激酶研究方法

『壹』 1.激酶在生物體內主要催化哪些生化反應

生物體內的各種化學反應大都是在酶催化下進行的，故稱其為酶促反應。酶是由活細胞生成的生物催化劑，其本質主要是蛋白質，通常按酶的組成將其分為單純酶和結合酶；根據蛋白酶分子的特點分為單體酶，寡聚酶和多酶復合體；國際酶學委員會(E C)根據酶促反應類型將酶分為六大類；氧化還原玻、轉移酶、水解酶、裂解酶、異構酶和成酶。
在對酶的研究中，我們發現有為數不少的酶在其名稱後面均有 激酶"二字，如腸激酶、尿激酶、鏈激酶等等。按一述有酶的分類法，激酶是屬於哪一類酶呢 除了蛋白激酶，己糖激酶等在生物化學教科書中已明確說明是屬於轉移酶類外，其它激酶尚無明確分類。在酶的系統命名法的原則中，強調標明酶的底物及催化反應的性質，因此，必須將激酶按其催化反應的性質，將激酶進行分類，才能對激酶的系統命名法，因為在系統命名法中，對每種酶都用四個阿拉伯數字編寫，其中一個數字是該酶按酶促反應類型所分的類型，如氧化還原酶類的編號，第一個數字為1，轉移酶類的編號第一個數字為2，依次類推。
我們將激酶按其對底物作用不同，分為3種，即激活酶原的激酶、改變酶的活性的激酶，直接參與酶促反應的激酶，對3種作用機制分別進行了探討，同時根據激酶的作用機制不同，確定其反應類型，從而將常見的激酶分別歸入國際酶學委員會(E C根據酶反應所分的酶的六大類型之中。
1激活酶原的激酶
酶原是指沒有催化活性的酶的前體，酶原激活的本質是促進酶的活性中心形成或暴露的過程，因此，激酶對酶原的激活就是促進酶的活性中心的形或暴露。有些激酶在對酶原的激活時，通過水解作用，切除酶原的部分肽鏈，使剩下的肽鏈重新折疊，形成活性中心。如腸激酶在對胰蛋白酶原的激活對....:

『貳』 PTK激酶的相關研究

受體型酪氨酸蛋白激酶所介導的信號傳遞途徑中涉及到一種重要的蛋白激酶即絲裂原激活的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）。MAPK屬於一種Ser/Thr蛋白激酶，可在多種不同的信號轉導途徑中充當一種共同的信號轉導成份，且在細胞周期調控中發揮重要的作用。目前MAPK家族中至少有4個成員已被純化和深入研究。如p42mapk,p44erk1,p54MAPK及p44mpk。這些MAPK最初由於不同的研究目的而被發現，因而它們各自還有著其它一些名稱。如p42mapk也稱為微管相關蛋白激酶（microtubule-associated protein-2 kinase,MAP-2k）及細胞外信號調節的激酶2（extracellular signal-regulated kinase2,ERK2）等。
屬於src家族的蛋白酪氨酸激酶是一組膜結合蛋白，包括p60arc、p56lck、p59fyn、p59yes、(p62ues)、p56lyn、p59hck、p55fgr和p55blk等成員。但由於src家族PTKs缺乏胞外及跨膜序列，因此這些src家族PTKs通過其N末端與細胞膜表面蛋白的胞漿內結構域相連接，從而發揮信號轉導作用（表8-2）。已證實p56lck參加CD4和CD8介導的信號傳遞；p59fyn參加TCR/CD3復合體介導的信號傳遞；p56lyn參加B細胞受體（BCR）介導的信號傳遞。
經TCR途徑T細胞活化後最早生化事件是幾種內源性底物酪氨酸磷酸化水平的升高。這種酪氨酸磷酸化可能由p56kk或一個與PTK相關的稱為p59fyn所介導。p59fyn主要表達於T淋巴中，發揮某些獨特的調節功能。然而，還有一些調節功能更為廣泛的PTKs表達於包括T細胞在內的多種細胞類型中，包括：
（1）最初從小鼠脾細胞中發現的tk1蛋白產物；
（2）在T細胞有絲分裂中數量可見增加並同T細胞瘤的發生有關的p34pim；
（3）表達於T細胞中c-abl、ltk、c-kit和其它原癌基因蛋白產物。這些PTKs的確切功能還不清楚。
2.Tyrosine kinases are a subclass of protein kinase, see there for the principles of protein phosphorylation
3.A tyrosine kinase is an enzyme that can transfer a phosphate group from ATP to a tyrosine resie in a protein. Tyrosine kinases are a subgroup of the larger class of protein kinases. Phosphorylation of proteins by kinases is an important mechanism in signal transction for regulation of enzyme activity.
4.There are over 100 3D structures of tyrosine kinases available at the Protein Data Bank. An example is PDB 1IRK, the crystal structure of the tyrosine kinase domain of the human insulin receptor.
5.Most tyrosine kinases have an associated protein tyrosine phosphatase.

『叄』 簡述LANCE Europium assays檢測蛋白激酶活性的原理和方法

比較專業，向老師和同學請教吧。
蛋白酶是水解蛋白質肽鏈的一類酶的總稱。按其降解多肽的方式分成內肽酶和端肽酶兩類。前者可把大分子量的多肽鏈從中間切斷，形成分子量較小的朊和腖；後者又可分為羧肽酶和氨肽酶，它們分別從多肽的游離羧基末端或游離氨基末端逐一將肽鏈水解生成氨基酸。

『肆』 細胞質胸苷激酶的研究歷史

1950s 胸苷激酶1被發現；
1980s 胸苷激酶1在世界范圍內掀起研究熱潮，美國、歐洲、日本均開始胸苷激酶1的相關研究；
1986 極富盛名的諾貝爾獎評審委員會所在的瑞典Karolinska醫學院在Bernhard Tribukait教授（瑞典Karolinska大學終身教授，流式細胞技術發明者）的倡導下，成立了胸苷激酶1研究組，開始TK1的基礎及應用研究；
1990s 胸苷激酶1活性檢測方法及試劑盒問世，但是終由於操作方法的繁瑣和對實體腫瘤靈敏度偏低等問題，在掀起一段熱潮後終歸沉寂；
1996 血清胸苷激酶1濃度免疫化學發光檢測方法問世，解決了之前的實體瘤靈敏度偏低問題，同時免疫化學發光法更易操作，無放射污染；
2006- 血清胸苷激酶1檢測再次掀起了醫學臨床研究熱潮。

『伍』 納豆激酶的研究歷史

納豆激酶的發現來自著名的兩點半實驗
1980年的一天，從事溶解血栓葯物研究工作的日本心腦血管專家須見洋行博士，他突然想起納豆不是纖維蛋白發酵的嗎？而血栓最頑固的部分就是纖維蛋白，於是，下午兩點半時，須見洋行博士把納豆中提取的物質加入到人工血栓中。
原本准備第二天看結果的，但5點半的時候，一次偶然的察看，奇跡發生了，血栓居然溶解了2厘米，而平常用尿激酶做溶血栓的實驗溶解2厘米需要近兩天的時間，也就是說納豆發酵物溶解血栓的速度是尿激酶的19倍之多。於是，就將納豆的這種強力溶栓物命名為納豆激酶Nattokinase，簡稱NK，這就是震驚世界的溶血栓葯物研究史上有名的「下午兩點半」實驗。 株式會社日本生物科學研究所與韓國首爾延世大學研究院心腦血管疾病中心共同研究關於納豆激酶對高血壓的效果。該研究報告的結論是：「總之，納豆激酶會導致收縮壓和舒張壓下降。這個結果表明增迦納豆激酶的攝入，可能對於預防和治療高血壓起著重要的作用。」該研究報告被國際權威學刊SCI收錄(《Japanese society of hypertension》 VOL.31NO.8.August，2008ISSN0916_9636)。
株式會社日本生物科學研究所與印度孟買市TNMC&BYLNair醫院共同進行的急性腦中風患者應用納豆激酶+低分子肝素+抗凝葯物治療的綜合臨床研究。試驗結論表明：納豆激酶經口服攝取+低分子量肝素+抗血小板凝集葯對於急性缺血腦中風的治療效果顯著。該研究報告也被國際權威學刊SCI收錄(Jpn pharmacol ther vol.32 No 7 2004 TNMC&BYLNair 醫院腦神經外科)。
株式會社日本生物科學研究所和日本聖瑪麗安娜醫科大學疑難疾病治療研究中心共同進行關於納豆激酶抑制血小板凝固和預防血栓形成的研究。該項研究的結論是：證實了納豆激酶不但能溶解血栓，還能抑制血小板凝固，起到防範血栓形成的作用。這項試驗結果於2003年3月在日本葯學會發表。
此外，株式會社日本生物科學研究所還進行過納豆激酶攝取後血液形態學的研究，手指血液流動變化試驗對視網膜靜脈塞栓試驗、以及納豆中維生素K2對華法令拮抗作用的研究。 據小笠原博士介紹，從醫學的角度解析，納豆激酶溶栓機理是：納豆激酶通過刺激血管內皮細胞產生組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)，t-PA將纖溶酶原激活為纖溶酶，溶解纖維蛋白，直接溶解血栓；同時將人體內的尿激酶原激活為尿激酶，尿激酶與t-PA一同激活纖溶酶原，達到溶解血栓。
由此可見，納豆激酶在直接溶解已經形成血栓的同時，還能激活增強人體自身的溶栓能力，從而起到持久平穩的溶栓作用。而且，小笠原博士又說：「納豆激酶只溶解血栓的主體物質纖維蛋白，不水解血漿纖維蛋白原，所以不會引發出血的危險。」這一點是臨床溶栓葯劑所普遍缺失的。此外，進一步的臨床研究發現，納豆激酶還具有明顯的降血壓和抑制血小板凝集作用。 納豆激酶(NattoKinase，NK)由食品納豆中提取或納豆菌發酵生產，是一種分子量遠遠小於 UK、SK、tPA的蛋白質，並可由腸道，吸收，納豆激酶的體外、體內溶栓性質通過實驗也已得到確定，同時得出納豆激酶的體內溶栓活性為纖溶酶的四倍，在體內作用迅速、持續時間長，還能激活體內的tPA，使之溫和、持續地提高血液的纖溶活性。患心肌梗塞的危險患者，一次需投入尿激酶30萬單位，而50克的 納豆中含有80萬單位尿激酶的血栓溶解作用。(須見洋行等報道每克濕重納豆約相當於1600尿激酶單位。)
日本聖瑪麗安娜醫科大學疑難病治療研究中心和日本生物科學研究所最發現，納豆激酶有抑制血小板凝固的作用，有助於預防高血壓和動脈硬化。
據《日經產業新聞》報道，研究人員讓接受實驗者食用納豆激酶的培養提取物，然後化驗他們的血液。他們發現，食用這種提取物6小時後，實驗對象血小板的凝固作用受到抑制。研究人員據此斷定，納豆激酶具有溶化血栓、使血流順暢的功能。
因而，納豆激酶成為一種新型的口服性溶血栓葯物(第二代溶栓葯)，在預防、治療心腦血管栓塞症及栓塞性老年痴呆症等方面起到積極作用。 國際通用的標准含量標識FU
2010年12月20日，日本納豆激酶協會與納豆激酶專利所有者——日本生物科學研究所邀請中國國家醫學教育發展中心在北京梅地亞中心召開新聞發布會，並發表聲明：日本生物科學研究所是日本及全球最大的納豆激酶原料生產企業，唯一擁有日本專利廳授予的納豆激酶生產專利（專利號第3881494）。該研究所研製的納豆激酶是通過納豆菌培養液發酵產生納豆激酶，經特殊的技術和工藝提取和提純。以這種物質為主要原料製作而成的高純度納豆激酶產品具有溶解血栓作用，是現代生物領域的一項高科技產品，其安全性和有效性已經過醫學臨床驗證，也得到日本納豆激酶協會的充分認可。此外，日本官方健康營養食品協會制定的納豆激酶產品的標准單位為「FU」，而非「IU」。
FU與FU/g的區別
納豆激酶在國際上的標准單位為「FU」，是指每粒納豆激酶產品的納豆激酶含量；「FU/g」是指每克納豆原料中的納豆激酶含量，兩者存在區別。

『陸』 請問測定AMP激活的蛋白激酶（AMPK）活性都有什麼方法急！

可以通過分光光度計，或pH來測定!

磷酸腺苷
AMP—Adenosine monophosphate，翻譯為腺嘌呤核糖核苷酸，也稱為腺苷一磷酸或一磷酸腺苷。由一分子腺嘌呤、一分子核糖組成的腺苷，以及一分子磷酸組成。是在機體內由ATP與ADP釋放能量之後形成的。可以繼續結合磷酸基團形成二磷酸腺苷(ADP)和三磷酸腺苷(ATP)
[編輯本段]氨苄西林
AMP—氨苄西林(Ampicillin的縮寫),是一種抗生素.為廣譜半合成青黴素，毒性極低。抗菌譜與青黴素相似，對青黴素敏感的細菌效力較低，對草綠色鏈球菌的抗菌作用與青黴素相仿或略強。對白喉桿菌、破傷風桿菌和放線菌其效能基本和青黴素相同。對腸球菌及李司忒菌的作用則優於苄青黴素。對耐葯葡萄球菌及其它能產生青黴素酶的細菌均無抗菌作用。對革蘭陰性菌有效，但易產生耐葯性。
主要用於敏感菌所致的泌尿系統、呼吸系統、膽道、腸道感染以及腦膜炎、心內膜炎等。
[編輯本段]其他
HTML代碼中＆符號的縮寫便是AMP
APM=Actions Per Minute 就是每分鍾操作的次數。它統計的操作包括了滑鼠每次的左擊，右擊以及每次的鍵盤敲擊。多見於星際爭霸和魔獸爭霸3（WAR3）這兩款游戲中 APM的高低往往象徵著玩家操作的精細程度，一定程度上反映了玩家的水平
AMP Amplifier 放大器
amplifier ['æmplifaiə] n. 放大器,擴音機
AMP-EN Amplifier Enable 放大器啟動端
AMP-N Amplifier Negative 音頻放大器信號負
AMP-P Amplifier Positive 音頻放大器信號正
AMPC Amplifier Control 放大器控制

『柒』 如何探究細胞中某個蛋白激酶的活性

MPF即卵細胞促進成熟因子（maturation-promotingfactor），或細胞分裂促進因子。在成熟的卵母細胞、分裂期粘菌、酵母等中可提取到這種促細胞分裂因子。由兩個亞基組成，一種是細胞周期蛋白，一個是依賴周期蛋白起作用的蛋白激酶，其中周期蛋白為調節亞基。能夠促使染色體凝集，使細胞由G2期進入M期的因子。在結構上，它是一種復合物，由周期蛋白依賴性蛋白激酶（Cdk）和G2期周期蛋白組成，其中，周期蛋白對蛋白激酶起激活作用，周期蛋白依賴性蛋白激酶是催化亞基,它能夠將磷酸基團從ATP轉移到特定底物的絲氨酸和蘇氨酸殘基上。酵母細胞周期中只有一種Cdk,而哺乳動物的細胞周期中有多種Cdk,所以哺乳動物的MPF是由Cdk1和周期蛋白B組成的復合物。有絲分裂期細胞與間期細胞融合後，會使間期細胞產生形態各異的染色體凝集，稱作早熟染色體凝集。這一現象表明，分裂期細胞中可能存在某種誘導染色體發生凝集的因子。在成熟卵母細胞分裂期黏菌酵母等中提取到了這種促細胞分裂因子，稱為成熟促進因子（Maturation-promotingfactor）。MPF是由催化亞單位和調節亞單位組成。催化亞單位是由cdc2基因編碼的一類蛋白質，只有與調節亞單位結合後，才具蛋白激酶活性，促使細胞進入分裂期。調節亞單位是一類隨細胞周期變化而周期性出現或消失的蛋白質，稱為細胞周期蛋白，它具有細胞周期特異性及細胞類型特異性。MPF(M期促進因子或細胞促分裂因子或卵細胞促成熟因子)是一種使多種底物蛋白磷酸化的蛋白激酶，即CDK1激酶，由p34cdc2蛋白和周期蛋白B結合而成。CDK1激酶活性首先依賴於周期蛋白B含量的積累，隨周期蛋白B濃度變化而變化：周期蛋白B一般在G1期的晚期開始合成，通過S期，其含量不斷增加，隨著周期蛋白B含量達到一定程度，CDK1激酶活性開始出現；到達G2期時周期蛋白B含量達到最大值，G2晚期階段CDK1激酶活性達到最大值並一直維持到M期的中期階段。CDK1激酶活性還受到激酶與磷酸酶的調節，活化的CDK1激酶可使的CDK1激酶活化。活化的CDK1激酶促使分裂期細胞在分裂前期執行下列生化事件：染色質開始濃縮形成有絲分裂染色體；細胞骨架解聚，有絲分裂紡錘體開始組裝；高爾基復合體、內質網等細胞器解體，形成小的膜泡。

『捌』 PKA（蛋白激酶A）的活性如何測定

目的研究蛋白激酶C(protein KinaseC,PKC)和蛋白激酶A(protein kinaseA,PKA)在甲狀腺癌發生過程中的作用.方法利用酶的放射分析方法測定手術切除經病理證實的18例甲狀腺癌患者和17例甲狀腺癌患者手術切除的腫瘤組織中PKC和PKA活性水平.結果甲狀腺癌組織中胞膜和胞漿PKC活性分別為7.280±2.380和7.397±4.065,PKA活性水平為1.716±0.923.甲狀腺癌組織中胞膜和胞漿PKC活性分別為0.515±0.676和0.347±0.332,PKA活性水平為0.646±0.324.胞漿部分PKC與PKA活性比值:甲狀腺癌組織為4.3;甲狀腺癌組織為0.53.結論PKC與PKA均參入甲狀腺癌細胞的增殖過程.

『玖』 請舉一例簡述蛋白質激酶催化反應的生物學意義

蛋白激酶（protein kinases）又稱蛋白質磷酸化酶(protein phosphakinase)。一類催化蛋白質磷酸化反應的酶。磷酸化(由激酶催化)和去磷酸化(由磷酸酶催化)是控制細胞周期的關鍵。它們都被用來控制調控途徑自身活性和執行調控途徑決定的底物活性。細胞周期調控途徑由一系列激酶和磷酸酶組成，它們通過將途徑的下一個底物磷酸化和去磷酸化而對外來信號和檢驗點做出反應。途徑最終顯示的是通過控制M 期激酶(或S 期激酶)的磷酸化狀態決定其活性。

M 期激酶的激活引發M 期的開始，它的失活是離開M 期必須的。這表明M 期激酶調控的活動是可轉換的：細胞重新組織形成有絲分裂紡錘體要求底物磷酸化，返回到細胞間期狀態要求同一底物去磷酸化。

M 期激酶作用的靶位是什麼？細胞主要的重新組織發生在有絲分裂中，MPF 誘導有絲分裂的能力說明，M 期激酶直接或間接地引發這些活動。我們在後面討論結構的重新組織，現在要探討M 期激酶對多種蛋白質底物的作用是直接的還是間接的。對其作用有兩種假設的模型:

它可能是磷酸化靶蛋白質的「主調控因子」，靶蛋白輪流作用調控其它必須的功能，一個典型的級聯反應。

它可能是一個「工作室」，直接磷酸化執行調控功能或是周期中細胞重新組織所必須的決定性底物。

被M 期激酶磷酸化的底物唯一共有的性質是都存在一對Ser-Pro 序列，位於鹼性殘基的側面(最常見的是Ser-Pro-X-Lys 形式)。潛在的底物依賴於體內M 期激酶准備磷酸化底物的能力，這些底物包括H1 組蛋白(可能是染色體凝集的需要)、核纖層蛋白質(可能是核膜溶解的需要)、核仁素(Nucleolin，阻斷核糖體合成)和其它結構性酶活性。這些證據的力度不同，取決於在體內某種循環方式中哪個底物被磷酸化，以及M 期激酶是否是實際激活酶。然而，從多種底物中，M 期激酶似乎直接作用於那些有絲分裂中細胞結構改變涉及的多種蛋白質。

確定一個潛在底物在細胞周期中是Cdc2 的有效靶點的標準是什麼呢？在體內相同的位點應被Cdc2 磷酸化，當Cdc2 被激活時，它就被磷酸化。體內Cdc2 被周期性磷酸化。理想情況下，體內Cdc2 激酶活性的突變可能阻止磷酸化，但目前僅在酵母中是這樣。要做出這樣的結論，磷酸化在細胞周期中是一個明顯的活動，蛋白質的一些功能必須被磷酸基團的存在改變。這可以通過標記的磷酸化氨基酸的突變鑒定沒有磷酸化是否阻止有絲分裂的功能。

Cdc2 激酶研究較多的底物是H1 組蛋白(組成染色質主要蛋白質的五種組蛋白質之一，見第19 章)。早就知道H1 在細胞周期中被磷酸化，在S 期加上兩個磷酸基團，有絲分裂時再加上4 個磷酸基團。細胞主要的H1 激酶活性由M 期激酶提供。

細胞周期中磷酸化H1 的目的是一個值得思索的問題，因為沒有直接表明它對染色質結構有影響。可能與M 期染色體凝集相關，可能為復制(可能需要解旋)或復制後的結果(為有絲分裂的開始做准備)做准備，這些假設是合理的，但在S 期這些修飾發生的時間尚缺乏了解。然而，H1 組蛋白的確是Cdc2 發動的激酶的很好底物，因此H1 激酶活性已成為檢測體內激酶活性的常用方法。例如，這種檢測對釀酒酵母很適用，通過檢測H1 激酶活性評估M 期激酶的周期活性，盡管實際上這種酵母通常不含H1 組蛋白。

『拾』 納豆激酶的選擇方法

市場上納豆激酶的種類太多，價格和品質參差不齊，很多人不知道如何選購，如何選擇優質的納豆激酶產品，可以參考以下四點進行購買。
一、產品是否符合國家食品相關部門規定？
納豆激酶屬於膳食補充劑，根據國家食品葯品監督局規定，生產企業必須具有「生產許可證」，產品包裝必須明確註明生產商、生產地址、條形碼、QS生產許可、執行標准、主要成分表、營養成分等信息，缺少任何一項均屬於違規的假冒偽劣產品。
二、產品或生產商是否擁有納豆激酶行業的相關認證？
擁有國際國內納豆激酶行業機構、國家級研究機構、國家食品葯品行業等機構認證的納豆激酶產品，比沒有相關認證的納豆激酶產品更具有權威性、規范性、安全性、有效性。
三、納豆激酶的含量及標示是否符合國際標准？
含量是衡量納豆激酶產品品質的標准之一。國際上規定：納豆激酶的含量單位為FU/片，每日推薦服用量為2000-4000FU，且產品包裝上必須註明真實含量，即每粒含多少FU；如包裝上使用FU/g（納豆激酶原料的單位）屬於不符合行業規范的虛假行為，購買時需謹慎。
四、納豆激酶的劑型是否安全?
膠囊/軟膠囊：主要原料為明膠， 國內明膠行業魚龍混雜，央視多次曝光毒膠囊事件，工業明膠中含有大量重金屬元素，不利於人體健康。
片劑：採用植物提取物作為包衣，不含重金屬元素。