化學發光免疫分析方法與應用進展

Ⅰ 簡介免疫分析技術

免疫技術為20世紀90年代優先研究、開發和利用的農葯殘留分析技術，世界糧農組織(FAO)已向許多國家推薦此項技術。免疫分析法(immunoassay，IA)是將免疫反應與現代測試手段相結合而建立的超微量測定技術。免疫分析法是生物酶技術、熒光光譜技術、輻射技術、免疫分析技術應用於農葯殘留分析領域的一門新技術，是基於抗原和抗體之間的特異性識別和結合反應為基礎的一種微量分析方法。免疫是機體識別和排除進人體內的抗原性異物的保護性應答反應。較大分子的農葯可以直接作為抗原進入脊椎動物的體內產生免疫應答，從而得到可以和該農葯分子特異性結合的抗體；小分子量的農葯(相對分子質量<2500)一般不具備免疫原性，不能刺激動物產生免疫反應，但有與相應抗體在體外發生吸附反應的能力，即有反應原性，這類小分子物質在免疫學上稱為半抗原。農葯是半抗原，一般不具備抗原性，不能刺激動物產生免疫反應，需要首先將該小分子通過與一定碳鏈長度、大分子的載體蛋白質(通常使用牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、鑰孔血藍蛋白、卵清蛋白)以共價鍵偶聯制備成人工抗原，使動物產生免疫反應，產生識別該農葯並與之特異性結合的抗體。以共價鍵偶聯成人工抗原使動物產生免疫反應從而產生識別該農葯並與之相結合的抗體(多克隆抗體)，通過對半抗原或抗體進行標記(酶、熒光物質、放射性同位素等)，利用標記物的生物、物理、化學放大作用，對樣品中的特定的農葯殘留進行定性或定量檢測。通過對半抗原或抗體進行標記(放射性核素、酶、熒光素標記等)，利用標記物的生物或物理或化學放大作用來進行工作，它集測定的高靈敏性和抗體反應的強特異性於一體。它的開發過程需要投入較多資金和較長時間，但具有簡單、快速、靈敏度高、特異性強、價廉、樣品所需量少等優點。目前多用於單一農葯殘留檢測，不適合應用於多殘留檢測。1971年Ercegovich[塢。]最先討論了農葯DDT、馬拉硫磷及氨三唑(amino—triazole)的免疫測定。隨後，大量研究免疫分析法在農葯殘留中的應用。Kun等報道了利用免疫分析測定對硫磷殺蟲劑農葯殘留，最低檢測限達到26ng／mL，相對標准偏差小於10
9／6。Laura等[塢0]報道利用化學發光免疫分析(cL—IA)測定農葯殘留。Anne等報道用非同位素免疫分析法(cMIA)測定氯麥隆殺蟲劑，採用傅里葉變換紅外光譜(FTIR)作為檢測器，極大提高靈敏度。農葯殘留的免疫學技術檢測食品的范圍很廣，包括水果、蔬菜、飲料、啤酒、葡萄酒、乳、肉、動植物油、蜂蜜、豆類、穀物等。一些商品化的試劑盒也相繼開發出來。國家農業部環保所李治祥和黃土忠於1990年研製了農葯殘毒速測箱，其原理就是有機磷和氨基甲酸酯類農葯對動物和昆蟲的致毒作用是通過特異性抑制膽鹼酯酶(chE)來實現的。將chE與樣品提取液反應，若chE受到抑制，表明樣品提取液中含有OPS和氨基甲酸酯類農葯，這時基質不能水解，就不能變色；否則ChE不受到抑制，基質水解產生藍色。另外，國外還推出了多種酶標試劑盒應用於常規分析及田間檢測的快速篩選，作為儀器分析的輔助方法發揮了一定的作用。免疫分析法作為農葯殘留快速篩選檢測方法受到重視。 更多相關資訊/技術資料，請參考國家標准物質網www.rmhot.com.

Ⅱ 化學發光分析的應用

化學發光分析的靈敏度高，是痕量分析的重要手段之一，在環境監測、臨床分析、生物化學等領域里，例如污染物測定、酶分析、免疫測定法和痕量金屬分析等方面得到廣泛的應用。例如，致癌物亞硝胺經熱解後產生亞硝醯自由基NO·，後者與臭氧反應，產生激發態二氧化氮NO壗，最後成為二氧化氮而發光,可用於亞硝胺的檢測,靈敏度達亞ppb級。魯米諾在某些氧化劑存在下的發光反應，可用於測定這些氧化劑；苯巴比妥與過氧化氫的反應為某些過渡金屬及其他一些物質所催化，可用來測定這些起催化作用的物質。又如，用化學發光分析可測定配慶腺嘌呤核苷圓賣嫌三磷酸酯(ATP),檢出限為10～10摩爾；許多酶催化的過程以 ATP作為反橘手應物或產物，借測量ATP可測定酶的活性。

Ⅲ 化學發光免疫分析法有哪三類

1、直接化學發光，標記物為吖啶酯（雅培）或者ABEI（新產業）

2、酶促化學發光，標記物為鹼性磷酸酶（廈門波生）或者辣根過氧化物酶（強生）

3、電化學發光，標記物為三聯吡啶釕（羅氏）

註：括弧內為代表廠家。

Ⅳ 化學發光免疫分析的書籍

本書主要分兩大部分，第一部分1-9章介紹化學發光免疫分析的新方法和基礎理論研究；第二部分10～18章側重於化學發光免疫分析的應用，主要針對臨床檢測、環境分析以及食品安全三大應用領域。第19章簡要介紹並宏分析過程的質量管理與控制。附錄收集了常用的化學發光免疫試劑盒和相關用語的中英文對照。書中每個章節既有獨立性又有相互參考性，盡最大可能地收集與每一章節有關的參考文獻。
本書可供從事臨床分析、食品檢測、環境監測等科研人員和分析工作者參考，也可作為大專院校和科研院所相關專業師生的教學參考書。 第1章基本原理
1.1引言
1.2化學發光
1.2.1化學發光反應的基本原理
1.2.2化學發光反應體系
1.2.3化學發光的應用和最新進展
1.3免疫技術
1.3.1免疫的基本原理
1.3.2抗原抗體反應
1.3.3免疫測定的基本原理及其在臨床檢驗中的應用
1.4化學發光免疫分戚蔽虛析技術
1.4.1化學發光免疫分析方法的建立
1.4.2化學發光免疫分析的主要類型
1.5化學發游標記技術
1.6化學發光免疫研究的新方法以及研究展望
參考文獻
第2章電化學發光免疫分析
第3章流動注射化學發光免疫分析
第4章高效液相色譜化學發光免疫分析
第5章毛細管電泳化學發光免疫分析
第6章微流控晶元化學發光免疫分析
第7章納米粒子及量子點標記化學發光免瘋分析
第8章化學發光免疫分析儀
第9章化學發光免疫分析技術發展趁勢
第10章化學發光免疫診斷試劑
第11章腫瘤標志物
第12章內分泌疾病
第13章激素與細胞因子
第14章血液和心血管疾病
第15章其他疾病
第16章治療葯物監測
第17章食品安全檢測
第18章環境內分泌干擾物
第19章化學發光免疫分析的質量管理與控制
附錄I常用化學發光免疫分析方法
附錄II相關用語中高燃英文對照
……

Ⅳ 公衛醫師實踐技能考試輔導：化學發光免疫分析的類型

-
化學發光反應參與的免疫測定分為以下幾種類型：
（一）化學發光酶免疫測定

化學發光酶免疫測定（CLEIA）是採用化學發光劑作為酶反應底物的酶標記免疫測定。經過酶和發光兩級放大，具有很高的靈敏度。以過氧化物酶為標記酶、以魯米諾為發光底物、並加入發光褲兄增強劑以提高敏感度和發光穩定性。應用的標記酶也可以為鹼性磷酸酶，發光底物為dioxetane磷酸酯，固相載體為磁性微粒。

（二）化學發光免疫測定

化學發光免疫測定（CLIA），是用化學發光劑直接標記抗原或抗體的一類免疫測定方法。吖啶酯是較為理想的發光底物，在鹼性環境中即可被過氧化氫氧化而發光。

用作標記的化學發光劑應符合以下幾個條件：

1.能參與化學發光反應。

2.與抗原或抗體偶聯後能形成穩定的結合物試劑。

3.偶聯後仍保留高的量子效應和反應動力。

4.應不改變或極少改變被標記物的理化特性，特別是免疫活性。

魯米諾類和吖啶酯類發光劑等均是常用的標記發光劑。

（三）微粒子化學發光免疫分析

該免疫分析技術有兩種方法：一是小分子抗原物質的測定採用競爭法；二是大分子的抗原物質測定採用雙抗體夾心法。該儀器所用固相磁粉顆粒極微小，其直徑僅1.0μm，這樣大大增加了包被表面積，增加抗原或抗體的吸附量胡滾襲，使反應速度加快，也使清洗和分離更簡便。其反應基本過程：（1）競爭反應：用過量包被磁顆粒的抗體，與待測的抗原和定量的標記吖啶酯抗原同時加入反應杯溫育，其免疫反應的結合形式有兩種，一是標記抗原與抗體結合成復合物；二是測定抗原與抗體的結合形式。（2）雙抗體夾心法：標記抗體與被測抗原同時與包被抗體結合成一種反應備爛形式，即包被抗體-測定抗原-發光抗體的復合物。

Ⅵ clia是什麼意思

clia是化學發光免疫分析。

化學發光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA),是將具有高靈敏度的化學發光測定技術與高特異性的免疫反應相結合，用於各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和葯物等的檢測分析技術。是繼放免分析、酶免分析、熒光免疫分析和時間分辨熒光免疫分析之後發展起滾飢來的一項最新免疫測定技術。

Ⅶ 免疫分析方法有哪些

（1）放射免疫分析法（radioimmunoassay，RIA）。RIA技術是使用以放射性同位素（如125I、32P、3H等）作標記的抗原或抗體，用γ－射線探測儀或液體閃爍計數器測定γ－射線或β－射線的放射性強度，來測定抗體或抗原量的技術。它包括以標記抗原為特點的放射免疫分析和以標記抗體為特點的免疫放射分析（immunoradiometricassay，IRMA）。前者以液相競爭結合法居多，既測大分子抗原又測小分子抗原；後者以固相法測大分子抗原為主。

RIA在早期建立的農葯免疫分析方法中佔了很大比重，建立了狄氏劑、艾氏劑、2，4－D和2，4，5－T、對硫磷和百草枯等農葯的放射免疫分析法。盡管該方法靈敏度非常敏銳（RIA通常為10-9g、10-12g，甚至10-15g），應用范圍廣，但進行RIA需使用昂貴的計數器，也存在放射線輻射和污染等問題，因此在農葯殘留檢測領域的應用和發展受到了一定的限制，並逐步為其他免疫分析方法所取代。

（2）酶免疫分析法（enzymeimmunoassay，EIA）。EIA是繼RIA之後發展起來的一項免疫分析技術。其檢測原理與放射免疫法類似，但所用的標記物為酶，它將抗原、抗體的特異性免疫反應和酶的高效催化作用有機結合起來，通過測定結合於固相的酶的活力來測定被測定物的量。用做標記物的酶有辣根過氧化物酶（horseradishperoxidase，HRP）和鹼性磷酸酶（alkalinephosphatase，AKP）、葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase，GO）、脲酶（urease）等。酶標記反應的固相支持物有聚苯乙烯塑料管、膜等。目前大多數採用96孔酶標板（MTP）作為固相支持物。這種板的檢測容量大，樣本數量多，只需有台簡單的酶標儀就可得出准確的檢測數據。也有學者採用磁珠作為固相材料進行EIA研究，其原理是將高分子材料（聚苯乙烯、聚氯乙烯等）包裹到金屬小顆粒（Fe2O3，Fe3O4）外面，再通過化學方法鍵合上氨基（－NH2）、羧基（－COOH）、羥基（－OH）等活性基團，再與抗體或抗原耦聯，製成免疫性微珠。該方法的優點是微珠比表面積大，吸附能力強，能懸浮在液相中快速均勻的捕獲樣品中的待測物，通過外加磁場後能夠實現微珠與樣品液的快速分離，從而減少檢測時間、提高檢測靈敏度。

由於酶標試劑制備容易、穩定、價廉，酶免疫分析的靈敏度接近放射免疫技術，故近年來EIA技術發展很快，已開發了多種EIA方法。其中酶聯免疫法（，ELISA）是目前農葯殘留檢測中應用最廣泛的酶免疫分析技術。

（3）熒光免疫分析法（fluorescenceimmunoassay，FIA）。FIA檢測的基本原理是將抗原抗體的高度特異性與熒光的敏感可測性有機地結合，以熒光物質作為示蹤劑標記抗體、抗原或半抗原分子，制備高質量的特異性熒光試劑。當抗原抗體結合物中的熒光物質受到紫外光或藍光照射時，能夠吸收光能進入激發態。當其從激發態回復基態時，能以電磁輻射形式放射出所吸收的光能，產生熒光。繪制農葯濃度－熒光強度曲線，可以定性、定量檢測樣品中的農葯殘留量。

適用於抗體、抗原或半抗原分子標記的熒光素須符合要求：①應具有能與蛋白質分子形成穩定共價鍵的化學基團，或易轉變成這類反應形式而不破壞其熒光結構；②標記後，熒光素與抗體或抗原各自的化學結構和性質均不發生改變；③熒光效率高，與蛋白質結合的需要量很少；④熒光素與蛋白質結合的過程簡單、快速，游離的熒光素及其降解產物容易除去；⑤結合物在一般儲存條件下性能穩定，可保存使用較長時間。

（4）化學發光免疫分析法（luminescentimmunoassay，LCIA）。LCIA又可分為化學發光免疫測定（chemiluminescentimmunoassay，CLCIA）和生物發光免疫測定（bio-luminescentImmunoassay，BLCIA）。

1976年，Shroeder首先用生物素（B）－親和素（A）系統建立了均相化學發光免疫測定技術，爾後Halman和Velan又將其引伸到非均相體系，現已滲入到生物學研究的各個領域。其原理是以發光指示抗原與抗體的結合，當發游標記物與相應的抗體或抗原結合後，底物與酶作用，或與發光劑產生氧化還原反應，或使熒光物質（例如紅熒烯等）激發，釋放光能。最後用光度計測定其發光強度，進行定量分析。常用發游標記物有辣根過氧化物酶（HRP）、魯米諾（luminol）、異魯米諾（isoluminol）、咯粉鹼（lophine）、光澤精（lucigen）、雙（2、4、6－三氯苯）草酸酯、聯苯三酚和6[N-（4－二氨基丁基）－N－乙基]－氨基-2，3－二氫吩嗪-1，4－二酮（ABEI）等。用上述發游標記物標記的抗體（或抗原）在一定的pH緩沖溶液中與相應的抗原（或抗體）結合時，在協同因子（例如H2O2等）的作用下發光，其發光強度與被測物的濃度成正比，故可以用於定量分析。

發光免疫測定具有特異性強、靈敏度高（檢測限量達10-15mol/L）、快速（1～3h）、發光材料易得等優點。但其發光過程和強度常受到發光物質本身的化學結構、介質的pH、協同發光物質和金屬離子雜質等影響。

（5）金免疫層析分析法（goldimmuno-chromatographyassay，GICA）。GICA檢測原理是將配體（抗體或抗原）以線狀包被固化於硝酸纖維素膜等微孔薄膜上，膠體金標記另以配體或其他物質並以干態固定在吸水材料上，通過毛細作用，使樣品溶液在層析條上泳動，當泳動至膠體金標記物處時，如樣品中含有待檢受體，則發生第一步高度特異性的免疫反應，形成的免疫復合物繼續泳動至線狀包被區時，發生第二步高度特異性的免疫反應，形成的免疫復合物被截留在包被的線狀區，通過標記的膠體金而顯紅色條帶（檢測帶），而游離的標記物則越過檢測帶，與結合的標記物自動分離。通過檢測帶上顏色的有無或色澤深淺來實現定性或定量測定2。

2金標試紙條檢測

GICA法具有快速（5～20min）、廉價、結果明確、無需復雜操作技巧和特殊設備、攜帶方便等優點。但相對於其他免疫分析方法，該方法檢測靈敏度稍低，主要適合現場快速定性或半定量測定。目前該方法已被應用於醫學和生物學等眾多研究領域，尤其在發達國家已經得到了廣泛的應用。

（6）免疫分析與儀器分析技術的聯用技術。使用單一的IA技術進行農葯殘留分析獲得的信息量少，而理化分析方法的選擇性又比較差。Kramer等人將免疫分析法和液相色譜法（LC）聯合起來使用，從而簡化了分析方法，提高了檢測效率。LC-IA的聯用，將LC的高分離能力和IA的高靈敏性和高特異性融為一體。該分析法尤其適合多組分殘留分析和微量分析。免疫分析與氣相色譜/質譜（GC/MS）的聯用可減少結構相似的農葯或代謝產物分析中的交叉反應，以降低假陽性。

Ⅷ 為什麼要開展化學發光

一、 化學發光免疫分析簡介
化學發光免疫測定是目前世界公認先進的標記免疫測定技術，化學發光 免疫分析技術具有高度的准確性和特異性，成為檢念嘩驗方法中最為重要的技術之一。 化學發光 免疫分析技術作為疾病診斷的主要手段已被廣泛用於機體免疫功能、傳染性疾病、內分泌功能、腫瘤標志物、 性激素、甲狀腺功能 等方面的體外診斷實驗中。
化學發光是一種特異的化學反應，有機分子吸收化學能後發生能級躍遷，產生一種高能級的電子激發態不穩定的中間體，當其返回到基態而發出光子，即為化學發光。將化學發光與抗原抗體相結合而形成的免疫分析技術，即為化學發光免疫分析。
化學發光的發光類型通常分為閃光型（flash type）和輝光型（glow type）兩種。閃光型發光時間很短，只有零點幾秒到幾秒。輝光型又稱持續型，發光時間從幾分鍾到幾十分鍾，或幾小時至更久。閃光型的樣品必須立即測量，必須配以全自動化的加樣及測量儀。測量輝光型的樣品可以使用通用型儀器，也可以配全自動化儀器。 泰格科信的化學發光免疫分析診斷試劑 發光類型 為 輝光型 。
化學發光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是近十年來在世界范圍內發展非常迅速的非放射性免疫分析。它具有高靈敏度、檢測范圍寬、操作簡便快速、標記物穩爛蠢定性好、無污染、儀器簡單經濟等優點。它是放射性免疫分析與普通酶免疫分析的取代者，是免疫分析重要的發展方向。CLIA發展迅猛，已佔各種免疫分析的首位 ，是目前放射免疫分析和酶聯免疫分析最佳的取代者。

二、 化學發光免疫分析的 優勢 ：
1、 靈敏度高
靈敏度高 是 化學發光免疫分析 關鍵的優越性，其靈敏度可達 10 -16 mol/L （ RIA 為 10 -12 mol/L ）。 化學發光免疫分析能夠檢出放射免疫分析和酶聯免疫分析等方法無法檢出的物質，對疾病的早期診斷具有十分重要的意義。

2、 寬的線性動力學范圍
發光強度在 4 ～ 6 個量級之間與測定物質濃度間呈線性關系。這與顯色的酶免疫分析吸光度（ OD 值）為 2.0 的范圍相比，優勢明顯。雖然 RIA 也有較寬的線性動力學范圍，但放射性限制了其應用。
3、 光信號持續時間長
輝光型的 CLIA 產生的光信號持續時間可達數小時甚至一天。簡化了實驗操作及測量。
4、 分析方法簡便快速
絕大多數分析測定均為僅需加入一種試劑 （ 或復合試劑）的一步模式。
5、 結果穩定、誤差小
樣品系直接自己發光，不需要任何光源照射，免除了各種可能因素（光源穩定性、光散射、光波選擇器等）給分析帶來的影響，使分析結果靈敏穩定可靠。
6、 安全性好及使用期長
免除了使用放射性物質。到目前為止，還未發現其危害性；試劑穩定，保存期可達一年仔歷行。
三、市場前景

化學發光免疫分析法作為非放射性的免疫分析法，具有靈敏度 高、所需時間短、無污染、檢測范圍寬等特點，隨著各種自動發光分析儀器面市，以及不同類型的化學發光免疫分析試劑盒的不斷推出，使得檢測項目更多，檢測速度提高，這些勢必推動化學發光免疫分析的迅速發展， 成為時間分辨、放射免疫和酶聯免疫分析的取代者，將成為檢驗的主流。 使實驗室更好、更快地為臨床服務

Ⅸ 化學發光免疫分析為什麼測試標本少了

臨床檢驗過程中，經常需要檢測與分析一系做斗列表徵性物質，以此對疾病進行判斷[1]。現階段，化學發光免疫分析技術的應用范圍呈現逐漸擴展的趨勢，在臨床檢驗中的作用也越來越重要；握胡肆在化學發光免疫分析技術還未出現之前，免疫技術主要包括：免疫酶技術、放射免疫技術以及免疫熒光技術，由於這三項技術具有的優點與缺點較為明顯，所以在臨床檢驗上的應用存在局限性；而化學發光免疫技術具有測試時間短、標本量少、污染少、獲取結果迅速、操作簡單等一系列優點，所以在臨床檢驗中的應用范圍逐漸拓寬[2]。 1化學發光免疫技術的工作原段轎理 1.1檢測器的檢測原理 化學反應的檢測過程中，一些化學基團在處於被氧化狀態之後，會形成一個激發態，在回歸至基態的過程中，會發射出光子，實質上就是免疫反應與化學反應有機結合在一起之後形成的一種分析方法，即微量倍增技術。微量倍增技術在臨床檢驗中的應用，主要是通過粒徑比較小的顆粒磁粉增大復合物表面的面積

Ⅹ 化學發光免疫分析原理是什麼

化學發光免疫分析原理是什麼

化學發光免疫分析包含兩個部分，即免疫反應系統和化學發光分析系統。化學發光分析系統是利用化學發光物質經催化劑的催化和氧化劑的氧化，形成一個激發態的中間體，當這種激發態中間體回到穩定的基態時，同時發射出光子(hM)，利用發光訊號測量儀器測量光量子產額。免疫反應系統是將發光物質(在反應劑激發下生成激發態中間體)直接標記在抗原(化學發光免疫分析)或抗體(免疫化學發光分析)上，或酶作用於發光底物。
化學發光免疫分析根據其所採用的標記物的不同可分為發光物標記、酶標記和元素標記化學發光免疫分析三大類。發光物標記的CLIA是以發光物質代替放射性核素或酶作為標記物(如吖啶酯)，在反應體系中發光物質在鹼性介質中氧化祥枝時釋放大量自由能，產生激發態的中問體，該激發態的中間體由最低振動能級回到穩定的基態，各個振動能級產生輻射時，同時產生能量，多餘的能量即為發射光子，從而產生發光現象。利用發光訊號的測量儀器，分析接收的光量子產額，通過計算機系統轉換成被測物質的濃度單位。在此系統中包含兩個部分，化學發光反應系統和免疫反應系統，即在抗原一抗體特異性反應過程中，伴隨有化學反應過程而產生光的發射現象。化學反應系統中以化學反應為基礎，化學發光的首要條件是吸收了化學能而處於激發態的分子或原子必須能釋放出光子或者能將能量轉移到另一個物質的分子上並使這種分子激發，當這種分子回到基態時釋放出光子。
化學發光與熒光的根本區別是形成激發態分子的激發能原理不同。熒光是發光物質吸收了激發光後使分子產生發射光；化學發光是化學反應過程中所產生的化學能使分子激發產生的發射光。因此，化學拆早發光反應過程必須產生足夠的激發能是產生發光效應的重要條件。化旅宴雀學發光反應可在氣相、液相或固相反應體系中發生，以液相發光在免疫學檢測中最常應用。摘自 :sd1861./xianghealth399.htm引自 :sd1861./

化學發光免疫分析法的原理

化學發光免疫分析原理
:yhyg./articleview/2008-1-25/article_view_4863.htm
很詳細的...你可以參考下

化學發光免疫分析報告

您好！很正常。

化學發光免疫分析單怎樣看