非反應性研究方法

1. 臨床生物化學的研究方法

臨床生物化學在方法建立的原理確定後，尚需根據其原理來選擇合適的條件，以保證所建的方法可靠。下面以光度法為例介紹其條件選擇的主要環節。顏色反應是光度分析的基礎，因此，用作光度測定的顏色反應至少要具備以下幾條：反應有較高的特異性，從而干擾小；反應產生的有色物質吸光系數要大，大者靈敏度高；有色產物的離解度要小，小則穩定；此外，還要求有色產物有恆定的組成成分，使產生的顏色穩定。由於影響顏色反應的因素很多，如溫度、pH、試劑濃度、反應的時間等等。這些因素在建立新方法時都要逐項試驗，確定最佳實驗條件。
選擇合適的吸收光譜
實際上就是測定顏色反應產生的光吸收曲線。方法是在整個可見光區（400-700nm）以10nm（在接近最大吸收波長范圍還應再細分）間隔。分為十幾個點測定其在不同波長時的吸光度，然後以吸光度為縱坐標，波長為橫坐標繪成光吸收曲線。在條件許可的情況下，應採用雙光束分光光度計在可見光區進行波長掃描，結果較為可靠。同時，還應以同法分別測定其空白液和標准物顏色產物的吸收曲線。測定光吸收曲線的目的是找出最大吸收波長，作為光度法波長選擇的依據。因為在最大吸收波長測定，可獲得最大靈敏度，且能更符合比耳定律。然而在實際使用中，不能單純考慮靈敏度高，還要考慮在測定濃度范圍能否符合比耳定律，並能在光度計准確區域內（吸光度0.2-0.85之間）讀出讀數。有時由於測定的最大吸收波長並不是所要測定物質的特性吸收波長，即同時存在具有相似最大吸收的干擾物質，為了保證實驗的特異性，常改用特有而非最大吸收波長進行測定。例如用磷鉬酸測定血糖，選用波長420nm，溶液對此波長的吸收比其它波長光線的吸收都低，其目的是使參考值有一個較低的吸收，這樣可允許在相同情況下對高出參考值的血糖也能得到准確的讀數。因為在這項測定中，高血糖是常見的變化方向。
測定方法適用的濃度范圍
根據光吸收定律，溶液的吸光度應與溶液的濃度成正比。但由於有色物質的電離、水解、締合等原因當溶液稀釋或增濃時，有色物質顏色的深淺並不按比例降低或增高，因而也就不符合光吸收定律。測定方法適用的濃度范圍是指分析的濃度范圍在直線線性段，濃度與吸光度之比為一常數，此時直線上任何一點的斜率tanθ相等，即：
tanθ=A1/C1=A2/C2=A3/C3=……=An/Cn=K
此處K即為校正常數，可用於結果計算。
通常稀溶液都是符合比耳定律的，但在濃度過高和過低時往往都不呈直線，說明低濃度部分亦有儀器的靈敏度和方法的檢測能力限制，所以，具體的測定就宜選擇在直線段濃度范圍內進行。以此還可用於確定標本的用量，使具有臨床意義的標本測定結果都落在直線范圍內。
觀察影響顏色反應的因素
影響顏色反應的主要因素有：溶液pH的影響、雜質的影響、反應的溫度和時間、以及顏色的穩定性等。這些都是光度法測定誤差的主要來源。都需要通過實驗來觀察並控制在一個適宜的范圍內。從而保證方法的准確性和精密性。
溶液pH的影響有些溶液的顏色對pH值的改變非常靈敏。例如白蛋白在pH4左右可與溴甲酚綠結合後由黃色變成綠色，綠色的深淺與白蛋白濃度成正比，但是溴甲酚綠本身是一種pH指示劑，當pH5.4時即由黃色轉變成綠色，在pH3.8時又由綠色變為黃色。在白蛋白與溴甲酚綠結合顏色反應中，如pH控制不好就很容易出現誤差，又如每種酶都有各自的最適pH，酶促反應中，只有在其最適pH時才能發揮充分的催化活性。因此，在建立方法時可在不同pH值條件下（其它條件不變）令其反應，以觀察顏色反應的吸光度變化，從而選擇合適的pH值范圍來保證顏色反應，以求較高的靈敏度和較好的線性。有時還需用相應的pH緩沖液來維持反應的pH，以利顏色反應的正常進行。
雜質的影響由於臨床生化標本中除含待測物質外，還含有許多非測定物質，成分十分復雜，它們有的可與有色產物作用，使產生的顏色逐漸退去，有的與待測物質相類似，也能緩慢地與顯色試劑生成有色化合物或沉澱，有的本身是有色的等，都會影響被測物溶液的顏色。試驗方法是將各種可疑物質的純溶液作標本單獨進行測定，如產生顏色反應，這說明該方法的特異性不高。如果將待測物質混入可疑物質作標本測定，改變了被測物質與試劑間的反應，這是干擾。為此就需要進一步改進方法，或設立標本空白，或將標本作適當處理，除去干擾物，或加入合適的干擾物掩蔽劑等，以提高方法的特異性。
反應的溫度和時間有些有色物質能迅速反應生成，另一些有色物質須經過相當長時間後反應才能完全。提高反應的溫度可以加速化學反應，縮短反應的時間。因此，如果在不恰當的溫度和時間內進行比色，將會造成相當大的誤差。這可以在不同的溫度下（如設定25℃，30℃，37℃）令其反應，通過檢測吸光度來觀察各自反應終點時間（一般達到反應終點，隨後測定的吸光度不再變化），以選定適宜臨床應用的反應最佳溫度和時間。
穩定性試驗待測物質經顯色反應產生的有色物穩定與否，關繫到測定結果的可靠性。某些有色物質雖然生成很快，但卻不太穩定，放置後色澤會逐步消退或起變化，有些干擾物雖不能與被測物質同時發生顏色反應，但當放置一段時間後也能緩慢地與試劑顯色，使溶液顏色加深。因此，在方法建立的同時作穩定性試驗很有必要。試驗的方法是用被測標本、標准溶液、空白溶液按方法要求進行顯色反應後，即刻及室溫放置不同時間，分別測定其吸光度，根據其吸光度的變化確定方法穩定的時間范圍。一般要求有色溶液能穩定二小時以上就能滿足臨床應用的需要。必要時還要加以註明。

2. 文獻研究方法有哪幾種

文獻研究方法有三種，分別是內容分析法、文獻計量法、文獻研究法。其中內容分析法指的是一種系統、客觀、能對明確的傳播內容進行定量描述的研究方法。文獻計量法指的是藉助文獻各種特徵的數量，採用數學與統計學方法來描述、評價和預測科學技術的現狀與發展趨勢的定量分析方法。文獻研究法指的是搜集、整理、鑒別文獻，並通過對文獻的研究形成對事實的科學認識的方法。

文獻研究法主要優點：

1、文獻法超越了時間、空間限制，通過對古今中外文獻進行調查可以研究極其廣泛的社會情況。這一優點是其他調查方法不可能具有的。

2、文獻法主要是書面調查，如果搜集的文獻是真實的，那麼它就能夠獲得比口頭調查更准確、更可靠的信息。避免了口頭調查可能出現的種種記錄誤差。

3、文獻法是一種間接的、非介入性調查。它只對各種文獻進行調查和研究，而不與被調查者接觸，不介入被調查者的任何反應。這就避免了直接調查中經常發生的調查者與被調查者互動過程中可能產生的種種反應性誤差。

4、文獻法是一種非常方便、自由、安全的調查方法。文獻調查受外界制約較少，只要找到了必要文獻就可以隨時隨地進行研究；即使出現了錯誤，還可通過再次研究進行彌補。

5、文獻法省時、省錢、效率高。文獻調查是在前人和他人勞動成果基礎上進行的調查，是獲取知識的捷徑。它不需要大量研究人員，不需要特殊設備，可以用比較少的人力、經費和時間，獲得比其他調查方法更多的信息。因而，它是一種高效率的調查方法。