研究微生物的方法

1. 微生物的培養方法有哪些

微生物培養法是在人為條件下繁殖微生物的方法。根據微生物的種類以及對養料、溫度、氧氣、水分、酸鹼度等環境條件的要求不同，並聯系生產和實驗上的具體要求，可有不同的培養方法。可分好氣培養法和厭氣培養法兩類。中海生物技術的培養基一是好氣微生物培養法，常用：
①搖床培養法，即將微生物接種於盛有液體培養基的三角瓶後，放在恆溫培養室中的搖床上作有節奏的振盪，使空氣不斷進入培養液中，促其良好生長;
②淺盤培養法，又稱表面培養法，在盤內放一淺層培養基，使微生物能夠充分接觸空氣，而有利於生長繁殖，但此法所需空間大，並且容易污染雜菌;
③深層培養法，適用於好氣微生物的大規模發酵培養，在大容積的液體培養基中，通入無菌空氣，並不斷攪拌，可使微生物充分接觸空氣，迅速繁殖並積累代謝產物。二是厭氣微生物培養法，實驗室常用化學還原劑或抽氣機吸除培養基中的分子氧，也有用靜止狀態的深層培養法。在生產中常用密封式發酵罐或不通風的固體發酵法。

2. 微生物多樣性研究方法有哪些及其各自的優缺點

微生物生態學，是指研究微生物與其他生物（包括微生物）。而微生物多樣性，微生物與環境之間的學科，是研究生物與生物，講的是微生物的物種的多樣性，微生物基因的多樣性和微生物生存的生態系統的多樣性。微生物生態學的重點在於關系的研究，而微生物多樣性在於現狀的研究生態學， 生物與非生物之間關系的一門學科，也就意味著，是一個多樣性的概念

3. 不可培養微生物的研究方法和研究意義

稀釋培養法和高通量培養法 d.pp3D 9/
在地球環境中，海洋環境中迄今可培養微生物的比例最低，僅為0.001% ～ 0.1%，這是由於海洋環境中主要是寡營養微生物，它們在人工培養時往往受到少數優勢生長的微生物的競爭作用而不能生長。為了克服該缺陷，1993 年Button從概率論的角度提出一個嶄新的方法，即稀釋培養法（Dilution culture）。該方法認為，當把海水中微生物群體稀釋至痕量時，在海水中主要存在的寡營養微生物可以不受少數幾種優勢微生物的競爭作用的干擾，因而主體寡營養微生物被培養的可能性會大大提高。隨後，Schut等的實際操作驗證了該理論的正確性。 ';/84j-3F
2002 年Connon在稀釋培養法的基礎上提出高通量培養法（High-throughput culturing，HTC）。將樣品稀釋至痕量後，採用小體積48 孔細胞培養板分離培養微生物。該方法不僅有效提高微生物的可培養性，還可在短期內監測大量的培養物，大大提高工作效率。Cho等利用該方法從太平洋近海和遠洋海水中也分離出多種新菌。Rappé 和Connon結合熒光原位雜交技術（FISH），對高通量培養法進行了改進，根據從培養板各孔中針對性地檢測SAR11 進化分支的海洋細菌的存在，在較短時間內對目標微生物進行了大量的培養。但是，稀釋培養法和高通量培養法成功的原因恰恰又是制約其進一步發展的障礙。在樣品稀釋、微生物間的不利作用被削弱的同時，有利作用也被削弱。例如，當微生物被極度稀釋、初始接種量很小時，一些微生物分泌的代謝產物也被稀釋，其他關聯微生物細胞由於缺乏這些必須的代謝產物，生長就會受到抑制；另外，缺少種間的共生關系和群體效應，很多微生物仍然不可培養。 O3!d(dY=_
tF`MT%{Va
3.2 擴散盒培養法 GOW"o"S
Kaeberlein〔2〕等在分離培養潮間帶底泥中的微生物時使用一種新穎的自製培養儀器，為其起名為擴散盒（Diffusiongrowth chamber）。擴散盒由一個環狀的不銹鋼墊圈和兩側膠連的0.1μm 濾膜組成，濾膜只能允許培養環境中的化學物質通過而不能讓細胞通過。將底泥樣品置於擴散盒內的半固體培養基中，擴散盒置於魚缸底部的天然海洋底泥上，往魚缸內加入天然海水並保證擴散盒內存有一定空氣供微生物生長。培養時，使天然海水循環流動，並不斷注入新鮮的海水。培養1 周後培養基上產生大量的微型菌落，數目高達接種微生物的40%。這種培養方法能較大程度地模擬微生物所處的自然環境，由於化學物質可以自由穿過薄膜，可保證微生物群落間作用的存在，提高微生物可培養性。擴散盒法的主要不足是操作比較繁瑣。 b%nkIPA
y~p4">]
3.3 細胞包囊法 hNO )~rt
Zengler 等將海水和土壤樣品中的微生物先進行類似稀釋培養法的稀釋過程，然後乳化，部分微生物形成了僅含單個細胞的膠狀微滴。然後將膠狀微滴裝入層析柱內，使培養液連續通過層析柱進行流態培養。層析柱進口端用0.1μm 濾膜封住，防止細菌的進入而污染層析柱；出口端用8μm 濾膜封住，允許培養產生的細胞隨培養液流出。該方法的特點是讓微生物在開放式培養液中生長，使培養環境接近於微生物的自然生長環境，能夠很好地提高微生物可培養性，但成本較高，不利於普及使用。 & zgPN8u
a Qmfrx
3.4 序列引導分離技術 _:5=| 2-E
序列引導分離技術（Sequence-guiding isolation）是根據微生物基因組中特定基因的特異性序列，設計引物或雜交探針，以培養物中目標序列存在和變化情況為標准，來指導對微生物最優培養條件的選擇，培養出新的微生物。Stevenson在細菌培養過程中採用了多種培養條件的組合，導致培養方案繁多復雜。為了減少分離細菌的工作量、節省時間，用PCR 作為監測手段來確定目標細菌是否得到培養。當細菌在固體培養基上長出菌落後，用緩沖液沖洗培養基表面，提取沖洗液中細菌的DNA，根據目標細菌的16S rDNA擴增情況判斷目標細菌的存在與否。繼續用PCR方法監測目標細菌直至分離得到純菌株。Béjà 等通過對尚未培養的海洋變形細菌的BAC 基因文庫進行研究，發現該類菌具有編碼視紫紅質的基因片段。視紫紅質是光營養過程中不可或缺的化學物質。據此設想增加光照可提高該菌的可培養性，而進一步的實驗結果驗證了該假設的正確性。此外，Breznak指出，分子原位雜交技術可以對推斷目標微生物的代謝方式和營養需求提供幫助，極大地節省工作時間，操作也很簡便，僅需要一種特異性的探針，顯示了在微生物培養時引入分子生物學技術作為引導的優勢和力量。

4. 研究腸道微生物有哪些方法與技術

研究腸道微生物有哪些方法與技術
腸道微生態系統是哺乳動物健康與疾病的重要基礎,在生理、病理、預防、治療中都具有重要的地位和作用[1]。對於哺乳動物,腸道微生物的營養作用非常重要,如合成維生素、消化碳水化合物、氨的利用、脂的利用以及合成酶類[2]。在食物相對缺乏時,腸道多形類桿菌對糖苷水解酶的分泌會增多,提高腸道微生物群系利用食物的能力[3]。可見,腸道微生態系統能根據食物的特點做出改變,以其功能的多樣性和較大的適應性來應對外界環境的變化。人體腸道微生物群基因的多態性還為宿主提供了許多人體自身所不具備的酶與生化途徑,從而使得人體不易消化的食物殘渣及上皮細胞分泌的內生粘液被發酵利用[4]。為探尋腸道微生物在機體的營養與健康以及疾病與治療機制中的作用,越來越多的科研工作者開始關注對腸道微生物的研究[5,6]。悉生生物學、厭氧培養技術、電鏡技術、細胞分子生物學、基因組學、代謝組學及蛋白質組學等現代科學技術的發展對腸道微生態的研究起到了積極的推動作用[7,8]。在Biolog等研究方法中,需先將腸道中的微生物提取出來,所得到的菌懸液,既保證活體微生物的種類和數量,又去除可能會干擾研究結果的雜質[9]。

5. 研究微生物代謝途徑常用的方法有哪些

微生物的代謝調節主要有兩種方式：酶合成的調節和酶活性的調節.
酶合成的調節
【酶合成的調節】：微生物細胞內的酶可以分為組成酶和誘導酶兩類.組成酶時微生物細胞內一直存在的酶,它們的合成只受遺傳物質的控制,而誘導酶則時在環境中存在某種物質的情況下才能夠合成的酶.例如,在用葡萄糖和乳糖作碳源的培養基本上培養大腸桿菌,開始時,大腸桿菌只能利用葡萄糖而不能利用乳糖,只有當葡萄糖被消耗完畢以後,大腸桿菌才開始利用乳糖,只有當葡萄糖被消耗完畢以後,大腸桿菌才開始利用乳糖.
酶活性的調節
【酶活性的調節】：微生物還能夠通過改變已有酶的催化活性來調節代謝的速率.酶活性發生主要原因時,代謝過程中產生的物質與酶結合,致使酶的結構產生變化.這種調節現象在核苷酸、維生素的合成代謝中十分普遍.
總結
上述兩種調節方式時同時存在,並且密切配合、協調作用的.通過對代謝的調節,微生物細胞內一般不會累積大量的代謝產物.

6. 微生物培養方法

微生物培養法是在人為條件下繁殖微生物的方法。根據微生物的種類以及對養料、溫度、氧氣、水分、酸鹼度等環境條件的要求不同，並聯系生產和實驗上的具體要求，可有不同的培養方法。可分好氣培養法和厭氣培養法兩類。中海生物技術的培養基一是好氣微生物培養法，常用：①搖床培養法，即將微生物接種於盛有液體培養基的三角瓶後，放在恆溫培養室中的搖床上作有節奏的振盪，使空氣不斷進入培養液中，促其良好生長;②淺盤培養法，又稱表面培養法，在盤內放一淺層培養基，使微生物能夠充分接觸空氣，而有利於生長繁殖，但此法所需空間大，並且容易污染雜菌;③深層培養法，適用於好氣微生物的大規模發酵培養，在大容積的液體培養基中，通入無菌空氣，並不斷攪拌，可使微生物充分接觸空氣，迅速繁殖並積累代謝產物。二是厭氣微生物培養法，實驗室常用化學還原劑或抽氣機吸除培養基中的分子氧，也有用靜止狀態的深層培養法。在生產中常用密封式發酵罐或不通風的固體發酵法。

7. 研究微生物的各種試驗方法總結！

推薦《微生物學實驗》咯，高教社出版的，作為實驗教材用的

8. 微生物研究方法

主要為如下：
一、顯微技術研究

二、無菌操作技術研究

三、純種培養技術

更為詳細的講解過程請參考：http://wenku..com/view/59e9691ca76e58fafab00311.html

9. 微生物群落結構的研究方法有哪些

分離培養技術在土壤微生物的研究中有很大的局限性,因為土壤中的微生物大部分還處於不能被分離培養狀態.隨著微生物研究技術的發展尤其是分子生物學技術的發展,一系列不依賴於培養的技術在土壤微生物研究中得到廣泛應用.本文介紹了生物標志物法、SCSU、DNA復性分析、DGGE、TGGE、ARDRA、T-RFLP、SSCP、PAPD和ERIC-PCR圖譜分析等方法在土壤微生物群落結構研究中的應用.