dna合成實驗研究方法是什麼

⑴ 基因分離的化學合成是怎樣做的

化學方法合成DNA片段是一種十分成熟和簡便的技術，利用DNA合成儀，根據待合成的DNA片段預定的核苷酸序列，可自動地將4種核苷酸單體按3′→5′磷酸酯鍵連接成寡核苷酸片段。目前常用此方法合成引物、寡核苷酸接頭（linker）以及基因片段等。

根據某基因測定的核苷酸序列，或者根據蛋白質氨基酸序列推導的核苷酸序列，可以化學合成相應的基因片段。不同的是組成基因的DNA片段一般比較長，先必須按基因的核苷酸序列化學合野侍成幾個200bp左右的DNA片段，然後採用酶促連接法再組裝成為含完整目的基因的DNA片段。

主要包括磷酸二酯法和亞磷酸三酯法兩種方法合成基因生段，磷酸二酯法的基本原理是，將兩個分別在5′-或3′-末端帶有適當保護鹼基的脫氧單核苷酸連接起來，形成一個帶有磷酸二酯鍵的脫氧二核苷酸；亞磷酸三酯法原理是將所要合成的寡聚核苷酸鏈的3′-末端鏈脊李先以3′-OH與一個不溶性載體，如多孔玻璃珠（CPG）連接，然後依次從3′-5′的方向將核苷酸單體加上去，所使用的核苷酸單體的活性官能團都是經過保護的，合成反應的一個循環周期分為脫保護基、偶聯反應、封端反應和氧化作用四步反應。

化學合成寡聚核苷酸片段的能力一般局限於150200bp，而絕大多數基因的大小超過了這個范圍，需要將較長的基因先幾個合成較短的寡核苷酸片段後，再適當連接組裝成完整的基因，而這往往使基因制備難度加大，而且化學基因合成相比之下比較價格昂貴，棚遲因此這種方法主要適用於已知核苷酸序列的、分子量較小的目的基因的制備。對於較長的基因的合成，可根據基因或氨基酸序列，將化學合成寡核苷酸方法與酶促合成DNA的方法結合起來，也可進行基因的人工合成，具體的操作為：首先化學合成多個含有80100個核苷酸的寡聚核苷酸；每個寡聚核苷酸片段之間有1924個核苷酸的重疊序列；再將各個寡聚核苷酸等量（摩爾濃度）混合，在DNA聚合酶（或emphasis：role=italicTaqemphasis酶）作用下，通過重疊延伸拼接技術（sequence：overlapped：extension，SOE-PCR），各寡聚核苷酸又作為模版，使單鏈部分補齊成為雙鏈；DNA變性成單鏈，各單鏈寡聚核苷酸片段之間仍有1924個核苷酸的重疊序列，兩個單鏈部分再經SOE-PCR補齊，獲得雙鏈。

⑵ 典型的DNA重組實驗通常包括哪些步驟

重組DNA技術主要包括四個步驟：提取目的基因、目的基因與運載體結合、將目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測和表達。

1、提取目的基因：

獲取目的基因主要有兩條途徑：一條是從供體細胞的DNA中直接分離基因；另一條是人工合成基因。直接分離基因最常用的方法是「鳥槍法」，又叫「散彈射擊法」。

2、目的基因與運載體結合：

目的基因與運載體結合的過程實際上是不同來源的DNA重新組合的過程，是基因工程的核心。

3、將目的基因導入受體細胞：

用人工方法使體外重組的DNA分子轉移到受體細胞，主要是借鑒細菌或病毒侵染細胞的途徑。目的基因導入受體細胞後，就可以隨著受體細胞的繁殖而復制，由於細菌的繁殖速度非常快，在很短的時間內就能夠獲得大量的目的基因。

4、目的基因的檢測和表達：

目的基因導入受體細胞後，是否可以穩定維持和表達其遺傳特性，只有通過檢測與鑒定才能知道。受體細胞必須表現出特定的性狀，才能說明目的基因完成了表達過程。

(2)dna合成實驗研究方法是什麼擴展閱讀：

重組DNA技術是指將一種生物體（供體）的基因與載體在體外進行拼接重組，然後轉入另一種生物體（受體）內，使之按照人們的意願穩定遺傳並表達出新產物或新性狀的DNA體外操作程序，也稱為分子克隆技術。因此，供體、受體、載體是重組DNA技術的三大基本元件。