核酸檢測用的哪種化學分析方法

『壹』 核酸檢測是怎麼檢測

核苷酸增加無損檢測技術，是一系列立即檢驗病原菌核苷酸的技術性統稱，包含基因表達介導的核苷酸增加無損檢測技術(TMA)、即時瑩光聚合酶鏈反應(PCR)，根據對靶核苷酸立即增加或對其附加的數據信號增加的方式，使極為少量的核苷酸變為形象化的光學或可視性數據信號。

一、血液為何需要開展dna檢測？
因為基本的血液血清學無損檢測技術方法學要素，包含酶鏈免疫吸附實驗(ELISA)、電化學發光免疫力剖析實驗(CLIA)，會使一些病原菌不檢和漏驗，經血清學檢測陰性的血液也並並不是100%安全性的，仍存有靜脈注射傳播疾病的風險性。關鍵原因:基本檢測病毒的漏撿:病毒感染感染者「潛伏期」捐血、病毒變異、免疫力緘默性感染(immunosilent infection)、人工服務實際操作不正確。一些己知病毒感染未檢驗:如CMV、B19、HTY、登革熱病、Pion等。未知病毒:探索與發現病毒感染，如WNV、SARS、寨卡病毒等。選用核苷酸增加檢驗則可減少經血液傳播疾病的風險性。

二、血液dna檢測的實際意義
1.減少乙肝檢測潛伏期，減少靜脈注射風險性。說白了「潛伏期」，就是指從感染病源剛開始，直到用某類檢驗方式可以檢驗到該病源存有才行的這一段時間。因為感染後病毒顆粒在於抗原體、抗原釋放出來入血，如HCV感染後，在將近1～3月的時間里，感染者身體沒有或僅有少量而沒法檢驗出的抗原，而血液卻具備感染性。因而抗原體、抗體檢測的「潛伏期」較長，如HBsAg、抗HIV檢驗的「潛伏期」各自為56d和22d，抗-HCV檢驗的「潛伏期」則長達70d。研究表明，(NAT)檢驗的確可以減少潛伏期，但針對不一樣的病毒感染，其高效率也是有差別，這與血清學檢驗的基本值和dna檢測實驗試劑的敏感度相關。
2、別的優點：血液dna檢測除開能顯著減少潛伏期外，與血清學方式對比，也有本身優點：
(1)敏感度高，特異性強:dna檢測敏感度遠超醫學免疫學方式檢驗，此外，核苷酸鹼基配對的精確性決策了dna檢測的特異性能比醫學免疫學檢驗強。

(2)一些特殊情況dna檢測可能是唯一的方式:如外周血單核細胞中或肝臟中融合的病毒感染;病毒感染的亞型或變異性;抗原體基因變異後抗原融合結構域轉變或不產生抗體;產生抗原體一抗原一氧化氮合酶，使醫學免疫學檢驗展現假陰性;感染中後期或漫性感染時抗原體/抗原
三、在我國血液dna檢測狀況

『貳』 核酸檢測能選擇用哪種方式么

目前主要使用的方法有以下六種方法：
一、核酸序列依賴性擴增法
NASBA是由一對引物介導的、連續均一的、體外特異性核苷酸序列等溫擴增RNA的新技術。反應在 42 ℃進行 ,可在 2 h內將RNA模板擴增約 109倍。NASBA原理是提取病毒RNA,加入AMV逆轉錄酶、RNA酶H、T7RNA聚合酶和引物進行擴增。整個反應分非循環相和循環相:在非循環相中,引物I與模板RNA退火後在AMV逆轉錄酶的作用下合成cDNA,形成RNA:DNA雜合體,隨即RNaseH降解RNA,引物Ⅱ與cDNA 退火, 在反轉錄酶作用下合成第2條DNA互補鏈。雙鏈DNA可在T7RNA聚合酶的作用下,經其啟動子序列起動而轉錄RNA，RNA又可在反轉錄酶的作用下反轉錄成DNA，進入循環相,對模板進行大量擴增。
二、轉錄介導的擴增技術
TMA技術原理與NASBA基本一致，略有不同之處是TMA利用的是MMLV逆轉錄酶及T7 RNA聚合酶兩種酶，MMLV逆轉錄酶既有逆轉錄酶的活性又具有RNA酶H活性。反應在 41.5 ℃進行 ,可在 1 h內將RNA模板擴增約109倍。
三、連接酶酶促鏈式反應(LCR)
LCR是基於靶分子依賴的寡核苷酸探針相互連接的一種探針擴增技術，是繼PCR後新發展的一種較有前景的體外擴增技術。它的原理就是由2段寡核苷酸單鏈DNA探針與目標序列雜交,當該2段DNA探針與沒有發生突變的模板褪火後,如果2探針是緊鄰的,中間沒有核苷酸間隔,則可在連接酶作用下連接起 來,連接以後的新鏈又可以作為模板,引導下一周期的連接產生新的子鏈。若連接區段發生核苷酸的鹼基突變,則連接反應不能發生,擴增反應終止。
四、多聚酶鏈反應檢測法(PCR)
PCR技 術的基本原理類似於DNA的天然復制過程，其特異性依賴於與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性—退火—延伸三個基本反應步驟構成。
① 模板DNA的變性：模板DNA經加熱至93 ℃左右一定時間後，使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結合，為下輪反應作準備。
② 模板DNA與引物的退火(復性)：模板DNA經加熱變性成單鏈後，溫度降至55 ℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合。
③ 引物的延伸：DNA模板—引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模板，按鹼基配對與半保留復制原理，合成1條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈，重復循環變性—退火—延伸三過程，就可獲得更多的 「半保留復制鏈」，而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成1個循環需2～4 min， 2～3 h就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。檢測HIVRNA,需要先利用逆轉錄反應將RNA轉錄為cDNA，繼而以cDNA為模板進行PCR擴增即可，這樣的反應稱為RT-PCR。
五、實時熒光定量PCR技術
實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號實時監測整個PCR進程,最後通過標准曲線對未知模板進行定量分析的方法。
本技術的原理是使用熒光基團標記探針,5′端標記熒光基團R,3′端標記淬滅基團Q,在沒有PCR擴增時,由於熒光基團和淬滅基團空間距離很近,使熒光基團被淬滅,不發熒光;而當PCR擴增時,引物與熒游標記的特異性探針同時結合在模板上,熒游標記的探針與模板的結合位置位於上下游引物之間, 利用Taq酶的5′3′外切酶活性,將熒光探針水解,熒光基團被釋放出來,由於在空間上與淬滅基團分開,則發出熒光。發出的熒光可以被熒光探頭檢測到, 一邊擴增,一邊檢測,這樣就實現了「實時」檢測。該技術不僅實現了PCR從半定量到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它具有特異性強、自動化程度高、有效解決了PCR污染問題等特點。
六、支鏈DNA檢測法——bDNA
bDNA是定量檢測血漿中的HIV1型RNA的一種方法。bDNA是指人工合成的帶有側鏈的DNA片段,在其每個側鏈上都可以標記被激發的標記物。將HIV的RNA通過離心從病毒顆粒中釋放出來,然後用捕獲探針1將其捕獲到微孔中。捕獲探針2與病毒RNA的另一部分特異結合,又與預放大探針結合。後者再與放大探針即bDNA探針雜交。兩套靶探針分別與病毒RNA的pol基因的不同區域特異結合。在微孔中形成HIVRNA寡核苷酸復合物。再加入1種化學發光底物孵育後可放大化學發光信號。通過發光強度來定量,因為發光強度與樣品中HIVRNA含量成比例。bDNA不存在擴增物的交叉污染,這 較PCR是一大進步。bDNA有數十個覆蓋整個基因組的探針,可以方便地檢測HIV某些變異株,但靈敏度不及PCR，提高bDNA靈敏度是一大難點

『叄』 迄今為止，我國檢測新冠病毒有哪些方法

1、熒光PCR法。PCR法指的是聚合酶鏈式反應，能將微量的DNA大幅增加。熒光PCR檢測的原理為——隨著PCR的進行，反應產物不斷累積，熒光信號強度也等比例增加。最後通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
2、聯合探針錨定聚合測序法。這種檢測主要是用專門的儀器檢測測序載片上DNA納米球攜帶的基因序列。這種檢測的靈敏度高，不容易漏診，但結果也容易受多種因素的影響而不準。
3、恆溫擴增晶元法。檢測原理是基於核酸之間的互補結合特性開發的一種檢測方式，能夠用於定性或定量測量存在於生物體內的核酸。
4、病毒抗體檢測。抗體檢測試劑是檢測血清中由病毒進入人體後刺激人體產生的IgM或IgG抗體，IgM抗體出現較早，IgG抗體出現較晚。
5、膠體金法。膠體金法是用膠體金試紙進行檢測，也就是常說的快速檢測試紙。這種試紙經過特殊標記，上面有孔，用於滴入受檢者的血清樣本。
6、磁微粒化學發光法。化學發光法是一種高度敏感的免疫檢測，凡具有抗原性的物質都可以用這種方法測定。

『肆』 核酸含量的測定方法及原理都有哪些

核酸檢測的主要原理其實是反轉錄和聚合酶鏈式擴增反應。也叫做RT-PCR。目前對新型冠狀病毒進行的核酸檢測也主要採用此種方式。簡單來說就是採取患者鼻咽拭子、痰和其他下呼吸道分泌物、血液、糞便，檢測人員通過。核酸提取試劑盒提取患者標本里邊兒的核酸，然後把提取到的核酸放進檢測試劑中進行復制擴增。然後再根據檢測結果進行判斷如果是陰性代表沒有感染，如果是陽性代表有感染。目前對新型冠狀病毒核酸檢測會存在假陰性的可能，所以可以選擇多次測量。如果連續兩次核酸檢測為陰性，同時沒有臨床症狀可以排除感染，並且對已經感染了新型冠狀病毒肺炎的患者，如果連續兩次檢測核酸為陰性，注意間隔時間必須大於一天，同時臨床症狀緩解，影像學好轉也可以解除隔離。

『伍』 pcr核酸檢測是什麼意思方法及步驟

核酸檢測是目前全球用來對是否攜帶新冠病毒進行確定的一種有效方式。目前大家主要使用的是鼻拭子、咽拭子以及抗體血清lgm進行參考。但是根據最新的新加坡入境要求是進行pcr核酸檢測，那麼pcr核酸檢測是什麼意思呢？

pcr核酸檢測是什麼意思

PCR的意思是聚合酶鏈式反應，能夠用來擴增DNA，從而將微量的DNA擴增到能夠檢測的程度。有些病毒的核酸是DNA，需要採用這個方法進行檢測。所以PCR並不是進行的檢查，而是檢測DNA的一種方法。比如乙肝病毒DNA定量，用的就是這一種方法。檢查DNA的目的，一方面是可以診斷疾病，如果連病原體的DNA都能檢測到，就說明感染了這種病原體;另一方面是判斷病毒復制的多少，從而判斷病情嚴重程度或者治療效果。

pcr核酸檢測方法與步驟

進行核酸檢驗，需要經過取樣、留樣、留存、核酸提取、上機檢測五個步驟。

核酸檢測的第一步就是採集人體分泌物，用鼻試子或咽試子擦拭鼻腔或咽後壁及雙側咽扁桃體處。

第二步醫務人員進行留樣，將試子頭浸入細胞保存液中，折斷尾部後立即旋緊管蓋。

第三部要將樣本放入密閉袋中，保存好並及時送檢。

第四步將樣本送進實驗室，提取核酸。

第五步，將提取物進行熒光PCR擴增反應。

核酸是什麼

核酸(nucleicacid)，是一類由核苷酸(nucleotide)構成的生物大分子，分為核糖核酸(ribonucleic
acid，宴前者RNA)和脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic
acid，DNA)兩類，其中RNA多為單鏈結構，DNA多為雙鏈結構。除朊病毒(prion)外，核酸是構成生命所必需的生物大分子，其主要作用是構成生命體的遺傳信息載體，除此之外，還有部分核酸可作為及參與構成具有生物活性的酶分子或晌薯其他分子機器
。

核酸檢測是什麼

核酸檢測顧名思義就是針對核酸開展檢測。

核酸檢測有何獨特的優勢呢?為何能作為新冠病毒確診的「金標准」呢?

其實每一種檢測方法都有其擅長的應用場景。以病毒檢測為例，通常的免疫學檢測方法(膠體金、ELISA、化學發光等)的檢測對象是病毒的抗原或抗體，相當於「側面描繪」。由於從感染到可檢測存在一個時間窗口期，因此免疫學檢測方法一般不合適作為早期診斷。

假陽性與假陰性

1、假陽性

假陽性通常比較少。一般實驗室人員操作不當會導致樣本間交叉污染或擴增產物的遺留污染，該種情況下可能會導致假陽性。

不過假陽性可以通過嚴格控制檢測流程、以及執行若干個陰性樣本隨機參與檢測的策略而有效規避。

2、假陰性

在這里需要說明的是，PCR檢測的假陰性與臨床的假陰性實際上不是一個概念。

以網路上激烈討論的新冠病毒的診斷為例，臨床假陰性是指臨床症狀和影像學高度疑似被感染、但PCR檢測卻多次或始終為陰性的情況;而PCR檢測假陰性是指所採集樣本中存在足夠量的新型冠狀病毒但卻沒有檢出悔簡的情況。

避免核酸檢測的假陰性，主要需要解決：(1)被感染者的細胞中有足量的病毒、(2)採集樣本中可以採集到含有病毒的細胞、以及(3)檢測出樣本中的病毒這三個環節。

其中PCR試劑盒的技術參數優劣主要影響第三個檢測環節。

僅針對第三個檢測環節，若樣本中病毒數量低於一個程度(低於最低檢測限)，PCR試劑盒就無法檢出。從這個角度看，PCR檢測的假陰性是無法完全避免的。這也是為何需要補充開發病毒的特異抗體檢測的原因所在。

沈陽PCR核酸檢測實驗室

實驗室建設堅持高標准、嚴要求，嚴格按照國家《醫學生物安全二級實驗室建築技術標准》進行建設，建設面積100餘平方米，分為試劑貯存和准備區、標本制備與提取區、擴增和產物分析區三個區域。實驗室內配置全自動核酸提取儀、實時熒光定量PCR儀、擴增儀、高壓滅菌器、B2型生物安全櫃、超凈工作台、超低溫冰箱等儀器，消毒和防護設施齊全，符合相關生物實驗室安全標准。為防止實驗室外的區域被污染，實驗室的氣壓均為負壓，有效降低感染風險。此外，實驗室配備了污水處理系統，達到了廢液的合理排放和處理。

*目前我國多地區建設了PCR核酸檢測實驗室用以進行新冠病毒核酸檢測

『陸』 核酸檢驗方法

核酸檢測具體流程如下：
1. 核酸提取
使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備並按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置於-20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應置於-80℃保存。
2. 逆轉錄合成cDNA
逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。建議使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。
3. PCR擴增反應（使用二次擴增的套式PCR擴增方法）
PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板（DNA或cDNA）。在擴增儀中，按照設定的程序進行擴增。使用二次擴增的套式PCR擴增方法。
4. 擴增產物定性分析
擴增產物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標准比較，判斷擴增片段是否在預期的分子量范圍內。其它擴增產物分析方法還有限制性內切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。自動化核酸擴增儀使用酶聯比色分析或熒光探針雜交等原理測定。
5.結果判定和完成報告單
（1）實驗成立的條件：每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照，只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立，可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。
（2）HIV核酸檢測陽性：發現核酸陽性反應，應該重復採集樣品進行復測，復測結果呈核酸陽性反應則判定為核酸陽性，復測結果為核酸陰性反應則判為不確定結果，需進一步隨訪檢測。
（3）HIV核酸檢測陰性：只可報告本次實驗結果陰性。
（4）應在完成檢測後5個工作日內發出檢測報告。

『柒』 核酸檢測原理

核酸檢測原理：每一個生物的核酸是不一樣的，通過核酸檢測就是要確定人身上是否帶有病毒，也就是為了檢出病毒的攜帶者。病毒攜帶者如果有症狀的話就是病人，如果沒有症狀就是無症狀感染者。

核酸檢測也是檢測病毒的方法，它可以更早發現感染。現在臨床中對乙肝、丙肝、艾滋病都開展了核酸檢測，可以在抗體產生前檢測到血液中是否存在病毒。

而一些呼吸道疾病可以通過咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸檢測來判斷是否感染，以及推測是否具有傳染性。季節性流感、禽流感、冠狀病毒感染等通過咽拭子檢測可以方便地判斷出上呼吸道是否存在病毒成分，從而判斷被檢測者是否屬於感染者。

(7)核酸檢測用的哪種化學分析方法擴展閱讀：

新冠病毒的核酸檢測已經是比較成熟的檢測方法了，只要在咽喉部位擦拭幾秒鍾就可以採集到標本。通過分析判斷是否有新冠病毒的核酸成分，可以盡早發現感染者，甚至在感染者出現症狀前就可以檢測到陽性。

感染者經過隔離治療後咽拭子檢測陰性說明病毒已經清除，不具有傳染性了。目前兩次咽拭子核酸檢測陰性是確診病例和無症狀感染者解除隔離的標准之一。