㈠ 簡述幾種DNA測序的方法，比較優缺點
基因晶元的原理是鹼基配對。樣品通過一條或多條已知序列經過標記的核酸探針進行雜交，通過檢測雜交結果而測定樣品序列，優點是可以一次分析大量樣品，缺點是容易出現假陽性。基因測序的原理是雙脫氧鏈終止法，用儀器測定一條DNA序列，優點是准確率高，沒有假陽性，只是通量略低。
㈡ 如何對基因測序結果進行分析
測序過程常見問題分析與解答
1、為什麼找不到pcr引物?
答：以下幾種情況，將無法找到做pcr時的引物序列
(1)用pcr引物作為測序引物進行測序時，所測序列是從引物3』末端後第一個鹼基開始的，所以自
然就找不到您的引物序列了。有兩種方法可以得到您的引物序列。對於較短的pcr產物(<800bp)，
可以用另一端的引物進行測序，從另一端測序可以一直測到序列的末端，就可以在序列的末端得到
您的引物的反向互補序列。對於較長的序列，一個測序反應測不到頭，因此就只能將您的pcr產物片
段克隆到適當的載體中，用載體上的通用引物進行測序。由於載體上的通用引物與您的插入序列之間
還有一段距離，因此就可以得到您的完整的引物序列。由於在測序的起始端總會有一些鹼基無法准確
讀出，因此，您如果想得到您的pcr產物的完整序列，最好克隆後進行測序。
(2
pcr產物用t載體克隆後，由於克隆的方向是隨機的，因此，當您在一條鏈上找不到您的引物序列
時，試圖在互補鏈上尋找您的引物序列。
(3)當測序引物離您的插入片段很近時，有時可能也無法找到您的引物的全序列。這主要是因為有時
測序的起始端由於未去除的染料或引物二聚體的干擾，造成起始區的序列不好，可能無法找到您的引
物完整序列。
(4)有時，質粒做模板進行測序時，由於某些原因，質粒上沒有插入外援片段，為空載體，所測的序
列完全為載體序列，此時自然也找不到引物序列。
2、dna測序樣品用什麼溶液溶解比較好?
答：溶解dna測序樣品時,用滅菌蒸餾水溶解最好。dna的測序反應也是taq酶的聚合反應,需要一個最佳的
酶反應條件.如果dna用緩沖液溶解後,在進行了測序反應時,dna溶液中的緩沖液組份會影響測序反應的體系條件,造成taq酶的聚合性能下降。
有人溶解dna測序樣品時使用te
buffer。的確，te
buffer能增加dna樣品保存期間的穩定性，
但te
buffer對dna測序反應有影響，根據經驗，推薦使用滅菌蒸餾水來溶解dna測序樣品。
3、提供dna測序樣品時，提供何種形態的比較好?
答：推薦客戶提供菌體，由測序公司來提取質粒，這樣dna樣品比較穩定。
如果自己提供dna樣品，我們也很歡迎，但一定要注意樣品純度和數量。
提供的測序樣品為pcr產物時，特別需要注意dna的純度和數量。pcr產物應該進行切膠回收，否則無法得到良好的測序效果。
有關dna測序樣品的詳細情況請嚴格參照「測序模板的要求」部分的說明。
㈢ DNA測序原理及方法
這位是搞分子生物學的嗎?
DNA測序的方法有很多種. 目前最常見的是雙脫氧終止法了. 在測序用的緩沖液中含有四種dNTP及聚合酶. 測序時分成四個反應, 每個反應除上述成分外分別加入2,3-雙脫氧的A, C, G, T核苷三磷酸(稱為ddATP, ddCTP, ddGTP, ddTTP), 然後進行聚合反應. 在第一個反應物中, ddATP會隨機地代替dATP參加反應一旦ddATP加入了新合成的DNA鏈, 由於其3位的羥基變成了氫, 所以不能繼續延伸. 所以第一個反應中所產生的DNA鏈都是到A就終止了; 同理第二個反應產生的都是以C結尾的; 第三個反應的都以G結尾, 第四個反應的都以T結尾, 電泳後就可以讀出序列了. 也許這樣說你不一定明白. 舉一個例子, 假如有一個DNA, 互補序列是GATCCGAT, 我們試著做一下:
在第一個反應中由於含有dNTP+ddATP, 所以遇到G, T, C三個鹼基時沒什麼問題, 但遇到A時, 摻入的可能是dATP或ddATP, 比如已合成到G, 下一個如果參與反應的是ddATP則終止, 產生一個僅有2個核苷酸的序列: GA, 否則繼續延伸, 可以產生序列GATCCG, 又到了下一個A了. 同樣有兩種情況, 如果是ddATP摻入, 則產生的序列是GATCCGA, 延伸終止, 否則可以繼續延伸, 產生GATCCGAT.
所以在第一個反應系統中產生的都是以A結尾的片段:
GA, GATCCGA,
同理在第二個反應中產生的都是以C結尾的片段:
GATC, GATCC,
在第三個反應中產生的都是以G結尾的片段:
G, GATCCG
在第四個反應中產生的都是以T結尾的片段:
GAT, GATCCGAT,
電泳時按分子量大小排列, A反應的片段長度為2, 7; C反應的為4, 5; G反應的為1, 6; T反應的為3, 8, 四個反應的產物分別電泳, 結果為
8 7 6 5 4 3 2 1
A | |
C | |
G | |
T | |
我們可以從右向左讀, 為GATCCGAT, 至此, 測序完成(上面這個圖在網路知道中顯示不正常, 因為網路知道的網頁用的是比例字體, 你如果想看它, 拷貝到記事本中, 用等寬的字體來看).
㈣ DNA測序基本原理及流程是什麼
PCR循環測序法是將PCR擴增和核酸序列分析技術相結合,從而形成的一種測定核苷酸序列的研究方法,也稱作線性擴增測序.該方法採用PCR儀加熱使DNA模板變性,在TaqDNA聚合酶作用下,以溫度循環模式在模板上進行多輪的雙脫氧核苷酸測序反應,線性擴增標記的DNA分子.
PCR循環測序法與以往的測序方法相比,其優點在於：大大減少所需的模板量；能提高測序反應產生的信號,降低了操作的復雜性,且聚合酶的用量減少；可在小量制備的模板上進行篩選反應；高溫下進行的測序反應使DNA聚合酶催化的聚合反應能夠通過模板二級結構的區域；雙鏈閉環DNA可以直接作為反應模板應用,不用作預先鹼變性處理.由於PCR循環測序法能夠簡單、快速地檢測特定序列,因此, PCR循環測序法在核酸序列分析研究中受到廣泛的重視.