tf的無菌化處理應選用什麼方法

① 在開展無菌實驗之前要對無菌室進行怎樣的無菌處理

綜述：無鏈桐彎菌室的無菌處理：先進行無菌室空間的消毒，開啟紫外燈30-60分鍾。檢驗用的有關器材， 搬入無菌室前必須分別進會滅菌消毒。

無菌試驗室主要用於微生物學、生物醫學、生物化學、動物實驗、基因重組以及生輪罩物製品等研究使用的實驗室統稱潔凈實驗室-生物安全實驗室。

特點：

憑借對用戶需求的深刻理解，精湛的咨詢顧問和工程設計施工方面的專家隊伍，先進的規劃運營理念和與國際著名品牌供應商的良好合作關系，形成了一套完善的潔凈實驗室-生物安全實驗室解決方案。它具有高安全性、專業化、整體性、模塊化、標准化等特點。

參考資料來源：網路棚悶網路－無菌試驗室

② 請問，實驗室做完微生物後的培養基可以高溫煮沸然後倒掉嗎，有菌和無菌的。

微生物的實驗室培養：

1．培養基的概念、種類及營養構成
(1)概念：人們按照微生物對營養物質的不同需求，配製出的供其生長繁殖的營養基質。

(3)營養構成：各種培養基一敗讓般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養物質以及氧氣的要求。
2．無菌技術
(1)關鍵：防止外來雜菌的入侵。
(2)具體操作
①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒。
②將用於微生物培養的器皿、接種用具和培養基等進行滅菌。
③為避免周圍環境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行。
④實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸。
(3)消毒和滅菌
消毒 滅菌
概念 使用較為溫和的物理或化差滑學方法殺死物體表面或內部的部分微生物（不包芽孢和孢子） 使用強烈的理化因素殺死物體內外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法 煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學葯劑消毒法、紫外線消毒法 灼燒滅菌、乾熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對象 操作空間、某些液體、雙手等 接種環、接種針、玻璃器皿、培養基等
3、制備牛肉膏蛋白腖固體培養基的方法：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。
4、接種方法：平板劃線法和稀釋塗布法。
（1）平板劃線操作：
①挑取他含菌樣品：選用平整、圓滑的接種環，按無菌操作法挑取少量菌種。
②劃A區：將平板倒置於煤氣（酒精）燈旁,左手拿出皿底並盡量使平板垂直於桌面，有培養基一面向著煤氣燈（這時皿蓋朝上，仍留在煤氣燈旁)，右手拿接種環先在A區劃3—4條連續虛枯臘的平行線(線條多少應依挑菌量的多少面定）。劃完A區後應立即燒掉環上的殘菌，以免因菌過多而影響後面各區的分離效果。在燒接種環時，左手持皿底並將其覆蓋在皿蓋上方(不要放入皿蓋內)，以防止雜菌的污染。
③劃其他區：將燒去殘菌後的接種環在平板培養基邊緣冷卻一下，並使B區轉到上方，接種環通過A區（菌源區）將菌帶到B區，隨即劃數條緻密的平行線。再從B區作C區的劃線。最後經C區作D區的劃線，D區的線條應與A區平行，但劃D區時切勿重新接觸A、B區，以免極該兩區中濃密的菌液帶到D區，影響單菌落的形成。隨即將皿底放入皿蓋中。燒去接種環上的殘菌。
④等平板凝固後，將平板倒置。
（2）稀釋塗布法：是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然後將不同稀釋度的菌液分別塗布到瓊脂固體培養基的表面，在適宜條件下培養。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個的菌落。能夠測定樣品中活菌數的方法是：稀釋塗布平板法。

③ 無菌室需定期用什麼消毒溶液擦拭牆，地面，桌椅及其它設施

可使用百分之九十五酒精溶液， 以及每2—3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台、門、窗、桌、椅及地面，然後用3%石炭酸水溶液噴霧消毒空氣，最後紫外燈殺菌半小時。

無菌室不同的對象採用不同的處理方法

1、高壓蒸汽滅菌: 工作服、口罩、稀釋液等，置高壓殺菌鍋內，一般採用121℃滅菌半小時,當然不同的培養基有不同的要求,應分別處理

2、火焰滅菌：接種針、接種環等可直接火焰滅菌

3、 高溫乾燥滅菌： 各種玻璃器皿、注射器、吸管等，置吵慎於燥箱中160℃滅菌2小時

4、 一 般消毒: 無菌室內的凳、工作台、試管架、天平、待檢物容器或包裝均無法進行滅菌，必須用其他備碰跡方法進行消毒處理，採用2%石炭酸或來蘇兒水溶液擦拭消毒，工作人員的手也用此法進行消毒

5、空氣的消毒： 開啟紫外燈照射30—60分鍾 即可。

(3)tf的無菌化處理應選用什麼方法擴展閱讀：

無菌室建造條件

1、無菌室應保持清潔，嚴禁堆放雜物，以防污染。

2、嚴防一切滅菌器材和培養基污染，已污染者應停止使用。

3、無菌室應備有工作濃度的消毒液，如5%的甲酚溶液，70%的酒精，0.1%的新潔爾滅仿並溶液，等等。

4、無菌室應定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求。

5、需要帶入無菌室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應包紮嚴密，並應經過適宜的方法滅菌。

④ 怎麼讓澱粉溶液無菌

可以高壓滅菌，但澱粉也會糊化，變成透明液體。

⑤ 無菌操作的原則是什麼

無菌技術的操作原則如下：
1、首先要在相對無菌的環境中進行無菌操作。
2、操作者一定要帶好口罩、帽子，穿好無菌衣，然後帶好無菌手套，這時可以接觸無菌物品，然後使用無菌物品進行無菌操作，在無菌操作時千萬不能觸碰有菌物質，一旦觸碰，則立即停止無菌操作，避免細菌感染的情況。所以無菌技術的基本操作原則是嚴格進行無菌操作，在操作的過程中不能觸碰有菌物，否則操作失敗。

⑥ 無菌檢驗方法驗證

無菌檢查 方法 是為了檢查葯典要求無菌的制劑及其他製品是否無菌而建立的試驗方法！至於無菌檢查具體有哪些驗證方法呢？下面就隨我一起來了解下吧！

無菌檢驗方法驗證

無菌檢查方法驗證一般分為前驗證和再驗證兩種。

前驗證，也稱預驗證，指在無菌分析方法正式使用前，按照預定驗證方案進行的驗證。如果沒有充分的理由，任何檢查方法必須進行前驗證。

再驗證，指某一檢查方法經過驗證並在使用一段時間後進行的，旨在證實已驗證狀態沒有發生飄移而進行的重新驗證及對檢查方法進行修訂、改變時進行的驗證。

通常一個無菌產品的檢查流程為：首先基於產品的劑型、溶解度等性質，按照葯典的要求確定是否需要進行前處理;然後根據產品的特性是否有抑菌性，確定是否需要增加去除產品抑菌性的方法;最後驗證整個檢查方法中用到的一切及試驗過程中的每一個環節包括樣品的預處理方式、檢查過程、培養條件等均不影響樣品中微生物的生長。

前處理方法直接影響後續步驟的效果和重現性，應是驗證的重點。

供試品中抑菌活性的去除是當前驗證工作的重點，尤其強調應充分驗證供試品本身對微生物生長的影響。

(一)具體的驗證方法如下：

1. 菌種的選擇

無菌檢查方法驗證中通常選擇以下6種試驗中常用的控制菌的標准菌株，它們分別代表不同類型的菌種：枯草芽孢桿菌 [CMCC(B)63 501]代表葯品中常見的污染菌——芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌 [CMCC(B)26 003]代表革蘭陽性菌、生孢梭菌 [CMCC(B)64 941]代表厭氧菌、大腸埃希菌 [CMCC(B)44 102]代表革蘭陰性菌、白色念珠菌 [CMCC(F)98 001]代表酵母菌、黑麴黴菌 [CMCC(F)98 003]代表黴菌。

2. 菌液的制備

接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養物至營養肉湯培養基中或營養瓊脂培養基上，接種生孢梭菌的新鮮培養物至硫乙醇酸鹽流體培養基中，30~35 ℃培養18~24h;接種白色念珠菌的新鮮培養物至改良馬丁培養基中或改良馬丁瓊脂培養基上，23~28℃培養24~48h，上述培養物用0.9%無菌氯化鈉溶液製成每1ml含菌數小於100cfu的菌懸液。接種黑麴黴的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂斜面培養基上，23~28 ℃培養5~7天，加入3~5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然後，採用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內，用含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液製成每1ml含孢子數小於100cfu的孢子懸液。

3. 樣品的前處理

無菌產品中每個成分應該是均勻的，因此只要確定在驗證的方法中，按所需的總接種量即可，而不必像樣品日常檢測中按規定的容器數取樣。

如果制備樣品時需要使用溶解劑、稀釋劑、助溶劑、破乳劑等溶劑，需要確保這些溶劑是有效的，並且其使用對微生物生長無影響;或者制備過程中需要對樣品進行加熱助溶、離心等操作時，需要確保加熱的溫度、離心速度和離心時間等對微生物生長或分布無影響。 不需前處理的樣品免做。

(二)消除樣品抑菌性的方法

無抑菌性樣品的驗證方法：依據產品溶解性和微生物限度選擇合適的中性稀釋劑溶解和稀釋，用直接接種法驗證，常用中性稀釋液或淋洗液。

對於具有抑菌性樣品的驗證方法，首先確定樣品的抑菌作用(抑細菌、真菌試驗驗證)，選擇敏感標准菌株對供試品抑菌活性去除效果檢查(陽性菌回收試驗)。 常用的消除樣品抑菌活性的方法如下：

1. 稀釋法：利用降低供試品的相對濃度，將樣品稀釋至最低抑菌濃度下進行。如：取規定量的樣品溶液至較大量的培養基中，使單位體積內的樣品含量減少，至不含抑菌作用。

2. 薄膜過濾法：利用體積差異分離，通過薄膜過濾，微生物被截於濾膜，培養薄膜觀察有無微生物生長。通常薄膜孔徑應不大於0.45μm，直徑一般為50?mm，若採用其他直徑的濾膜，沖洗量應進行相應的調整。濾器和濾膜在使用前採用適宜的方法進行滅菌。使用時應保證濾膜在過濾前後的完整性。水溶性供試液過濾前先將少量的沖洗液過濾以潤濕濾膜。油類供試液其濾膜和濾器在使用前應充分乾燥。 供試液經過濾膜過濾後，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為100?ml。總沖洗量不得超過1000ml。

3. 化學中和法：利用化學(生物)專屬性滅活，常用中和劑或滅活方法有：對氨基苯甲酸、卵磷脂、聚山梨酯-80等。對化學中和劑不敏感的樣品，用酶中和，如β -內醯胺酶。

4. 聯合使用：將以上兩種或幾種方法組合運用，以消除樣品的抑菌性。適用於抑菌作用較強的中西葯制劑。

5. 其次按照以下要求制備3組樣品：

樣品組：選擇以上適當的方法中和樣品，加入少量驗證微生物(接種量少於100cfu)。

對照組：0.1%蛋白腖或pH7.0無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液,加少量微生物(接種量少於100cfu)。

陽性對照組：將試驗菌株直接接種於培養基中(接種量少於100cfu)。

6. 最後結果分析如下：

樣品組與對照組微生物生長數量相似，表明中和劑的中和方式有效消除了樣品的抑菌性(即有效性)，如果對照組與陽性對照組的微生物數量相似，表明樣品預處理、消除樣品抑菌性的方法、檢測程序和培養條件等均不影響微生物生長(即無毒性)。樣品如無抑菌性，省去對照組試驗，樣品組與陽性對照組直接比較。樣品組微生物生長數量不及陽性對照組微生物生長數量，表明樣品的預處理、試驗用器具材料、培養條件等方面存在對微生物生長不利的因素。

(三) 為考查驗證方法的穩定性和重現性，驗證至少需3個不同批次的同類樣品，分別進行3次驗證試驗。

無菌檢查方法驗證試驗設計

薄膜過濾法：按照葯典的要求取每種培養基規定接種的樣品總量按薄膜過濾法過濾、沖洗，在最後一次的沖洗液中加入小於100cfu的試驗菌，過濾。取出濾膜接種至硫乙醇酸鹽流體培養或改良馬丁培養基中，或將培養基加至濾桶內。另取一裝有同體積培養基的容器，加入等量試驗菌，作為對照。按照葯典的要求的溫度和時間進行培養。

直接接種法：取符合直接接種法培養基用量要求的硫乙醇酸鹽流體培養基8管，分別接入小於100cfu的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌各2管;取符合直接接種法培養基用量要求的改良馬丁培養基4管，分別接入小於100?cfu的白色念珠菌、黑麴黴各2管。其中1管接入每支培養基規定的供試品接種量，另1管作為對照，按照葯典的要求的溫度和時間進行培養。

結果判斷

同對照管比較，如含供試品各容器中的試驗菌均生長良好，則說明驗證通過;如含供試品的任一容器中的試驗菌生長微弱、緩慢或不生長，驗證失敗，應採用增加沖洗量、增加培養基的用量、使用中和劑和滅活劑、更換濾膜等方法，消除供試品的抑菌作用，重新進行驗證。

無菌檢查的常見方法

首先要檢查方法驗證方案設計的科學性和完整性，是否有與葯典方法相悖的地方，尤其是產品本身的抑菌性，檢查方法的選擇，是直接接種法還是薄膜過濾法等。

無菌檢查方法驗證的硬體是否具備及是否已經進行了相關的確認。如使用黑麴黴菌是否具有生物安全櫃並進行確認，無菌室的確認及日常監測，培養箱的型號及數量和進行確認的情況等，智能集菌器、全封閉無菌試驗過濾培養器的型號、性能，濾膜是否符合規定等。

驗證中各個環節有關數據的真實性，如產品本身抑菌性試驗數據，菌種回收率和培養基適用性和靈敏度檢查數據，菌種的傳代、銷毀和使用記錄，無菌檢查操作記錄、培養記錄等。

無菌檢查中偏差的處理是否真的找到了根本原因，是否在沒有確切的原因前就對樣品重新檢查並依據新的檢查結果放行產品。

驗證的方法與無菌檢查操作規程和無菌檢查記錄是否完全一致，如操作步驟、檢查方法、檢查環境、試驗耗材均需與實際檢查操作規程及驗證過程完全相符。

為了考查驗證方法的穩定性和重現性，驗證時是否至少採用了3個不同批次的同類樣品，分別進行了3次驗證試驗。

使用新的濾膜或過濾器(不同廠家或批號、型號)是否重新進行樣品試驗組、蛋白腖對照組和陽性對照組的驗證確認。

除非樣品不能採用過濾的方法(難溶解)，企業是否採用全封閉的薄膜過濾法。

菌液的保存條件和保存期限是否符合葯典的要求，對於黑麴黴孢子懸液是否有驗證的資料。

無菌檢查的注意事項

培養基的適用性檢查包括培養基的無菌性檢查和培養基的靈敏度檢查。

中國葯典附錄中規定的檢驗數量不包括陽性對照用樣品量，雖然附錄另處有專門說明，仍然容易忽略。

無菌檢查時應強調“檢驗數量”，主要是保證試驗結果的代表性，而陽性對照試驗和驗證時僅須滿足“檢驗量”總量要求即可，以保證試驗結果的可靠性，驗證試驗可以由此減少大量的樣品;工作菌株的傳代次數不得超過5代，以防止過度的傳代增加菌種變異的風險。這里“代”的定義是指，活的培養物接種到微生物生長的新鮮培養基中培養，任何亞培養的形式均被認為是轉種或傳代一次。

菌液加入，按規定應在最後一次沖洗液中加入陽性菌液，主要是考慮過濾器的有效性。過濾器的有效性應由提供企業控制，用戶可採用適當方法抽查(如檢查陽性菌液通過濾筒的流出液)。

實驗室菌種的處理和保存的程序應標准化，以盡可能減少菌種污染和變異。

試驗時菌懸液並不是只要活的菌體就行，而是要保持旺盛的生命力，所以菌懸液存放時間不能太長。

菌液制備後若在室溫下放置，應在2?h內使用，若保存在2～8℃，可在24?h內使用。黑麴黴孢子懸液可保存在2～8℃，在驗證過的貯存期內使用。

薄膜過濾法採用大樣品量集菌的方法，具有代表性，不易漏檢，儀器操作相對簡單。該系統是全封閉過濾系統，避免了操作過程中外源性微生物的污染，對試驗結果的可信性影響較小。因此無菌試驗採用薄膜過濾法還是直接接種法並不依賴於驗證結果，而是取決於樣品的特性，如能採用過濾的方法均應採用薄膜過濾法檢查。

若樣品含有抑菌成分，當採用薄膜過濾法時，應先將供試液稀釋後在過濾，這樣可以減少濾膜對樣品的吸附，減少沖洗量，進而減少微生物的損失或傷害。

無菌檢查應作為穩定性考察的項目進行，以便對產品有效期的制定和合理的確定儲存條件提供重要的依據。

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⑦ 無菌技術的常用滅菌方法

熱滅菌法
熱滅菌法利用高溫使微生物細胞內的一切蛋白質變性，酶活性消失，致使細胞死亡。通常有乾熱、濕熱和間歇加熱滅菌等法。
乾熱滅菌
直接利用火焰將微生物燒死（如燒接種環、載玻片和試管口等）。不能用火焰滅菌的物品則利用熱空氣滅菌,將物品放在烘箱中加熱到160～170℃,持續90分鍾，此法適用於玻璃、金屬和木質的器皿。
濕熱滅菌
以沸水、蒸氣和蒸氣加壓滅菌。巴氏滅菌法就是濕熱滅菌，此法有兩種方式，①低溫長時間處理：在61.7～62.8℃下處理30分鍾；②高溫短時間處理：在71.6℃或略高溫度下處理15分鍾。在上述諸法中，以蒸氣加壓滅菌效果最好，可用常壓蒸氣滅菌，也可在高壓蒸氣鍋中（一般使用1千克/厘米2）滅菌,其蒸氣溫度可達121℃,能將耐熱的芽孢在30分鍾內全部殺死。但對某些易被高壓破壞的物質，如某些糖或有機含氮化合物，宜在0.6千克/厘米2壓力下(110℃)滅菌15～30分鍾。
間歇滅菌
間歇滅菌連續3天,每天進行一次蒸氣滅菌的方法。此法適用於不能耐 100℃以上溫度的物質和一些糖類或蛋白質類物質。一般是在正常大氣壓下用蒸氣滅菌 1小時。滅菌溫度不超過100℃,不致造成糖類等物質的破壞，而可將間歇培養期間萌發的孢子殺死，從而達到徹底滅菌的目的。
輻射滅菌
輻射滅菌在一定條件下利用射線進行滅菌的方法。較常用的有紫外線，其他還有電離輻射（射線加快中子等）。波長在25000～80000納米之間的激光也有強烈的殺菌能力,以波長26500納米最有效。輻射滅菌法僅限於某一定材料，因所需設備復雜，難於廣泛使用。
滲透壓滅菌
滲透壓滅菌利用高滲透壓溶液進行滅菌的方法。在高濃度的食鹽或糖溶液中細胞因脫水而發生質壁分離，不能進行正常的新陳代謝，結果導致微生物的死亡。
化學試劑滅菌
大多數化學葯劑在低濃度下起抑菌作用,高濃度下起殺菌作用。常用5％石炭酸、70％乙醇和乙二醇等。化學滅菌劑必須有揮發性，以便清除滅菌後材料上殘余的葯物。
實驗室常用的消毒滅菌方法
一、消毒技術（一）明確消毒的主要對象 應具體分析引起感染的途徑、涉及的媒介物及病原微生物的種類，有針對性地使用消毒劑。（二）採取適當的消毒方法 根據消毒對象選擇簡便
一、消毒技術
（一）明確消毒的主要對象
應具體分析引起感染的途徑、涉及的媒介物及病原微生物的種類，有針對性地使用消毒劑。
（二）採取適當的消毒方法
根據消毒對象選擇簡便、有效、不損壞物品、來源豐富、價格適中的消毒方法。
醫院診療器械按污染後可造成的危害程度和在人體接觸部位不同分為三類：
1. 高度危險的器材
穿過皮膚、粘膜而進入無菌的組織或器官內部，或與破損的皮膚粘膜密切接觸的器材，如手術器械、注射器、心臟起搏器等。必須選用高效消毒法（滅菌）。
2. 中度危險的器材
僅與皮膚、粘膜密切接觸，而不進入無菌組織內，如內窺鏡、體溫計、氧氣管、呼吸機及所屬器械、麻醉器械等。應選用中效消毒法，殺滅除芽胞以外的各種微生物。
3. 低度危險器材和物品
不進入人體組織，不接觸粘膜，僅直接或間接地與健康無損的皮膚接觸，如果沒有足夠數量的病原微生物污染，一般並無危害，如口罩、衣被、葯杯等，應選用低效消毒法或只作一般衛生處理。只要求去除一般細菌繁殖體和親脂病毒。
（三）控制影響消毒效果的因素許多因素會影響消毒劑的作用，而且各種消毒劑對這些因素的敏感性差異很大。
1. 微生物的種類
不同類型的病原微生物對消毒劑抵抗力不同，因此，進行消毒時必須區別對待。
1）細菌繁殖體
易被消毒劑消滅，一般革藍氏陽性細菌對消毒劑較敏感，革藍氏陰性桿菌則常有較強的抵抗力。繁殖體對熱敏感，消毒方法以熱力消毒為主。
（2）細菌芽胞
芽胞對消毒因子耐力最強，殺滅細菌芽胞最可靠的方法是熱力滅菌，電離輻射和環氧乙烷熏蒸法。在化學消毒劑中，戊二醛、過氧乙酸能殺滅芽胞，但可靠性不如熱力滅菌法。
（3）病毒
對消毒因子的耐力因種類不同而有很大差異，親水病毒的耐力較親脂病毒強。
（4）真菌
對乾燥、日光、紫外線以及多數化學葯物耐力較強，但不耐熱（60℃1小時殺滅）。
2. 微生物的數量
污染的微生物數量越多需要消毒的時間就越長，劑量越大。
3. 有機物的存在
①有機物在微生物的表面形成保護層妨礙消毒劑與微生物的接觸或延遲消毒劑的作用，以致於微生物逐漸產生對葯物的適應性。②有機物和消毒劑作用，形成溶解度比原來更低或殺菌作用比原來更弱的化合物。③一部分消毒劑與有機物發生了作用，則對微生物的作用濃度降低。④有機物可中和一部分消毒劑。消毒劑中重金屬類、表面活化劑等受有機物影響較大，對戊二醛影響較小。
4. 溫度
隨著溫度的升高，殺菌作用增強，但溫度的變化對各種消毒劑影響不同。如甲醛、戊二醛、環氧乙烷的濕度升高1倍時，殺菌效果可增加10倍。而酚類和酒精受溫度影響小。
5. PH值
從兩方面影響殺菌作用。①對消毒劑的作用：改變其溶解度和分子結構。②pH過高或過低對微生物的生長均有影響。在酸性條件下，細菌表面負電荷減少，陰離子型消毒劑殺菌效果好。在鹼性條件下，細菌表面負電荷增多，有利於陽離子型消毒劑發揮作用。
6. 處理劑量與監測
保證消毒、滅菌處理的劑量，加強效果監測，防止再污染。

⑧ 在化驗室的無菌檢查中，有沒有可以替代酒精燈的

無菌室的無菌處理： 1、先進行無菌室空間的消毒，開啟紫外燈30-60分鍾。 2、檢驗用的有關器材， 搬入無菌室前必須分別進會滅菌消毒。 3、操作人員必須將手段返洞清洗消毒，穿戴好無菌工作衣、帽和鞋，才能進入無菌室。 4、進入無菌室後再一次消毒手部，然後才進行檢驗操作。 5、無菌室應保持清潔整齊，室內僅存放必須的檢驗用具如酒精燈、酒精棉、火柴、鑷子、接種針、接種環、玻璃鉛筆等，不要放與檢測無關的握枯物品。 6、室內檢驗用具及凳桌等保持固定位置，不隨便移動。 7、每2-3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台、門、窗、桌、椅及地面，然後用3%石炭酸水溶液噴霧消毒空氣，最後紫外燈殺菌半小時。 8、定期檢查室內空氣無菌狀況，細菌數應控制在10個以下，發現不符合要求時應立即徹底消毒滅菌。 9、無菌室殺菌前應將所有物品置於操作之部位（待檢物例外），然後打開紫外燈殺菌30分鍾，時間一到，關閉紫外燈待用。無菌室無菌程度的測定方法：取普通肉湯瓊脂平板、改良馬丁培養基平板各3個（平板直徑均9厘米），置無菌室各工作位置上，開蓋曝露半小時，然後倒置進行培養，測細菌總數應置37℃溫箱培養48小時；測黴菌數則世伏應置27℃溫箱培養5天。細菌、黴菌總數均不得超過10個。

⑨ 醫療器械的無菌操作規則

一、醫院消毒滅菌效果監測：
1.必要性：
①消毒滅菌效果監測方法專業性強，不檢驗不知道結果；
②新建病房、新消毒設備、新消毒劑均應做效果監測。
③特殊對象、特殊需要，必做效果監測。如移植術前、ICU病房、危重病人等。
2.科學性：以科學的試驗設計、熟練的技術、可靠的結果、確切地分析，得出結果評價。
3.規范性：以權威規范為依據，符合其基本原則要求。如檢測時機的確定型笑圓、標准菌株的選擇、標本數、重復次數、實驗方法等確立。
二、監測方法的分類：
1、根據檢測方法性質分：
①物理方法：測量壓力滅菌溫度、測量紫外線強度等；
②化學方法：各種化學指示卡；
③生物方法：嗜熱/枯草芽孢滅菌效果監測自然菌存活數監測；
2、根據消毒滅菌對象性質分：
①空氣消毒：
②表面消毒：
3.根據具體消毒對象分：
①壓力蒸汽滅菌：
②各種器械：
③化學消毒劑：
④紫外線燈殺菌效果：
⑤手和皮膚消毒效果：
⑥空氣消毒效果：
⑦物體表面消毒效果：
三、必要條件：
1、專業實驗室：
2、必備設備器材：
3、選擇實驗方法：
4、熟練實驗技術：
四、衛生部對500張床位以上醫院感染管理的質量指標規定：
（1）醫院感染率≤10%；滅菌切口感染 ≤0.5%
（2）醫院感染的漏報率≤20%；
調查樣本量不少於年監測病人數的10%
（3）醫院必須對消毒、滅菌效果定期進行監測。
滅菌合格率必須達到100%
（4）使用中的消毒劑、滅菌劑應進行生物和化學監測。消毒劑每季度生物監測1次，細菌含量必須<100cfu/ml，不得檢出致病微生物；滅菌劑每月檢測1次，不得檢出微生物。化學監測應根據消毒、滅菌劑的性能定期監測。
（5）壓力蒸氣滅菌進行工藝、化學和生物監測。環氧乙烷必須每鍋進行工藝監測，每包進行化學監測，每月進行生物監測。壓力蒸氣鍋每天第一鍋必須做B-D試驗。
（6）紫外線燈強度監測：每季度1次；新燈管30W≥90µW/cm2,舊燈管≥70µW/cm2
（7）胃腸鏡等診療器材消毒標准不得檢出致病微生物；腹腔鏡、關節鏡等應滅菌處理，不得檢出任何微生物。
（8）進入人體組織、血液、器官的醫療用品應滅菌處理，不得檢出致病微生物；接觸黏膜醫療用品細菌總數≤20cfu/g（或100 cm2）；接觸皮膚的醫療用品細菌總數≤200cfu/g（或100 cm2），不得檢出致病微生物。
（9）母嬰同室、嬰兒室物體表面和醫護人員手不得檢出沙門氏菌。
（10）醫院各類環境空氣、物體表面、醫護人員手細菌數標准：
環境 類 別 空氣 物體表面 醫護人員手
cfu/cm3 cfu/cm2 cfu/cm2
Ⅰ類 層流潔凈手術室、 ≤10 ≤5 ≤5
潔凈病房
Ⅱ類 普通手術室、產房、 ≤200 ≤5 ≤5
嬰兒室、普通隔離病房
Ⅲ類 兒科、婦科檢查室、 ≤500 ≤10 ≤10
注射、換葯、治療、
急診、化驗、普通病房
Ⅳ類 傳染病科及病房 —— ≤15 ≤15
五、為保證醫院消毒滅菌可靠，應認真做好醫院消毒滅菌效果監測
1、影響消毒滅菌因素很多，使消毒滅菌效果難以保證。
2、消毒滅菌效果生物監測專業性強，條件難創造，結果評價難度大，實驗周期長。
3、化學測試試劑法較復雜，結果准確；試紙法簡便易行，但精確度較差。
六、壓力蒸汽滅菌效果的監測：
（一）BD試紙：
檢查滅菌器工藝狀態，並不能反應滅菌器使用中被滅菌物品的實際滅菌效果。發現陽性應進行滅菌器性能檢查調試。
（二）指示膠帶：
表示是否經過滅菌處理，並不能反應被滅菌物品實際滅菌效果。
（三）化學指升盯示卡：
卜塌檢測每包被滅菌物品的滅菌效果。建議最好每包被滅菌物品中心放一片化學指示卡,待滅菌處理後,視其變色程度（滅菌效果）決定是否使用。
（四）用生物指示劑作系統監測：
採用生物滅菌指示劑來檢查壓力蒸汽滅菌效果是最科學、最可靠的監測方法。由中國預防醫學科學院流行病微生物研究所，北京鑫四環消毒技術開發中心聯合產銷的嗜熱脂肪桿菌芽孢（SS1，K31）是國際公認的標准菌株。現製成標准菌片，供檢查壓力蒸汽滅菌效果檢測。
w 菌株特點：
1、 該菌為需氧芽孢桿菌，細菌繁殖體G蘭氏染色陰性呈紫色，細菌芽胞孔雀綠著色。其細菌繁殖體對培養基要求低，在溴甲酚紫葡萄糖蛋白腖瓊脂上生長良好，表面粗糙呈米黃色。
2、最適生長繁殖溫度為56–65℃，培養24h即可形成菌落，37℃下24h看不到菌落。
3、 本生物指示劑載體為高級濾紙片，染菌量為5×105–106cfu/片，封裝在小紙袋內，熱死亡時間為121℃，3.9min陽性，19min陰性；D10值1.3–1.9min，符合美國葯典第十一版規定標准。該菌無毒，熱抗穩定，在冰箱內4℃下保存一年抗力無明顯下降，在常溫（20℃左右）可保存1個月。
w 使用方法：
1、 該芽孢菌片使用時將裝有菌片的小紙袋放在被滅菌的物品中心部位（每鍋放置菌片數按衛生部規定）。
2、 滅菌後，再無菌操作下取出小紙袋中的菌片， 投放到溴甲酚紫培養液管中。同時將未經滅菌的菌片投入另一管培養基中作對照。
3、 56℃–60℃培養，48h觀察結果，對照管為米黃色；若滅菌後菌片培養液顏色不變仍為淡紫色，為陰性（–），表示滅菌徹底；如變黃為陽性（+），表示滅菌不徹底。
w 培養基成分和配製方法：
1、成分：胰蛋白腖10g、葡萄糖5g、蒸餾水 1000ml、1.6%溴甲酚紫酒精溶液指示劑1ml。
2、配製方法：
（1）1.6g溴甲酚紫溶於98.4ml的96%酒精溶液中搖勻；
（2）把前三種成分溶解後，調解pH7.0-7.2，加入指示劑搖勻；
（3）每管分裝5ml，以121℃20min滅菌後，放4℃冰箱內保存，備用。
w 注意事項：
1、防止指示劑中酒精揮發而使溴甲酚紫含量過高（溴甲酚紫含量過高後可抑菌生長）；
2、菌片滅菌後應及時取出培養；
3、禁止菌片接觸任何消毒劑及放射源以免影響抗力。
七、化學消毒劑消毒效果監測：
（一）消毒劑有效含量的測試：
1、主要是有效含量不穩定的消毒劑，如過氧 乙酸、含氯消毒劑等應進行含量測試。
2、 化學試劑滴定法較復雜但結果精確；試紙法方便快速，但准確性差。專用測氯試紙——比較准確；復合測試試紙（可同測過氧乙酸、含氯消毒劑）——准確性較差。戊二醛試紙；含碘、臭氧等試紙尚待研究。
（二）化學消毒劑使用溶液污染菌數的檢測
1、選好用好中和劑：
2、做到：對應，濃度、比例合適
3、 中和劑選擇原則：
①本身對菌無影響
②確能去除殺菌因子
③生成物對菌無影響
④對照完全
★ 試驗分組：
① 菌液+葯液 培養
②（葯+菌液）+中和劑 培養
③ 中和劑+菌液 培養
④（葯+中和劑）+菌液 培養
⑤ PBS+菌液 培養
⑥ PBS 培養
⑦ 中和劑 培養
⑧ 培養基 培養
1）方法：
第一步： 用容量為1ml的滅菌吸管，吸取1ml消毒溶液。
第二步：將吸取的1ml樣液加入到9ml的稀釋液中，這個稀釋液的配製成分取決於消毒劑溶液的成分，即在生理鹽水溶液中加入合適的中和劑。
浸泡器械用消毒液缸 稀釋管 營養瓊脂平皿
圖1 Kelsey和Maurer提出消毒劑溶液在使用過程中的試驗
第三步：
將上述消毒稀釋液試管送到實驗室，從采樣到試驗時間不要超過1h，隨後用一支50滴/ml量的滴管 (出可用有0.02ml刻度的血清吸管），吸取混合液，在每一個營養瓊脂平板表面上（培養基平板表面上已無水分），滴10滴（每滴量為0.02ml），同樣滴二個平板。
第四步：
將二個平板分別孵育於二種不同溫度的孵箱內；一個放在37℃孵箱內1～2天；另一個平板孵育於20℃左右的室溫下3～7天，隨後計算二個平板上的菌落數，除以2，即得出每個平板上的平均菌落數。
2）試驗結果：
平板培養後有細菌菌落存在，表示消毒溶液中有細菌存在。若一個板上長1～2個菌落，可以忽略，因為消毒劑溶液畢竟是一種化學消毒劑，而不是滅菌劑，因此培養出極少量活菌是屬正常。若一個平板上生長5個或5個以上的菌落，則應注意這消毒劑溶液已被污染。從平板上檢出菌落數，可以計算出每毫升消毒溶液中存在的細菌數，其計算方法如下：
◆ 由於消毒樣液是按1：10稀釋，用50滴/ml的滴管滴10滴。如果10滴的消毒劑/稀釋液混合液生長了5個菌落，可計算出1ml消毒溶液中存在250個活菌。換句話說，在一個板上滴上10滴，它是1ml的1/5，因此計算如下：
5（一個平板上長菌落總數）×10（用消毒液稀釋10倍）×5（在平板滴10滴，只佔消毒劑/稀釋液混合液的1/5）=250個菌。
5×10×1=100個菌，即每毫升消毒液中存在的細菌數。若一個平板上長20個菌落，則每毫升消毒液中有5×10×5=250個細菌，這樣多的細菌，說明此消毒劑溶液已經失效，不能再使用

（見圖2）

圖2 平板上細菌的污染情況
每滴上各有少數菌落表示不能繼續使用
每滴上存在許多菌落表示嚴重污染
3）消毒劑溶液中長菌的原因:
消毒劑溶液中長菌，常見有下列幾種原因：
①容器沒有洗凈，未經加熱消毒處理。
②配製消毒劑溶液時，消毒劑和水量不準確， 使消毒濃度過低不能殺死細菌或抑制細菌。
③消毒劑溶液貯存過久，已經失效。
④由於過多的有機物質在消毒劑溶液中，消耗消毒劑而使消毒劑失效。
⑤在消毒劑溶液中存在著各種抑制消毒劑物質。
八、醫療器械滅菌效果的檢測：
采樣時間；在滅菌處理後，存放有效期內采樣。
（一）常規監測
1、檢測方法：縫合針、針頭、手術刀片等件醫療器械各5件，分別投入5ml的無菌洗脫液中。注射器則取5副在5ml無菌肉湯中分別抽吸5次。手術鉗、鑷子等大的醫療器械取2件，用棉拭子反復塗擦采樣，將棉拭子投入5ml無菌洗脫液中。振打80次,吸取1ml 接種平皿做活菌計數， 37℃培養48h，計算菌落數。
2、結果判定：平板上無菌生長為滅菌合格。
3、注意事項：若消毒因子為化學消毒劑時，
采樣液中應加入相應的中和劑。
（二）無菌檢驗
1、無菌檢驗前准備
（1）洗脫液與培養基無菌檢驗：無菌試驗前3天，於需-厭氧培養基中各接種1ml 洗脫液，分別至30~35℃與20~25℃培養72h，應無菌生長。
（2）陽性對照管菌液制備：試驗前一天取金黃色葡萄球菌（CMCC 26003）新鮮培養物，接種1環至需-厭氧培養基內，在30~35℃培養16~18h，用0.9％無菌氯化鈉溶液稀釋10cfu/ml備用。取生孢梭菌（CMCC 6494）的需氧菌、厭氧菌培養基新鮮培養物1環接種於相同培養基內，30~35℃培養16~18h，用0.9％無菌氯化鈉溶液稀釋10cfu/ml備用。取白色念珠菌（CMCC 98001）真菌瓊脂培養基斜面新鮮培養物1環，接種於相同培養基內，20~25℃培養24h，用0.9％無菌氯化鈉溶液稀釋10cfu/ml~10cfu/ml備用。
2、無菌操作：
（1）取縫合針、針頭、刀片等小件醫療器械5件直 接侵入6管需--厭氧培養管（其中1管作陽性對照）與4管黴菌培養管。培養基用量為15ml/管。
（2）取5副注射器，在5ml洗脫液中反復抽吸5次， 接種需-厭氧培養管（6管，其中1管作陽性對照）與黴菌培養管（共4管）。接種量：1ml注射器為0.5ml，2ml注射器為1ml，5~10ml注射器為2ml，20~50ml注射器為5ml，培養 基用量為2ml以下為15ml/管，接種量5ml為40ml/管。
（3）手術鉗、鑷子等大件醫療器械取2件用棉拭子塗擦采樣，投入5ml無菌洗脫液中，接種於需-厭氧培養管（6管，其中1管作陽性對照）與黴菌培養管（共4管）。接種量為1ml/管，培養基用量為15ml/管。
3、培養：將需-厭氧培養管以及陽性與陰性對照管均於30～35℃培養5天。黴菌培養 管與陰性對照管於20～25℃培養7天。
4、結果判定：陽性對照在24h內應有菌生長，陰性對照無菌生長，需-厭氧培養管及黴菌培養管無菌生長，可判為滅菌合格。
★ 如需-厭氧培養管及黴菌培養管中任何1管顯混濁並證明有菌生長，應重新取樣，分別復測2次，如各管無菌生長仍可判為滅菌合格。
5、注意事項：
（1）在潔凈度100級區域中進行，嚴格無菌操作。
（2）采樣後送檢時間不得超過6h，樣品保存於4℃，則不超過24h。
（3）如消毒因子為消毒劑，采樣液中應加入中和劑。
（4）采樣面積，100cm2。
（5）設好陽性、陰性對照。
九、手和皮膚消毒效果檢測：
1、采樣時間，在消毒後立即采樣。
2、采樣方法
（1）手，手曲面手指跟到手指端（一隻手約30cm2），采樣液10ml。
（2）皮膚，5cm×5cm 。采樣液10ml。
3、檢驗方法
取1ml采樣液做活菌計數，37℃培養48h。
4、采樣結果計算：
平板上菌落數 X 稀釋倍數
細菌總數（cfu/cm2）= ---------------------------------
采樣面積（cm2）
5、結果判定：
（1）I、II類區域工作人員，細菌總數 ≤5cfu/cm2，並未檢出致病菌為消毒合格。
（2）III類區域工作人員，細菌總數≤10cfu/cm2，並未檢出致病菌為消毒合格。
（3）IV類區域工作人員，細菌總數≤15cfu/cm2，並未檢出致病菌為消毒合格。
●母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員，不得檢出沙門氏菌及其他致病菌。
6、注意事項：
（1）采樣器材應無菌。
（2）采樣液中應含相應的中和劑。
（3）陽性對照的設定問題。
（4）消毒時間要求，外科手消毒3分鍾、衛生手消毒1分鍾，皮膚消毒5分鍾。
十、物體表面消毒效果監測
1、采樣時間：消毒處理後采樣。
2、采樣方法
用5cm×5cm滅菌規格板，采樣面積≥100 cm2。門把手等不規則表面直接用棉拭子采樣。
3、采樣液10ml（含中和劑）。
4、檢驗方法：同上
5、結果判定：
（1）I、II類區域，細菌總數≤5cfu/cm2，並未檢出致病菌為消毒合格。
（2）III類區域，細菌總數≤10cfu/cm2，並未檢出致病菌為消毒合格。
（3）IV類區域，細菌總數≤15cfu/cm2，並未檢出致病菌為消毒合格。母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體表面，不得檢出沙門氏菌。
十一、空氣消毒效果監測
1、采樣時間：消毒後、操作前進行采樣。
2、采樣方法：
（1）布點：
室內面積≤30 m2，設內、中、外對角線3點，內外點距牆1m；室內面積 >30 m2，設四角及中央5點，四角點距牆1m。
（2）平板暴露法
平板直徑9cm、采樣高度1.5m，暴露5min。
3、檢驗方法
平板37℃培養48h。計數菌落數並分離致病菌。
4、平板暴露法結果計算
50000N
細菌總數（cfu/m3）= --------------------
A×T
A為平板面積（cm2）； T 為暴露時間（min）；N 為平均菌落數（cfu）
5、結果判定
（1）I、II類區域，細菌總數≤10cfu/cm3，並未檢出致病菌為消毒合格。
（2）III類區域，細菌總數≤200cfu/cm3，並未檢出致病菌為消毒合格。
（3）IV類區域，細菌總數≤500cfu/cm2，並未檢出致病菌為消毒合格。
6、注意事項：采樣前關好門窗，在無人走動的情況下，靜止10min 進行采樣。
十二、紫外線燈管強度的檢測：
1、紫外線是不可見光，紫光≠殺菌。
2、紫外線直射、折射。
3、紫外線穿透力弱。
4、殺菌紫外線為C波段，中心波長2537AO
5、紫外線殺菌劑量：強度 X 時間
6、檢測紫外線燈管強度的方法：紫外線強度儀；紫外線強度指示卡
7、紫外線燈管的質量：玻璃無氣泡、氣線；啟動快；不閃動；壽命長；照射強度標准：30W燈管新燈≥90µW/cm2；舊燈≥70µW/cm2
8、紫外線強度測試距燈光垂直100cm照射直接讀強度值。
注意：①作好防護：戴眼鏡、手套，必要時戴防護面罩。
②紫外燈管開啟後穩定5分鍾後，讀測試數值。
③紫外線強度變化與燈管質量電壓，反光罩光潔度等有關。
十三、幾點信息和看法：
1、對消毒技術和方法的評價問題：
1）含氯消毒劑的更替；
2）戊二醛和鄰苯二甲醛；
3）動態消毒機的效果評價；
4）臭氧消毒的優缺點(氧化作用突出)；
5）空氣和表面消毒相結合；
◆消毒是積極的治療，對任何人都是必不可少的！
◆健康的生命才是最寶貴的！
◆為了保護健康和生命，讓我們共同為發展消毒事業而努力！

⑩ 無菌技術基本原則六點

無菌技術基本原則六點為環境清潔、無菌操作、物品管理、無菌物品、取無菌物、無菌操作。

無菌技術是指在執行醫療護理操作的過程中，防止一切微生物侵入機體或傳播給他人和保持無菌物品及無菌區域不被污染的操作技術和管理方法。無菌物品經過物理雹者或化學方法滅菌後，未被污染的物品稱無菌物品。

無菌區域經過源枯薯滅菌處理而未被污染的區域，稱無菌區域。非無菌物品或區域未經滅菌或經滅菌後被污染的物品或區域，稱非無菌物品或區域。進行無菌技術操作前半小時，須停止清掃地面等工作，避免不必要的人群流動，減少人員走動，以敗豎降低室內空氣中的塵埃。

無菌技術的使用方法

無菌持物鉗（鑷）應浸泡在盛有消毒溶液的無菌廣口容器內，液面需超過軸節以上2—3cm或鑷子二分之一處。容器底部應墊無菌紗布，容器口上加蓋，每個容器內，只能放一把無菌持物鉗。

經滅菌處理的盛放無菌物品的器具稱無菌容器，如無菌盒、貯槽、罐等。無菌容器應每周消毒滅菌一次，無菌包布是用質厚、緻密、未脫脂的棉布製成雙層包布。其內可存放器械、敷料以及各種技術操作用物，經滅菌處理後備用。將無菌治療巾鋪在清潔、乾燥的治療盤內，使其內面為無菌區，可放置無菌物品，以供治療和護理操作使用，有效期限不超過4小時。