㈠ 植物組培步驟
組織培養的步驟
一、培養基配製
配製培養基有兩種方法可以選擇，一是購買培養基中所有化學葯品，按照需要自己配製；二是購買商品的混合好的培養基基本成分粉劑，如MS、B5等。
自己配製可以節約費用，但浪費時間、人力、且有時由於葯品的質量問題，給實驗帶來麻煩。就目前國內的情況看，大部分還是自己配製。為了方便起見，現以MS培養基為例介紹配置培養基的主要過程。
1、配製幾種母液
（1）配製MS大量元素母液
一般將大量元素分別配製成100倍的母液，使用時再分別稀釋100倍。
分別稱取
NH4NO3 165g KH2PO4 17g
KNO3 190g CaCl2·2H2O 44g
MgSO4·7H2O 37g
各自配成1L的母液。倒入1L試劑瓶中，存放於冰箱中。
（2）配製MS微量元素母液
一般將微量元素配製成100倍母液。
依次稱取
KI 0.083g Na2MoO4·2H2O 0.025g
H3BO3 0.62g CuSO4·5H2O 0.0025g
MnSO4·H2O 1.69g CoCl2·6H2O 0.0025g
ZnSO4·7H2O 0.86g
配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放於冰箱中。
CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由於稱取量很小，如果天平精確度沒有達到萬分之一，可先配成調整液。
分別稱取
CuSO4·5H2O 0.05g CoCl2·6H2O 0.05g
各自配成100ml的調整液，然後取5ml就還有0.0025g的量。
（3）配製MS有機母液
一般配製成100倍MS有機母液。
依次稱取
肌醇 10g 鹽酸硫胺素（VB1） 0.01g
煙酸 0.05g 甘氨酸 0.2g
鹽酸吡哆醇（VB6） 0.05g
配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放於冰箱中。
（4）配製MS鐵鹽母液
一般配製成100倍MS鐵鹽母液。
依次稱取
EDTA二鈉 3.73g FeSO4·7H2O 2.78g
配成1L母液，倒入1L試劑瓶中，存放於冰箱中。
所以MS母液有5種大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有機母液和MS鐵鹽母液，共8種母液。
激素母液的配製
各種生長素和細胞分裂素要單獨配製，不能混合在一起，生長素類一般要先用少量95%的酒精或1當量的NaOH溶解，細胞分裂素一般要先用1當量的鹽酸溶解，然後再加蒸餾水定容。一般取100mg配成100ml母液。
2、配製培養基
以配置1L MS培養基為例，按順序進行如下操作：
（1）先在燒杯中放入一些蒸餾水。
（2）分別取上面八種母液10ml倒入。
（3）一般稱取30g蔗糖倒入，攪拌溶解。
（4）加蒸餾水用量筒定溶至1L。
（5）按設計好的方案添加各種激素，由於激素的用量很小，而且激素對組培植物的生長至關重要。所以有條件的話最好用微量可調移液器吸取，減少誤差。
（6）用精密試紙或酸度計調整PH至5.7-5.8。（有條件的話使用酸度計，比較精確） 可配1當量的HCL和1當量的NaOH用來調溶液PH值。
1當量HCL配製：用量筒量取8.3ml配成100ml溶液。
1當量NaOH配製：稱取NaOH 4g 配成100ml溶液。
（7）稱取5g左右瓊脂粉（質量好的瓊脂粉),倒入上面配好的溶液中，放在電爐上加熱至沸騰，直到瓊脂粉熔化。
（8）稍微冷卻後，分裝入培養容器中。無蓋的培養容器要用封口膜或牛皮紙封口，用橡皮筋或繩子扎緊。
（9）放入消毒滅菌鍋滅菌，滅菌20分鍾左右。
（10）滅菌後從滅菌鍋中取出培養基，平放在實驗台上令其冷卻凝固。
㈡ 植物細胞培養的方法有哪些
植物組織培養一般分為以下幾種：
1、胚胎培養
指以從胚珠中分離出來的成熟或未成熟胚為外植體的離體無菌培養。
2、器官培養
指以植物的根、莖、葉、花、果等器官為外植體的離體無菌培養，如根的根尖和切段，莖的莖尖、莖節和切段，葉的葉原基、葉片、葉柄、葉鞘和子葉，花器的花瓣、雄蕊（花葯、花絲）、胚珠、子房、果實等的離體無菌培養。
3、組織培養
指以分離出植物各部位的組織（如分生組織、形成層、木質部、韌皮部、表皮、皮層、胚乳組織、薄壁組織、髓部等），或已誘導的愈傷組織為外植體的離體無菌培養。這是狹義的植物組織培養。
4、細胞培養
指以單個游離細胞（如用果酸酶從組織中分離的體細胞，或花粉細胞，卵細胞）為接種體的離體無菌培養。
5、原生質體培養。
指以除去細胞壁的原生質體為外植體的離體無菌培養
組織培養的特點
1、培養條件可以人為控制
組織培養採用的植物材料完全是在人為提供的培養基和小氣候環境條件下進行生長，擺脫了大自然中四季、晝夜的變化以及災害性氣候的不利影響，且條件均一，對植物生長極為有利，便於穩定地進行周年培養生產。
2、生長周期短，繁殖率高
植物組織培養是由於人為控制培養條件，根據不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培養條件，因此生長較快。另外，植株也比較小，往往20-30d為一個周期。所以，雖然植物組織培養需要一定設備及能源消耗，但由於植物材料能按幾何級數繁殖生產，故總體來說成本低廉，且能及時提供規格一致的優質種苗或脫病毒種苗。
3、管理方便，利於工廠化生產和自動化控制
植物組織培養是在一定的場所和環境下，人為提供一定的溫度、光照、濕度、營養、激素等條件，極利於高度集約化和高密度工廠化生產，也利於自動化控制生產。它是未來農業工廠化育苗的發展方向。它與盆栽、田間栽培等相比省去了中耕除草、澆水施肥、防治病蟲等一系列繁雜勞動，可以大大節省人力、物力及田間種植所需要的土地
㈢ 植物組培步驟
一個完整的植物組織培養過程一般包括以下幾個步驟：
(1)准備階段
查閱相關文獻，根據已成功培養的相近植物資料，結合實際制訂出切實可行的培養方案。然後根據實驗方案配製適當的化學消毒劑以及不同培養階段所需的培養基，並經高壓滅菌或過濾除菌後備用。
(2)外植體選擇與消毒
選擇合適的部位作為外植體，採回後經過適當的預處理，然後進行消毒處理。將消毒後的外植體在無菌條件下切割成一定大小的小塊，或剝離出莖尖，挑出花葯，接種到初代培養基上。(3)初代培養
接種後的材料置於培養室或光照培養箱中培養，促使外植體中已分化的細胞脫分化形成愈傷組織，或頂芽、腋芽直接萌發形成芽。然後將愈傷組織轉移到分化培養基分化成不同的器官原基或形成胚狀體，最後發育形成再生植株。
(4)繼代培養
分化形成的芽、原球莖數量有限，採用適當的繼代培養基經多次切割轉接。當芽苗繁殖到一定數量後，再將一部分用於壯苗生根，另一部分保存或繼續擴繁。進行脫毒苗培養的需提前進行病毒檢測。
(5)生根培養
剛形成的芽苗往往比較弱小，多數無根，此時可降低細胞分裂素濃度或不加，提高生長素濃度，促進小苗生根，提高其健壯度。
(6)煉苗移栽
選擇生長健壯的生根苗進行室外煉苗，待苗適應外部環境後，再移栽到疏鬆透氣的基質中，注意保溫、保濕、遮蔭，防止病蟲危害。當組培苗完全成活並生長一定大小後，即可移向大田用於生產。