液相分析pta雜質含量方法

Ⅰ 如何建立高效液相色譜法測定含量的方法

1 色譜條件的確定
專屬性是色譜條件建立的關鍵通常是採用
在被測物對照品(或供試品)中加入適量的雜質或輔
料以驗證所選色譜條件能否將各雜質與被測物
分離檢出
[2]
。應按1(w/w)被測物濃度的各雜質量
添加至被測物中模擬被測物中可能存在雜質的
狀態即有少量(約1)雜質存在時能否與被測物
達到完全分離(分離度大於1.5)以驗證系統適用
性。只有這樣才能較為客觀、科學地反映被測物的
實際情況。而不應將被測物與各雜質配製成相同濃
度的溶液因為實際檢測中不可能存在這種情況
且該濃度也不易確定。在實際檢測時由於被測物
濃度較大很易將相鄰雜質峰包含其中。另外還需
測定溶劑和輔料(檢測制劑時)是否有干擾。目前
美國葯典(USP)、英國葯典(BP)及許多進口產品的
質量標准中有關物質測定方法學的專屬性驗證均
採用此法。還須說明的是雜質與雜質峰間的分離
度達1.2即可而被測物與其相鄰雜質峰的分離度
必須大於1.5。
2 檢測波長的選擇
有關物質檢測的研究對象是雜質而非被測
物。但測定則是通過各自的峰面積來表達故波長
的選擇必須考慮被測物和各雜質在檢測波長下的校
正因子(f)是否相同。應分別制備相同濃度的被測
物與各雜質溶液經紫外掃描後以吸光度相近的波
長為檢測波長。在該檢測波長下分別進樣測定
由各峰面積計算校正因子。若f為0.81.2則表明
被測物與各雜質的f相同可消除f的影響。若f≤0.8
或f ≥1.2則應在計算時加入f。目前通常以被測物
的最大吸收波長為檢測波長、不加校正因子的計算
方法而未綜合考慮各雜質的f。
3 供試品溶液濃度的確定
供試品溶液濃度的確定也非常重要。雖然濃度
越高越能反映被測物中雜質存在的情況但若設定
過高會產生主峰嚴重拖尾、裂峰、柱超載和檢測器超載等情況若設定過低則靈敏度不夠無法
檢測雜質及其含量變化。
最低檢出濃度的測定可分為信噪比法和直接評
價法兩種
[3]
。後法是目前較為科學的做法即將儀
器的靈敏度調至較適宜的值(僅對靈敏度可調節的
儀器而言目前市場上主流品牌的液相色譜儀均已
設定了一個恆定、較為靈敏的值)然後將被測物
溶液不斷稀釋後進樣測定直至被測物峰面積無法
檢出為止此時的濃度即為最低檢出濃度。
最大進樣量則是採用不斷增加被測物溶液濃
度直至峰嚴重拖尾、裂峰、柱超載和檢測器超載
等情況出現。
根據最低檢出濃度採用「上推法」來確定
供試品溶液濃度如一般設定雜質總量小於1.0
對照液對照溶液的濃度至少應為最低檢出濃度的
2050倍供試品溶液濃度則應是最低檢出濃度的
20005000倍。同時還應考慮儀器、色譜柱等因
素對最低檢出濃度和最大進樣濃度的影響(即耐用
性因素)所以供試品溶液的濃度應在保證小於最
大進樣量的情況下適當設定得高些以保證該濃
度在任何試驗條件下均有足夠的檢測靈敏度。表
1為最低檢出濃度、最大進樣量、供試品溶液和對
照溶液間的比例關系(進樣量10µl規定雜質限度
1.0)。
4 線性試驗
在穩定性考察中如某雜質含量不斷增加
則說明被測物降解的途徑穩定、可循則有必要對
該雜質進行針對性地監控即採用該雜質對照品
(經確證結構後由人工合成獲得)以外標法准確測
定。此時與含量測定相似應進行線性試驗。
通常將雜質限度設定為該雜質的100濃度線性
驗證范圍10150(即相當於被測物測定濃度
表1 最低檢出量、最大進樣量、供試品溶液和對照
溶液間的比例關系
參數濃度/µg·ml
–
1
絕對量/ng相當於供試品
溶液濃度/與最低檢出
濃度的倍數
最大進樣量3000
最低檢出濃度0.110.02
供

Ⅱ 高效液相色譜儀分析樣品的步驟有哪些

一、預處理：
1、固體樣品：含水較低，粉碎過篩。含水量較高，取使用部分烘乾後，粉碎過篩。
2、液體樣品：攪拌混合均勻。
3、特殊樣品：根據實驗要求進行特殊處理。
二、提取：
1、浸提法(固-液萃取法)：將樣品浸泡在溶劑中，把固體樣品中的某些組分浸出。
2、萃取法(液-液萃取法)：利用被提取組分在互不相溶的兩種溶劑中分配系數的不同實現分離。
三、凈化：
1、萃取法：適用於液體樣品，少量多次。
2、化學法：通過使雜質或待測物發生化學反應而改變其溶解性，使其與原體系分離。
3、層析法：利用混合物中各組分理化性質的不同，使各組分在支持物上的移動速度不同，而將各組分分離。
四、濃縮：
1、常壓濃縮：通過升高溫度，將溶劑由液態轉化成氣態被抽走，從而達到濃縮目的。適用於揮發性和沸點相對較低的樣品。
2、減壓濃縮：通過抽真空，使容器內產生負壓，在不改變樣品化學性質的前提下降低樣品的沸點，使一些高溫下化學性質不穩定或沸點高的溶劑在低溫下由液態轉化成氣態被抽走，從而達到濃縮目的。
3、冷凍乾燥：冷凍的同時抽真空減壓，使溶劑升華。適用於生物活性樣品。
4、氮吹儀www.cnpetjy.com濃縮：採用氮氣對加熱樣品進行吹掃，使樣品迅速濃縮，達到快速分離純化的效果。適用於農殘檢測和制葯行業等樣品的批量處理。

Ⅲ 液相色譜儀檢測樣品中雜質含量如何計算

計算含量有內標法和外標法，最小二乘法等好多的，常用的就是外標一點法。
質量百分含量=樣品面積*對照品濃度*體積*稀釋倍數/對照品面積/稱樣量*100%

Ⅳ 高效液相色譜法的計算方法是怎樣的

[編輯本段]測定方法定量測定時，可根據樣品的具體情況採用峰面積法或峰高法。但用歸一法或內標法測定雜質總量時，須採用峰面積法。


面積歸一化法


測定供試品（或經衍生化處理的供試品）中各雜質及雜質的總量限度採用不加校正因子的峰面積歸一法。計算各雜質峰面積及其總和，並求出占總峰面積的百分率。但溶劑峰不計算在內。色譜圖的記錄時間應根據各品種所含雜質的保留時間決定，除另有規定外,可為該品種項下主成分保留時間的倍數。


主成分自身對照法

當雜質峰面積與成分峰面積相差懸殊時，採用主成分自身對照法。在測定前，先按各品種項下規定的雜質限度，將供試品稀釋成一定濃度的溶液作為對照溶液，進樣，調節檢測器的靈敏度或進樣量，使對照溶液中的主成分色譜峰面積滿足准確測量要求。然後取供試品溶液，進樣，記錄時間，除另有規定外，應為主成分保留時間的倍數。根據測得的供試品溶液的各雜質峰面積及其總和並和對照溶液主成分的峰面積比較，計算雜質限度。


內標法
測定供試品中雜質的總量限度
採用不加校正因子的峰面積法。取供試品，按各品種項下規定的方法配製不含內標物質的供試品溶液，注入儀器，記錄色譜圖i；再配製含有內標物質的供試品溶液，在同樣的條件下注樣，記錄色譜圖ⅱ。記錄的時間除另有規定外，應為該品種項下規定的內標峰保留時間的倍數，色譜圖上內標峰高應為記錄儀滿標度的30％以上，否則應調整注樣量或檢測器靈敏度。
如果色譜圖ⅰ中沒有與色譜圖ⅱ上內標峰保留時間相同的雜質峰，則色譜圖ⅱ中各雜質峰面積之和應小於內標物質峰面積（溶劑峰不計在內）。如果色譜圖ⅰ中有與色譜圖ⅱ上內標物質峰保留時間相同的雜質峰，應將色譜圖ⅱ上的內標物質峰面積減去色譜圖ⅰ中此雜質峰面積，即為內標物質峰的校正面積；色譜圖ⅱ中各雜質峰總面積加色譜圖ⅰ中此雜峰面積，即為各雜質峰的校正總面積，各雜質峰的校正總面積應小於內標物質峰的校正面積。

加校正因子測定供試品中某個雜質或主成分含量

按各品種項下的規定,精密稱（量）取對照品和內標物質，分別配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子測定用的對照溶液，取一定量注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品和內標物質的峰面積或峰高，按下式計算校正因子：
as／ms]校正因子f＝-
ar／mr
式中
as為內標物質的峰面積或峰高，ar為對照品的峰面積或峰高；
ms為加入內標物質的量,mr為加入對照品的量。
再取各品種項下含有內標物質的供試品溶液，注入儀器，記錄色譜圖，測量供試品（或其雜質）峰和內標物質的峰面積或峰高，按下式計算含量：ax
含量（mx）＝f×-as／ms
式中
ax為供試品（或其雜質）峰面積或峰高；
mx為供試品（或其雜質）的量。
f、as和ms的意義同上。
當配製校正因子測定用的對照溶液和含有內標物質的供試品溶液使用同一份內標物質溶液時，則配製內標物質溶液不必精密稱（量）取。


外標法

測定供試品中某個雜質或主成分含量
按各品種項下的規定,精密稱(量)取對照品和供試品，配製成溶液，分別精密取一定量，注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品和供試品待測成分的峰面積（或峰高），按下式計算含量：
a<[x]>
含量（mx）＝mr×-ar式中各符號意義同上
由於微量注射器不易精確控制進樣量，當採用外標法測定供試品中某雜質或主成分含量時，以定量環進樣為好。