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薄層層析定量分析方法

發布時間:2024-03-11 18:50:56

『壹』 薄層色譜分析是什麼

薄層色譜簡單原理

薄層色譜又叫薄板層析,是色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質的一種很重要的實驗技術,屬固—液吸附色譜,它兼備了柱色譜和紙色譜的優點,一方面適用於少量樣品(幾到幾微克,甚至0.01微克)的分離;另一方面在製作薄層板時,把吸附層加厚加大,因此,又可用來精製樣品,此法特別適用於揮發性較小或較高溫度易發生變化而不能用氣相色譜分析的質。此外,薄層色譜法還可用來跟蹤有機反應及進行柱色譜之前的一種「預試」。
薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又稱薄層層析,屬於固-液吸附色譜。是近年來發展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法,它兼備了柱色譜和紙色譜的優點。一方面適用於小量樣品(幾到幾十微克,甚至0.01μg)的分離;另一方面若在製作薄層板時,把吸附層加厚,將樣品點成一條線,則可分離多達500mg的樣品。因此又可用來精製樣品。故此法特別適用於揮發性較小或在較高溫度易發生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外,在進行化學反應時,常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應是否完成。

薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板(10×3cm左右)上均勻的塗一層吸附劑或支持劑,帶乾燥、活化後將樣品溶液用管口平整的毛細管滴加於離薄層板一端約1cm處的起點線上,涼干或吹乾後置薄層板於盛有展開劑的展開槽內,浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時,將色譜板取出,乾燥後噴以顯色劑,或在紫外燈下顯色。記下原點至主斑點中心及展開劑前沿的距離,計算比移值(Rf):

薄層色譜儀
薄層色譜法簡稱TLC,是在50年代從經典柱色譜法和紙色譜法基礎上發展起來的一種色譜技術。60年代後,人們對薄層色譜法的標准化、規范化及擴大應用等方面進行了許多工作,使該方法日趨成熟。

薄層色譜法工作的過程是這樣的:
首先將要分離的混合物點在用固定相均勻塗布的薄板的一端;
然後將薄板的這一端浸入流動相,在流動相浸濕薄板的過程中,樣品隨著流動相被展開,不同的組分隨流動相以不同的速度向前移動,最終保留在薄板上的不同位置,從而達到分離的目的;

再用適當的方法對不同的組分進行檢測,就可以定性或定量的對樣品作出分析。
此時的固定相被稱為載體或吸附劑,而流動相被稱為展開劑,被展開的樣品叫做斑點。

薄層色譜的特點:
靈敏度及解析度高、分離快速、操作方便、同時分離多個樣品、樣品預處理簡單、設備簡單。由於這些特點,薄層色譜在實際工作中的應用十分廣泛。

由於通常用薄層色譜分析法進行定量分析的過程中,薄層掃描儀是最為重要的,因此對它進行略詳的介紹。
薄層掃描儀的基本結構及主要功能基本是相同的,每台儀器都包括光源、分光器、檢測器、數據處理及信號輸出幾個部分。

典型的檢測方法是吸收檢測法,其基本測定原理為,用一束長寬可以調節的一定波長、一定強度的光照射到薄層斑點上進行整個斑點或被斑點反射的光束,根據光束被斑點吸收後強度的變化來確定組分的含量。 薄層色譜法的優點特別適合我國國情,已成為許多實驗室不可缺少的分離手段。該方法在科研、教學、臨床、生產等各個領域中廣泛應用,分離對象也無所不包。
目前它正向聯用的方向發展,如薄層色譜--氣相色--質譜聯用,或都薄層色譜--紅外光譜等的聯用。

醫葯工業
薄層色譜在醫葯工業中有很廣泛的應用,特別應用在中草葯、中成葯的成分分析和合成葯物分析。

臨床醫學
在臨床醫學中,它主要用於對生物樣品和有毒的物質進行分析。

環境科學
薄層色譜可以用來進行農葯及農葯殘留分析,或都對有毒金屬、多環芳烴進行檢測。

食品化學
食品添加劑的安全性問題已婚經越來越多的得到關注,用薄層色譜對食品添加劑進行分析是一種簡單有效的方法。

化學化工
薄層色譜在化學、化工方面也有很多應用,例如對高分子材料的助劑、填料等進行分析。

『貳』 薄層色譜法定性和定量分析合成色譜的原理是什麼

薄層色譜法(TLC),系將適宜的固定相塗布於玻璃板、塑料或鋁基片上,成一均勻薄層。待點樣、展開後,根據比移值(Rf)與適宜的對照物按同法所得的色譜圖的比移值(Rf)作對比,用以進行葯品的鑒別、雜質檢查或含量測定的方法。薄層色譜法是快速分離和定性分析少量物質的一種很重要的實驗技術,也用於跟蹤反應進程。
基本原理
薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法,它利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同,使在移動相(溶劑)流過固定相(吸附劑)的過程中,連續的產生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附,從而達到各成分的互相分離的目的。薄層層析可根據作為固定相的支持物不同,分為薄層吸附層析(吸附劑)、薄層分配層析(纖維素)、薄層離子交換層析(離子交換劑)、薄層凝膠層析(分子篩凝膠)等。一般實驗中應用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。吸附是表面的一個重要性質。任何兩個相都可以形成表面,吸附就是其中一個相的物質或溶解於其中的溶質在此表面上的密集現象。在固體與氣體之間、固體與液體之間、吸附液體與氣體之間的表面上,都可能發生吸附現象。物質分子之所以能在固體表面停留,這是因為固體表面的分子(離子或原子)和固體內部分子所受的吸引力不相等。在固體內部,分子之間相互作用的力是對稱的,其力場互相抵消。而處於固體表面的分子所受的力是不對稱的,向內的一面受到固體內部分子的作用力大,而表面層所受的作用力小,因而氣體或溶質分子在運動中遇到固體表面時受到這種剩餘力的影響,就會被吸引而停留下來。吸附過程是可逆的,被吸附物在一定條件下可以解吸出來。在單位時間內被吸附於吸附劑的某一表面積上的分子和同一單位時間內離開此表面的分子之間可以建立動態平衡,稱為吸附平衡。吸附層析過程就是不斷地產生平衡與不平衡、吸附與解吸的動態平衡過程。例如用硅膠和氧化鋁作支持劑,其主要原理是吸附力與分配系數的不同,使混合物得以分離。當溶劑沿著吸附劑移動時,帶著樣品中的各組分一起移動,同時發生連續吸附與解吸作用以及反復分配作用。由於各組分在溶劑中的溶解度不同,以及吸附劑對它們的吸附能力的差異,最終將混合物分離成一系列斑點。如作為標準的化合物在層析薄板上一起展開,則可以根據這些已知化合物的Rf值(後面介紹Rf值)對各斑點的組分進行鑒定,同時也可以進一步採用某些方法加以定量。

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