Ⅰ 幾種細胞固定方法
選擇最佳固定液標準是: (1)最好地保持細胞和組織的形態結構; (2)最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金屬的固定液在免疫組化和細胞化學技術中是禁用的; (3)不要用可能帶有自發熒光的固定劑,如帶有苦味酸的固定劑,還有甲醛升汞固定液,會使上皮細胞產生非特異性熒光; (4)固定劑的選擇、固定時間、溫度和PH值都會影響實驗結果。 單純固定液(1)4%中性甲醛固定液:最常用的固定液,能滿足常規HE及免疫組化、PCR等工作(Job)。中性甲醛是以PH7.2-7.4的磷酸緩沖液為溶劑配製的,其固定效果及對組織抗原性的保存均優於一般的4%甲醛固定液。此固定液配製後應密封並保存在陰涼處,保存時間不超過一個月。 甲醛(40%) 100ml 無水磷酸氫二鈉 6.5g 磷酸二氫鈉 4.0g 蒸餾水 900ml (2)乙醇固定液:使用時以80%-95%的濃度為宜,具有硬化、固定、脫水等作用,對組織滲透力較弱,因此很少單獨使用,但其保存組織中的核酸強於中性甲醛,故常用於有核酸操作的實驗或檢查,假如用於證實尿酸結晶和保存糖原,可用於100%乙醇固定組織。 (3)4%多聚甲醛固定液:主要用於培養細胞的固定。 混合固定液(1)乙醇-甲醛(乙醇-福爾馬林,AF)固定液:適用於皮下組織中肥大細胞的固定。該固定液有固定兼脫水作用,固定後的標本可直接入95%乙醇脫水。 甲醛(40%) 100ml 95%乙醇 900ml (2)B5(醋酸鈉-升汞-甲醛)固定液:多用於固定淋巴組織。染色前應進行脫汞沉澱處理。 無水醋酸鈉 1.25g升汞 6.0g蒸餾水 90ml 使用前加入甲醛 10ml (3)Bouin固定液:非凡適用於睾丸活檢組織的固定。Bouin液對組織固定較均勻,收縮很少,不會使組織變硬變脆。需現配現用。 飽和苦味酸水溶液(約1.22%) 75ml甲醛 25ml冰醋酸 5ml(4)Carnoy固定液:穿透能力強,可很好的固定細胞質和細胞核,非凡適用於固定外膜緻密的組織,也適用於糖原及尼氏小體的固定。 無水乙醇 60ml氯仿 30ml冰醋酸 10ml (5) Zenker固定液:經此液固定的標本,細胞核和細胞質染色頗為清楚,但成本較高且需非凡處理汞。該固定液要避免接觸陽光,以免引起化學變化而失效。 升汞 5.0g 重鉻酸鉀 2.5g 蒸餾水(加至)100ml
Ⅱ 組織和細胞的固定的方法有哪些
組織和細胞的固定的方法,浸潤法
浸潤法是組織化學和免疫
組織化學常用的固定方法,一次要處理許多組織樣品時也多用此法。
預先需估計固定劑的用量,並在取材前配好固定液,分裝於小容器內,在容器上標記組別和取材時間。容器內放人記錄組織類型的紙條,以便包埋時辨認。固定液的用量應是樣品的40倍,以保證組織充分固定。固定時間可根據所選固定液和組織類型而定。
若進行酶組織化學染色,應在4℃短時間固定,固定時間長會導致酶活性減弱,甚至消失。
可以到生物幫詳細的了解下,幹細胞專用培養基
http://doc.bio1000.com/show-3439.html
Ⅲ 請問組織和細胞的固定用什麼方法
灌流固定法
此法是經血管途徑,將固定液灌注到欲固定的器官內,使生活的細胞在原位及時迅速固定,取下組織之後再浸入相同的固定液內繼續固定。
灌流固定時大動物多採用輸液方式,將固定液從一側頸總動脈或股動脈輸入,從另一側切開靜脈放血,輸入固定液與放血同時進行。固定液的輸人量因個體不同而異,即500―2000ml不等。
生物幫上面有這方面的詳細內容,
http://www.bio1000.com/news/orgnization/3/
生物科研院所
生命科學研究所,生命科學學院,