體外葯物分析方法的建立

1. 葯物分析：檢驗的基本程序與方法

一、鑒別試驗
鑒別就是利用化學法、物理法及生物學方法來確證生化葯物的真偽。通常，需用標准品或對照品在同一條件下進行對照試驗。枝蠢現將常用的鑒別方法簡述如下。
1.化學反應法 通常利用葯物與某試劑在一定條件下反應，生成有顏色的產物或沉澱進行鑒別。例如，溶菌酶的鑒別採用呈色法：溶菌酶分子中的四個肽鍵上的氮原子能與銅離子（cu2＋）絡合，生成有顏色的絡合物，肽鍵越多，產生的顏色越深。胃蛋白酶的鑒別採用沉澱法：胃蛋白酶是具有高效、專一催化活性的特殊蛋白質，易受酸、鹼、重金屬或有機溶劑等的作用，破壞蛋白質肽鏈的空間結構，引起蛋白質變性，生成不溶性的沉澱。
2.紫外分光光度法 三磷酸腺苷二鈉的分子中具有共軛系統，能吸收紫外光。本品的0.01mol/l鹽酸水溶液（20μg/ml），在（257±1）nm的波長處有最大吸收。a250nm/a260nm的值應為0.17～0.27。
3.酶法 尿激酶是專屬性較強的蛋白水解酶，根據尿激酶能激活牛纖維蛋白溶酶原，而具有相同作用的鏈激酶不能激活牛纖維蛋白溶酶原而加以區別，並用直接觀察溶解纖維蛋白作用的氣泡上升法作為判斷指標。
4.電泳法 肝素的鑒別採用糖凝膠電泳法：肝素是由d-硫酸氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸分子間組成的酸性粘多糖，其水溶液帶強負電荷歷純，於瓊脂凝膠板上，在電場作用下，向正極方向移動，與肝素國家標准品對照，其移動位置應相應，
5. 生物法利用生物體進行試驗來鑒別葯物。例如，用家兔驚厥試驗來鑒別胰島素，是通過胰島素的降血糖作用進行鑒別的，當劑量過大，血糖降低至一定水平（約30％），家兔即發生驚厥，迅速靜注50％葡萄糖注射液，補充血糖，驚厥停止，說明驚厥是胰島素所致低血糖而引起的。又如，根據肝素鈣具有延長血凝時間的特性進行鑒別。
應該指出，由於生化葯物的結構復雜，仍有一部分生化葯物目前還未找到有效的鑒別方法。例如糜蛋白酶、糜胰蛋白酶、胰蛋白酶等。
二、雜質檢查 生化葯物分子較大，結構復雜，有時成分並非單一，純化工藝較難，因此，生化葯物的雜質檢查就顯得非常重要。
1.一般雜質檢查 生化葯物的一般雜質檢查項目包括氯化物、硫酸鹽、磷酸鹽、銨鹽、鐵鹽、重金屬、酸度、溶液的澄清度或溶液的顏色、水分及乾燥失重、熾灼殘渣等。其檢查的原理及方法與化學葯物中的一般雜質檢查相同，不再贅述。
2.特殊雜質檢查特殊雜質主要是指從生產工藝中引入或原料中帶入的雜質。許多生化葯物是從生物組織中提取或用微生物發酵法製得，葯物中易殘存一些雜質或其他成分。例如，胰蛋白酶是從動物膜中提取製得的一種蛋白水解酶，在制備過程中.易帶入雜質糜蛋白酶，中國葯典（1995年版）和usp（23）均規定要檢查此酶，根據胰蛋白酶的特性選用n-乙醯-l-酪氨酸乙酯為底物作糜蛋白酶的限度檢查。糜蛋白酶的限度為2500個胰蛋白酶單位中不得大於50單位，按每1mg胰蛋白酶為 2500個單位和每1mg糜蛋白酶為1000單位，折算成重量，則糜蛋白酶的限度為5％（g/g）。
三、安全性檢查
1.熱原檢查法（家兔法） 本法是將一定劑量的供試品，靜脈注入家兔體內，以其體溫升高的程度，判定該供試品中所含熱原是否符合規定，是一種限度試驗法。
（1）檢查法：取適用的家兔3隻，測定其正常體溫後15min以內，自耳靜脈緩緩注入規定劑量並溫熱至約38℃的供試品溶液，然後每隔1h按前法測量其體溫1次，共測3次，從3次體溫中最高的一次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高度數。如3隻家兔中有1隻體溫升高0.6℃或以上，或3隻家兔體溫升高均低於 0.6℃，但升高的總數達1.4℃或1.4℃以上，應另取5隻家兔復試，檢查方法同上。
（2）結果判斷：在初試3隻家兔中，體溫升高均低於0.6℃，並且3隻家兔體溫升高總數低於1.4℃；或在復試的5隻家兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃ 以上的家兔數僅有1隻，並且初試、復試合並8隻家兔的體溫升高總數為3.5℃或3.5℃以下，均認為供試品肢搭咐的熱原檢查符合規定。

2. 如何建立好葯物含量的高效液相色譜分析方法

1，首先必須去進行配製葯物溶液前處理的工作。找出該葯物的溶解性，探索出該葯物的有效溶劑，使該葯物能在該溶劑中充分溶解，這是葯物溶液配製的前處理必然途徑，也是進行高效液相色譜含量分析的首要條件。

2，然後就是根據該葯物配製溶液的前處理方法，配製好適當濃度的葯物溶液，利用該葯物溶液，在紫外-可見分光光度計上進行紫外掃描，找到該葯物的最大吸收波長，確立適合的高效液相色譜分析的檢測波長。因為它是進行高效液相色譜含量分析的基本條件

3，再是色譜柱的選擇：根據葯物的極性來選擇合適極性的色譜柱類型

4，再是流動相的確立。配製一系列的流動相，考察合適的流動相。

5，再是准確度考察。通過精密度、重復性和重現性的考察來衡量儀器的准確度

6，接著是線性關系考察。配製不同濃度的一系列溶液，進行其溶液的色譜掃描。根據所得的不同濃度下的葯物峰面積作為縱坐標（Y軸）、以溶液濃度為橫坐標（X軸）進行線性回歸，得到其線性圖，考察其線性程度，即線性相關系數R=？。考察的目的就是：為了我們在做含量分析時，選擇一個合適的濃度進行檢測，不至於你配製的待測溶液濃度范圍不在線性范圍之內，造成測量結果的錯誤。

7，再是最低檢測濃度和檢測限的考察。目的是為了考察這種方法的實用性，是否符合痕量分析的要求。

8，再是回收率考察。目的是考察方法的准確性。

9，再是穩定性考察。目的是考察試驗方法的時間性，指導我們在分析檢測時，建立合適的溶液配製到進樣的時間段，保證實驗結果的准確性。

10，最後是專屬性考察。

3. 葯物分析中所建立的方法需要分析方法驗證其內容有哪些

葯物分析中所建立的分析方法內容介紹如下：

3、PH值測定方法：

pH值是溶液中氫離子活度的負對數，用來表示溶液的酸度。用於pH值測定的裝置稱為pH計或酸度計，酸度計由pH測量電池和pH指示器兩部分組成。

4、光譜技術：

光譜技術的主要原理就是可以通過不同的頻率對其要檢測的葯物進行輻射，在一定范圍中的頻率被一些物質接受的時候就會出現振動以及轉動的狀況。

5、化學發光技術：

在葯物分析檢測中，化學發光法是一種較為常見的技術方式，其主要就是基於化學檢測系統中相關檢測物的濃度以及體系的化學發光強度在特定狀況之下呈線性定量關系的原理，通過儀器對整個體系的化學發光強度進行檢測，確定待檢測的實際含量的方式就是一種痕量分析方法。

6、色譜法：畝判

色譜法又稱為「色譜分析」、「色譜分析法」、「層析法」，是一種分離以及分析的方式與手段。它主要就是通過不同的物質在不同的相態之下對其進行有選擇的分配，通過流動相對固定相中存在的混合物進行洗脫操作，而在混合物中存在的不同物質會則會通過不同的速度基於固定相進行移動，進而實現分離的最終效果。

7、電泳法：

電泳法是生物技術及生化葯物分析的重要手段之一，具有靈敏度高、重現性好、檢測范圍廣、操作簡便並兼備分離、鑒定、分析等優點。

8、DNA擴增法：

DNA擴增技術屬於PCR技術，可以把試管中的DNA樣品的片段進行拓展，達到上百萬倍左右，可以通過肉眼直接對其進行觀察。

4. 葯物分析主要是採用什麼等方法和技術

葯物分析主要採用色譜、光譜、質譜、比色、生物分析法的方法和技術。具體如下：
1、色譜分析法：包括氣體色譜、檔派則液相色譜、毛細管電泳等多種方法，主要用於葯物分子結構的鑒定、分離和純化。
2、光譜分析法：包括紅外光譜、紫外光譜、熒羨碧光光譜、原子吸收光譜等方法，可以用於葯物中特定化合物的鑒定、測定和定量分析。
3、質譜分析法：包行棚括質譜儀、液相色譜-質譜聯用儀等方法，常常用於葯物中極微量的化合物分離、鑒定和定量分析。
4、比色分析法：該方法通過觀察溶液的顏色變化來確定葯物中特定化合物的存在量。
5、生物分析法：包括生物檢測、酶聯免疫吸附測定、分子生物學方法等，主要應用於葯物代謝產物、代謝途徑的鑒定和制劑中雜質的檢驗等。

5. 葯物分析常用的分析方法有哪些

葯物分析常用的分析方法有中和法歷行配、非水滴定法、銀量法、絡合法、碘量法、重氮化法。

一、葯品檢驗工作的基本程序

取樣；肢指性狀觀測；鑒別；檢查；含量測定；檢驗記錄與報告

三、統計學

測量誤差：測量值和真實值之差。絕對誤差和相對誤差。真實值：是有經驗的人用最可靠的方法對試樣進行無限次測定所帶飢得的平均值，實際上就是理論值。

系統誤差：方法；試劑；儀器；操作誤差偶然誤差：不可定或隨機誤差，由偶然原因引起。可增加平得測定次數。測量值的准確度表示測量的正確性，測量值的精密度表示測量的重現性。精密度是表示准確度的先決條件，只有在消除了系統誤差後，才可用精密度同時表達准確度。