❶ 檢測噬菌體存在的方法
1、將細菌培養液塗平板,如果有噬菌斑說明有噬菌體。如果提取噬菌體的核酸物質,應該大量培養噬菌體,然後離心去除細菌碎片,轉移上清後用氯仿-乙醇法即可。
2、有的噬菌體可能是溶源性的,已經整合到細菌染色體上了,可以試試不同的條件把它誘導出來,像是UV照射,高溫之類的。
3、如果噬菌體的背景清楚的話,可以設計引物用分子生物學的方法來檢測噬菌體核酸。
4、「針對於溶源性的噬菌體有沒有相關的文獻介紹把它誘導出來的方法。」用絲裂黴素也可以誘導出來
❷ 噬菌體滴度的測定的方法具體操作步驟是什麼
操作步驟 1. 在5~10ml LB培養基中接種單個ER2537克隆,振搖孵育直至對數生長中期(OD600~0.5) 2. 在細胞生長時,微波融化頂層瓊脂糖凝膠,分裝至無菌培養管內,每管3ml。維持在45℃備用。 3. 37℃預熱LB/IPTG/Xgal培養板,備用。 4. 以LB培養基10倍比稀釋噬菌體。 建議稀釋范圍:對擴增的噬菌體培養上清,108-1011;對未擴增的篩選洗脫液,101-104。每次稀釋都換用新的加樣槍頭,最好使用氣溶膠阻隔槍頭以避免交叉污染。 5. 一旦ER2537培養物長至對數生長中期,分裝至微量離心管中,每管200ml。 6. 將倍比稀釋的噬菌體上清加入含細菌培養物的微量離心管中,一支微量離心管中僅加入一種稀釋液10ml,快速渦旋,室溫孵育1-5min。 7. 轉移至含有45℃頂層瓊脂糖凝膠的管中,快速渦旋混勻,立即傾倒至預熱的LB/IPTG/Xgal平板上,輕緩搖動平板使頂層膠均勻分布。 8. 冷卻平板5min,37℃倒置培養過夜。 9. 噬斑計數以噬斑數為100左右的平皿為准,噬斑數乘以稀釋度即可獲得每10ml噬菌體的滴度-噬斑形成單位(pfu)。 生物幫上面有詳細的步驟, http://www.bio1000.com/experiment/microbiology/ 微生物學實驗技術,醫學微生物學實驗技術,微生物學檢驗,現代微生物學及實驗實訓技術,微生物學實驗思考題。
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