現有病毒的主要分析檢測方法

A. 植物病毒檢測方法

植物病毒病是農業生產上一種重要病害，嚴重影響農作物的產量和質量, 目前還沒有1種治療效果較理想的葯劑，對發病植株做到早期診斷及提前檢測就顯得尤為重要。植物病毒學歷經近百年的發展，植物病毒的檢測方法與手段也在不斷發展與改進。常用的方法有侵染力測定法、血清學方法、電子顯微鏡計數和分子生物學法等。
1.4.1侵染力測定法
侵染力測定法是將病毒樣本接種在植物上，根據侵染力的大小定量。它的靈敏度在所有定量法中是比較高的，而且是其他定量法的基礎。設計一種新的定量法，如果不經過侵染力的驗證，將無法判斷測定的是病毒或者是具有侵染力的病毒。侵染力測定法包括局部枯斑法、澱粉－碘斑法、系統感染率的測定法等。侵染力測定多用粗汁液來接種，為了避免抑制物質的作用和使半葉枯斑數目控制在一定范圍，須用緩沖液稀釋接種物。
局部枯斑法 1929年F.O.Holmes發現TMV在心葉煙（Nicotiana glutinosa）接種葉片上引起局部壞死斑點，在一定的病毒濃度范圍內，所產生的斑點數目與病毒濃度成正比例。這一發現成為病毒侵染性定量測定的基礎（田波，1987）。所有機械傳染的病毒都有可能應用局部斑點法，但實際上只有少數病毒具有可用於定量測定的局部斑寄主。一個待測樣品所形成的斑點數目除取決於接種物中病毒濃度外，還受試驗植物種類、環境條件和接種物中是否含有病毒抑制物質的影響。
澱粉－碘斑法 當所研究的病毒沒有過敏性枯斑寄主時，採用此法。Holmes（1931）發現TMV接種的煙葉上有時形成明顯的黃化斑塊，但不能用於計數。將這種接種葉用95％乙醇加熱到80℃固定，然後用I2和KI混合液（10克I2，30克KI，1500毫升H2O）染色時，則侵染點處出現澱粉－碘的藍色反應。當下午採摘葉片，褪色過夜，然後用碘液染色，則侵染點較周圍組織著色淺；當採摘葉片前，植株先在黑暗中放幾個小時，再用碘液染色，則侵染點組織著色深。這是由於病毒侵染既降低光合組織中碳水化合物的形成，也降低碳水化合物從光合組織中的運出。澱粉－碘染色的強弱受環境條件的影響較大，不如局部枯斑法可靠，但在標准化條件下仍可用於侵染性的定量測定。
侵染性滴度法 當上述方法都不適用時，可採用侵染性滴度法。即把欲測定樣品用緩沖液稀釋，可用十倍稀釋、成倍稀釋、半倍稀釋或更低稀釋。這種方法的缺點是需用大量實驗植物，但可得到較好的結果。此方法可用於介體傳染的病毒。

B. 病毒檢測方法

檢測病毒方法有：特徵代碼法、校驗和法、行為監測法、軟體模擬法， 這些方法依據的原理不同，實現時所需開銷不同，檢測范圍不同，各有所長。
1、特徵代碼法：
特徵代碼法被早期應用於SCAN、CPAV等著名病毒檢測工具中。國外專家認為特徵代碼法是檢測已知病毒的最簡單、開銷最小的方法。

2、校驗和法：
將正常文件的內容，計算其校驗和，將該校驗和寫入文件中或寫入別的文件中保存。在文件使用過程中，定期地或每次使用文件前，檢查文件現在內容算出的校驗和與原來保存的校驗和是否一致，因而可以發現文件是否感染，這種方法叫校驗和法，它既可發現已知病毒又可發現未知病毒。在SCAN和CPAV工具的後期版本中除了病毒特徵代碼法之外，還納入校驗和法，以提高其檢測能力。

3、行為監測法：
利用病毒的特有行為特徵性來監測病毒的方法，稱為行為監測法。通過對病毒多年的觀察、研究，有一些行為是病毒的共同行為，而且比較特殊。在正常程序中，這些行為比較罕見。當程序運行時，監視其行為，如果發現了病毒行為，立即報警。

4、軟體模擬法：
多態性病毒每次感染都變化其病毒密碼，對付這種病毒，特徵代碼法失效。因為多態性病毒代碼實施密碼化，而且每次所用密鑰不同，把染毒的病毒代碼相互比較，也無法找出相同的可能做為特徵的穩定代碼。雖然行為檢測法可以檢測多態性病毒，但是在檢測出病毒後，因為不知病毒的種類，難於做消毒處理。

C. 計算機病毒的主要檢測方法有哪些

1. 比較法
用原始備份與被檢測的引導扇困悶區或文件進行比較。只要用常規DOS軟體和PCTOOLS等工具軟體就可以進行。發現新計算機病毒就只有靠比較法和分析法，有時必須結合這兩者來一同工作。使用比較法能發現異常，如文件的長度有變化，或雖然文件長度未發生變化，但文件內的程序代碼發生了變化。保留好原始備份是非常重要的，製作備份時必須在無計算機病毒的環境里進行。
比較法的好處是簡單、方便，不需專用軟體。缺點是無法確認計算機病毒的種類名稱。另外，造成被檢測程序與原始備份之間差別的原因尚需進一步驗證，這些要用到以後講的分析法，查看變化部分代碼的性質，以此巧冊來確證是否存在計算機病毒。
2. 加總比對法(Checksum)
根據每個程序的檔案名稱、大小、時間、日期及內容，加總為一個檢查碼，再將檢查碼附於程序的後面，或是將所有檢查碼放在同一個資料庫中，再利用此加總對比系統，以判斷是否感染了計算機病毒。
這種技術可偵測到各式的計算機病毒，但最大的缺點就是誤判斷高，且無法確認是哪種計算機病毒感染的，對於隱形計算機病毒也無法偵測到。
3. 特徵字串搜索法
用每一種計算機病毒體含有的特定字元串對被檢測的對象進行掃描，如果在被檢測對象內部發現了某一種特定位元組串，就表明發現了該位元組串所代表的計算機病毒。國外對這種按搜索法工作的計算機病毒掃描軟體叫Virus Scanner。
4. 人工智慧陷阱技術
一種監測計算機行為的常駐式掃描技術，它將所有計算機病毒所產生的行為歸納起來，一旦發現內存中的程序有任何不當的行為，系統就會有所警覺，並告知使用者。
這種技術的優點是執行速度快、操作簡便，且可以偵測到各式計算機病毒，是一個至少具有主動保護功能的新技術;其缺點就是程序設計難，且不容易考慮周全。
5. 分析法
使用分析法的人不是普通用戶，而是防殺計算機病毒技術人員。分析法是防殺計算機病毒工作中不可缺少的重要技術，任何一個性能優良的防殺計算機病毒系統的研製和開發都離汪寬彎不開專門人員對各種計算機病毒的詳盡而認真的分析。

D. 自我檢測新冠3個方法

新型冠狀病毒檢測的3種方式主要是核酸檢測、病毒基因序列檢測以及血清學檢測。通過這三種檢測方法，頃喊可以判斷受檢者是否感染新型冠狀病毒，是檢測新型冠狀病毒常用的方法。

1、核拿襲酸檢測：核酸檢測是對採集的病毒核酸進行直接檢測，具有特異性強、敏感度高的特點，是新型冠狀病毒檢測的主要方法。整個檢測過程包括標本處理、核酸提取以及PCR檢測等，核酸檢測結果顯示為陽性時，可確診感染新型冠狀病毒；

E. 花卉類病毒的診斷和鑒定方法有哪些

類病毒因為不具有外殼蛋白，所以不能用血清學、電鏡等方法來診斷和檢測。類病毒常用的檢測方法有生物學檢測、雙向電泳、RT-PCR和分子雜交等方法。

1 生物學檢測

利用類病毒的特異鑒別寄主來診斷和檢測。如菊花矮化類病毒（CSVd），可以從待檢樣品中抽提低分子RNA，接種到特定的指不植物，如菊花的Mistletm品種、爪哇三七（Gynura auanyiana）、番茄（Lycopersicon esculentum）。接種緩沖液的組成是100mmolTris，10mmolEDTA，pH7.5。接種時用沾有接種原的剎須刀在菊花和爪哇三七的莖部輕輕切割5～10刀，再用棉棒塗抹。番茄可以用4～5葉期的幼苗直接用塗抹法接種。被接種植物放在30℃左右的溫室培育，觀察症狀。接種36d後，菊花上出現黃色斑點，頂葉較少，從上數第3～5葉上症狀更明顯。接種45d後，爪哇三七出現頂葉捲曲症狀。但沒有柑橘裂皮病類病毒接種時症狀明顯。接種60d後，番茄上不表現任何症狀。但回接菊花的Mistletm品種，證明CSVd在番茄上屬於潛伏侵染。

生物檢測需要嚴格的溫度條件，如果溫度條件控制不嚴格便難以得到可信的結果。此外，檢測批量樣品，還需要較大的空間。

22 雙向電泳檢測

2.1 核酸的抽提

抽提緩沖液的組成為0.13mol Tris-HCl、0.017mol EDTA、1mol LiCl、0.83%DS，5%PVP，簡稱為TESLP。1g鮮菊花葉片加2～5倍體積的TESLP緩沖液磨碎，加入等體積的水飽和酚∶氯仿（1∶1）處理，離心分離後用乙醇沉澱回收全核酸。之後用methoxy ethaml除去多糖，用CTAB回收核酸，加等體積的4mol的LiCl，離心回收2mol LiCl的可溶組分，用乙醇沉澱濃縮後溶於適當體積的TE（10mmol Tris-HCl，1mmol EDTA，pH8.0）溶液中。

2.2 正反向電泳

按照Singh等的方法進行。首先在室溫下用1倍TBE電泳緩沖液分離核酸，直到染料XC-FF達近底部的7.5%為止。然後換成加熱到沸騰的0.125倍TBE電泳緩沖液，顛倒正負極並用表面加熱器保持電泳板的溫度在80℃以上，直到染料XC-FF到達膠的上端。電泳完後用銀染色觀察核酸的有無（圖1）。

圖1 正反向電泳法檢測菊花矮化類病毒RNA示意圖

與生物接種相比，正反向電泳凝膠電泳檢測菊花矮化類病毒，可以從相當於2.8mg鮮重的菊花樣品中檢測到菊花矮化類病毒CSVd，並同時可檢測10～20個樣品材料。總之，制備用於正反向電泳的粗核酸的方法簡便，需要的鮮葉量少，可以作為該類病毒的常規檢測方法。正反向電泳凝膠電泳與雙向凝膠電泳比較，省去了第一項電泳完後割膠回收的試驗步驟，操作更為簡便。

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