小於10%胎牛血清的培養液進行。
比色法的原理:
利用有色物質對特定波長光的吸收特性來進行定性分析的一種方法,其原理是基於被測物質溶液的顏色或加入顯色劑後生成的有色溶液的顏色,顏色深度和物質含量成正比,則根據光被有色溶液吸收的強度,即可測定溶液中物質的含量。
如利用光電效應,將透過有色溶液後的光強度成正比例地變換為電流的強度來進行比色定量的方法。
以上內容參考:
網路-比色法
⑶ 比色測定的基本原理是什麼操作步驟有哪些
比色測定的基本原理,操作步驟:
原理:
比色分析是基於溶液對光的選擇性吸收而建立起來的一種分析方法,又稱吸光亮度法。
步驟:
1. 用相同型號的比色管。
2. 配製等體積的系列標准樣品。
3. 配製待測樣品(與標准樣品等體積)。
4. 對比,找出相同的濃度。
⑷ 光度分析的方法
光度分析的方法
(1)目視比色法
用眼睛比較溶液顏色的深淺以確定待測組分含量的方法,稱為目視比色法。最常用的是標准系列法。它是用一套質料相枯滲同、大小形狀相同、帶有刻度、等體積的比色管組成。將一系列不同體積的標准溶液依次加入比色管中,取一定量的待測溶液置於另一比色管中,然後分別加入等量的顯色劑及其它試劑,最後用水稀釋至刻度(比色管容量有10、25、50、100mL等幾種)。搖勻並放置一定時間待反應達平衡後,從管口垂直向下觀察,比較待測液與標准溶液顏色的深淺。若待測液與某一標准液顏色深度一致,則說明兩者濃度相等;如果待測液的顏色深度介於某相鄰兩標准之間,則取其平均值作為待測液的濃度。
目視比色法儀器簡單、操作簡便、靈敏度也較高、顯色反應如不遵從比耳定律也能進行。因而它被廣泛應用於准確度要求不高的常規分析野搜中。
目視比色法的主要缺點是准確度不高,如果待測溶液中存在第二種有色物質,甚至無法進行測定。另外,由於許多有色溶液顏色不夠穩定,標准系列不能久存,經常在測定時需同時配製。
(2)光度分析法
通常,將使用光電比色計測定有色溶液的吸光度進行定量分析的方法稱為光電比色法,將使用分光光度計進行測定的方法稱為分光光度法。兩種方法的測定原理是相同的,所不同的僅在於獲得單色的方法不同,光電比色法是採用濾光片,而分光光度法是利用棱鏡或光柵單色器。由於兩者均基於吸光度的測定,所以可統稱為光度分析法。操作步驟都是測量一系列標准溶液的吸光度,繪制工作曲線。並在相同條件下,測量待測試樣的吸光度,由工作曲線上查出試樣中待測物的含量。
光度沒脊脊法與目視比色法比較,具有下列優點:
a.使用儀器代替人眼進行測量,消除了人工的主觀誤差,從而提高了准確度。
b.測定溶液中有其它有色物質共存時,可以選擇適當的單色光和參比溶液來消除干擾,因而可提高選擇性。
c.使用標准曲線法可簡化手續,加快分析速度。
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⑸ 比色法是什麼意思
以生成有色化合物的顯色反應為基礎,通過比較或測量有色物質溶液顏色深度來確定待測組分含量的方法。比色法作為一種定量分析的方法,開始於19世紀30~40年代。比色分析對顯色反應的基本要求是:反應應具有較高的靈敏度和選擇性,反應生成的有色化合物的組成恆定且較穩定,它和顯色劑的顏色差別較大。選擇適當的顯色反應和控制好適宜的反應條件,是比色分析的關鍵。