氨基酸的分析方法

1. 氨基酸定性和定量分析的經典方法是什麼

茚三酮反應可以定量定性 離子交換層析柱 高效液相層析可以做分離分析

2. 檢驗氨基酸用什麼方法

你若是問蛋白質，我可以直接告訴你又雙縮脲試劑（中學階段），但氨基酸的檢驗比蛋白質麻煩多了。 一、氨基酸的分離和檢測氨基酸的分離和檢測手段，以往用化學分析法、層析法、比色法、氣相色譜法、氨基酸自動分析儀。隨著高效液相色譜及填料的發展，HPLC在氨基酸檢測方面顯示了其特有的優越性。但大多數氨基酸無紫外吸收和熒光發射特性，為提高分析檢測靈敏度和分離選擇特性，通常將氨基酸衍生，衍生方式有柱前衍生法與柱後衍生法。HPLC與各種衍生相結合的氨基酸分析技術，構成了具有廣泛適用性的現代氨基酸分析技術。 二、鑒定是哪種氨基酸，不同的氨基酸要用不同的方法。1、茚三酮反應 （ninhydrin reaction） 茚三酮（弱酸環境加熱） 紫色（脯氨酸、羥脯氨酸為黃色） （檢驗α－氨基） 2、坂口反應 （Sakaguchi reaction） 丙氨酸 α-萘酚+鹼性次溴酸鈉 紅色 （檢驗胍基 精氨酸有此反應） 3、米隆反應（又稱米倫氏反應） HgNO3+HNO3+熱 紅色 （檢驗酚基 酪氨酸有此反應，未加熱則為白色） 4、Folin-Ciocalteau反應（酚試劑反應） 磷鎢酸-磷鉗酸 藍色 （檢驗酚基 酪氨酸有此反應） 5、黃蛋白反應 濃硝酸煮沸 黃色 （檢驗苯環 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反應） 6、Hopkin-Cole反應（乙醛酸反應） 加入乙醛酸混合後徐徐加入濃硫酸 乙醛與濃硫酸接觸面處產生紫紅色環 （檢驗吲哚基 色氨酸有此反應） 7、Ehrlich反應 P-二甲氨基苯甲醛+濃鹽酸 藍色 （檢驗吲哚基 色氨酸有此反應） 8、硝普鹽試驗 Na2(NO)Fe(CN)2*2H2O+稀氨水 紅色 （檢驗巰基 半胱氨酸有此反應）

3. 列舉三種氨基酸的定量分析方法，說明其工作原理。

就給你找到兩種，將就著看吧..你找到了另一種，再告訴我一下
1、化學分析法——甲醛滴定法
甲醛滴定法用於氨基氮的測定, 可以測出樣品中總氨基酸的含量,其原理是在中性或弱鹼性水溶液中,氨基酸的α—氨基與醛類反應生Schiff鹼:α—氨基酸與甲醛反應生成亞甲基亞氨基衍生物
2、分光光度法——茚三酮法
茚三酮是一種能使氨基酸生成在可見光區有吸收的衍生試劑。該方法的基本原理是經陽離子交換柱分離出的氨基酸與茚三酮混合,經加熱反應後,一級胺與之生成藍紫色化合物,二級胺與之生成黃色化合物。兩種衍生物使用雙通道紫外檢測器同步檢測,檢測波長分別為570nm 和436nm。

4. 請教：氨基酸序列的測定方法

有兩種方法，一是直接測序列法，常用Edman降解法，在弱鹼性條件下多肽連N端氨基酸（阿爾發）與PITC反應，標記為苯氨基硫代甲醯蛋白質。肽鏈中的第一個肽鍵變弱，在無水酸的存在下發發生降解，第一個氨基酸（AA1）經過分子重排成為PTH-AA1結合層析技術即可確定氨基酸的性質。C端氨基酸殘基分析，可用；羧基肽酶，肼解法；二是串聯質譜測定多肽鏈氨基酸測序。

氨基酸（amino acid）：含有氨基和羧基的一類有機化合物的通稱。生物功能大分子蛋白質的基本組成單位，是構成動物營養所需蛋白質的基本物質。是含有鹼性氨基和酸性羧基的有機化合物。氨基連在α-碳上的為α-氨基酸。組成蛋白質的氨基酸均為α-氨基酸。

5. 氨基酸成分分析是什麼

氨基酸含有氨基和羧基兩種成分。與羥基酸類似，氨基酸可按照氨基連在碳鏈上的不同位置而分為α－，β－，γ－...w-氨基酸，但經蛋白質水解後得到的氨基酸都是α－氨基酸，而且僅有二十幾種，他們是構成蛋白質的基本單位。

氨基酸為構成動物營養所需蛋白質的基本物質。含有鹼性氨基和酸性羧基的有機化合物。氨基連在α－碳上的為α－氨基酸。組成蛋白質的氨基酸大部分為α－氨基酸。

物理性質

氨基酸為無色晶體，熔點超過200℃，比一般有機化合物的熔點高很多。α－氨基酸有酸、甜、苦、鮮4種不同味感。谷氨酸單鈉和甘氨酸是用量最大的鮮味調味料。氨基酸一般易溶於水、酸溶液和鹼溶液中，不溶或微溶於乙醇或乙醚等有機溶劑。

氨基酸在水中的溶解度差別很大，例如酪氨酸的溶解度最小，25℃時，100g水中酪氨酸僅溶解0.045g，但在熱水中酪氨酸的溶解度較大。賴氨酸和精氨酸常以鹽酸鹽的形式存在，因為它們極易溶於水，因潮解而難以製得結晶。

6. 氨基酸和蛋白質的分析方法有哪些

電泳、各種層析、各種色譜、雜交檢測、免疫化學檢測等等。

7. 氨基酸的分離分析方法常有有哪些

如果是兩個氨基酸的保留時間距離太近，那麼只能調整液相條件了。
比如調整流動相比例，或者是梯度比例，把兩個氨基酸拉開。
也可以適當調整衍生程序。
雖然衍生程序不會對氨基酸的保留時間有影響，不過會對它的信號產生影響。
如果這兩種氨基酸的峰高有所下降，或許分離度也可以達到要求。
還有就是注意峰型。
衍生化程序很容易損壞色譜柱，超高效色譜的壓力又高，色譜柱很容易損毀。
如果峰型不好，建議用純乙腈低流速反沖色譜柱。
或者是更換新色譜柱。

8. 蛋白質氨基末端氨基酸的測定方法

測定蛋白質最基本的方法是定氮法,即先測定樣品中的總氮量,再由總氮量計算出樣品中蛋白質的含量.蛋白質含量測定最常用的方法是凱氏定氮法,它是測定總有機氮的最准確和操作較簡便的方法之一,在國內外應用普遍.此外,雙縮脈法、染料結合法、酚試劑法等也常用於蛋白質含量測定,由於方法簡便快速,故多用於生產單位質量控制分析. 蛋白質及氨基酸的測定 蛋白質是生命的物質基礎,是構成生物體細胞組織的重要成分,一切有生命的活體都含有不同類型的蛋白質.人體內的酸鹼平衡、水平衡的維持；遺傳信息的傳遞；物質的代謝及轉運都與蛋白質有關.人及動物只能從食品得到蛋白質及其分解產物,來構成自身的蛋白質,故蛋白質是人體重要的營養物質,也是食品中重要的營養指標. 蛋白質是復雜的含氮有機化合物,分子量很大,它們由20種氨基酸通過醯胺鍵以一定的方式結合起來,並具有一定的空間結構.不同的蛋白質其氨基酸構成比例及方式不同,故各種不同的蛋白質其含氮量也不同.蛋白質可以被酶、酸或鹼水解,最終產物為氨基酸.氨基酸是構成蛋白質的最基本物質,在構成蛋白質的氨基酸中,亮氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、蘇氨酸、色氨酸和纈氨酸等8種氨基酸在人體中不能合成,必須依靠食品供給,故被稱為必需氨基酸,它們對人體有著極其重要的生理功能,常會因其在體內缺乏而導致患病,或通過補充而增強了新陳代謝作用.所以食品及其原料中蛋白質和氨基酸的分離、鑒定和定量具有極其重要的意義. 蛋白質的測定 測定蛋白質最基本的方法是定氮法,即先測定樣品中的總氮量,再由總氮量計算出樣品中蛋白質的含量.蛋白質含量測定最常用的方法是凱氏定氮法,它是測定總有機氮的最准確和操作較簡便的方法之一,在國內外應用普遍.此外,雙縮脈法、染料結合法、酚試劑法等也常用於蛋白質含量測定,由於方法簡便快速,故多用於生產單位質量控制分析. 微量凱氏定氮法 本法適用於各類食品中蛋白質的測定. 1．原理 食品與硫酸和催化劑一同加熱消化,使蛋白質分解,分解的氨與硫酸結合生成硫酸胺.然後鹼化蒸餾使氨游離,用過量硼酸吸收後再以硫酸或鹽酸標准溶液滴定,根據酸的消耗量乘以換算系數,即為蛋白質含量.反應過程分為三個階段,用反應式表示如下. ①消化 2NH2(CH2)2COOH 4-13H2S04一(NH.)2S04+6C02+12S0=+16H20 (NH4)2S04+2Na()H一2NH3十+2H20+.Na2S04 2NH3+4H3803—,(NH4)2 B207+5H20 ③滴定 (NH4)2 B2 07+2HCl+5H20—NH4C1+4H3803 2．儀器 ①消化爐. ②凱氏定氮蒸餾裝置. 3．試劑 所用試劑均用不含氨的蒸餾水配製.試劑均為分析純. ①CuS04. ②K2SO. ③濃H2SO. ④2％H.BO.溶液. ⑤混合指示劑：1份O．1％甲基紅乙醇溶液與5份O．1％溴甲酚綠乙醇溶液臨用時混合.也可用2份O．1％甲基紅乙醇溶液與1份0．1％次甲基藍乙醇溶液臨用時混合. ⑥飽和氫氧化鈉：500 g氫氧化鈉加入500 mL水中,攪拌溶解,冷卻後放置數日,澄清後使用. ⑦0．01 toolI．一』或0．05 toolL叫HCl標准溶液(需用無水碳酸鈉標定後使用). 4．操作步驟 ①樣品消化：精密稱取O．2～2．0 g固體樣品或2～5 g半固體樣品或吸取液體樣品5～20mI.,放人500 mI.乾燥凱氏燒瓶中,加人O．2 g硫酸銅、3 g硫酸鉀及20 mL濃HzSOa,於凱氏瓶口放一小漏斗,並將其以45.角斜支於有小孔的石棉網上.（更多詳細咨詢請參考國家標准物質網 www.rmhot.com ）用電爐以小火加熱,待內容物全部碳化,泡沫停止產生後,加大火力,保持瓶內液體微沸,至液體變藍綠色透明後再繼續加熱微沸30 min.冷卻,小心加入20 mL水,再放冷至室溫,移人100 mL容量瓶中,並用少量水洗燒瓶洗液並人容量瓶,在加水至刻度,混勻備用.除不加樣品外,取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸,按同一方法做試劑空白消化. ②水蒸氣發生瓶內裝水至約2／3處,加甲基紅指示液數滴及數毫升硫酸,以保持水呈酸性,加入數粒玻璃珠以防暴沸,加熱煮沸水蒸氣發生瓶內的水. ③向接收瓶內加入10 mL 2％硼酸溶液及混合指示液l滴,並使冷凝管的下端插入液面下,吸取lO mI.樣品消化稀釋液由小玻璃杯流人反應室,並以10 mL水洗滌小燒杯使之流人反應室內,塞緊小玻璃杯的棒狀玻璃塞.將3～10 mL飽和氫氧化鈉溶液倒人小玻璃杯中,提起玻璃塞使其緩緩流入反應室,立即將玻璃塞蓋緊,並加水於小玻璃杯中以防漏氣.加緊螺旋夾,開始蒸餾.蒸汽通人反應室使氨通過冷凝管而進入接收瓶內,蒸餾2～5 min,移動接收瓶,使冷凝管下端離開液面,然後用少量中性水沖洗冷疑管下端外部,再蒸餾1 min取下接收瓶,以0．01 molI．叫或O．05 molL1HCl標准溶液滴定至灰色或藍紫色為終點.同時吸取10 mI_,試劑空白消化液按③操作. 5．計算 6.說明 ①干樣用稱量紙稱重連紙一同消化,空白管同樣放稱量紙消化. ②含糖量高和油脂高的樣品消化時容易溢出,加熱要緩慢. ③氨是否蒸餾完全,可用pH試紙測試餾出液是否為鹼性來判斷. ④實驗前必須仔細檢查蒸餾裝置的各個連接處,保證不漏氣.所用橡皮管、塞子須浸在氫氧化鈉(10％)中,煮沸10 min,然後水洗、水煮,再用水洗. ⑤小心加樣,切勿使樣品沾污凱氏燒瓶口部和頸部.

9. 氨基酸分析法的方法分類

本法系根據氨基酸與異硫氰酸苯酯（PITC）反應，生成有紫外響應的氨基酸衍生物苯氨基硫甲醯氨基酸（PTC-氨基酸），PTC-氨基酸經反相高效液相色譜分離後用紫外檢測，在一定的范圍內其吸光值與氨基酸濃度成正比。本方法的線性濃度范圍為0.025～1.25µmol/ml。
試劑 （1）流動相A 0.1mol/L醋酸鈉溶液(取無水醋酸鈉8.2g，加水900ml溶解，用冰醋酸調pH至6.5，然後加水至1000 ml)-乙腈(93:7)。
（2）流動相B 乙腈－水（8：2）。
對照品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
供試品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（4.6×250mm， 5μm）；流速為每分鍾1.0ml；柱溫為40℃；檢測波長為254nm。各氨基酸峰間的分離度均應大於1.0。洗脫梯度如下： 時間(min) 流動相A（%） 流動相B（%） 0 100 0 14 85 15 29 66 34 30 0 100 37 0 100 37.1 100 0 45 100 0 測定法 精密量取氨基酸對照品溶液200μl，置一2ml塑料離心管中，精密加入1mol/L三乙胺乙腈溶液100μl，混勻，精密加入0.1mol/L異硫氰酸苯酯乙腈溶液100μl，混勻，室溫放置1小時，加0.8ml正己烷，劇烈振搖，放置10min，精密取下層溶液2μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密量取供試品溶液200μl，自「置一2ml塑料離心管中」起同法測定。 本法系根據氨基酸與6－氨基喹啉－N－羥基琥珀醯亞氨基氨基甲酸酯（AQC）反應，生成有紫外與熒光響應的不對稱尿素衍生物（AQC-氨基酸），AQC-氨基酸經反相高效液相色譜後用紫外或熒光檢測，在一定的范圍內其吸光值與氨基酸濃度成正比。本方法的線性濃度范圍為2.5～200nmol/ml。
試劑 （1）流動相A 取醋酸銨10.8g或無水醋酸鈉11.5g，加水900ml溶解，用磷酸調pH至5.0，然後加水至1000 ml。
（2）流動相B 乙腈－水（3：2）。
（3）0.4 mol/L 硼酸鹽緩沖液(pH 8.8) 取硼酸12.36g，加水400ml溶解，用40%氫氧化鈉溶液調pH至8.8，然後加水稀釋至500ml。
(4) AQC溶液 取AQC適量，加乙腈溶解並稀釋製成每1ml中含1mg的溶液。
對照品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
供試品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
色譜條件與系統適用新試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（4.6×250mm， 5μm）；流速為每分鍾1.4ml；柱溫為37℃；檢測波長為248nm。各氨基酸峰間的分離度均應大於1.0。洗脫梯度如下： 時間(min) 流動相A（%） 流動相B（%） 0 88 12 14 88 12 29 80 20 30 59 41 37 59 41 37.1 88 12 45 88 12 測定法 精密量取對照品溶液10μl，置一直徑為0.4cm、高度為5cm的小試管中，精密加入0. 4 mol/L 硼酸鹽緩沖液(pH 8.8) 70μl，在渦旋混勻器上混勻，精密加入AQC溶液20μl，混勻，精密量取5μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密量取供試品溶液10μl，自「置一直徑為0.4cm」起同法測定。 本法系根據一級氨基酸，在巰基試劑存在下，首先與鄰苯二醛（OPA）反應，生成OPA-氨基酸；反應完畢後，加入9-芴甲基氯甲酸甲酯（FMOC），剩餘的二級氨基酸與FMOC繼續反應，生成FMOC-氨基酸，兩次反應生成的氨基酸衍生物經反相高效液相色譜分離後用紫外或熒光檢測，在一定的范圍內其吸光值與氨基酸濃度成正比。本方法的線性濃度范圍為0.025～2.5µmol/ml。
試劑 （1）流動相A 稱取醋酸鈉7.5g，加水4000ml溶解，加三乙胺800μl，四氫呋喃24ml，混勻，用2%醋酸調pH至7.2。
（2）流動相B 稱取醋酸鈉10.88g，加水800ml溶解，用2%醋酸調pH至7.2，加乙腈1400ml，甲醇1800ml，混勻。
（3）0.4 mol/L 硼酸鹽緩沖液(pH 10.4) 取硼酸24.73g，加水800ml溶解，用40%氫氧化鈉溶液調pH至10.4，然後加水稀釋至1000ml。
（4）OPA溶液 取 OPA 80mg，加0.4 mol/L 硼酸鹽緩沖液(pH 10.4) 7ml，加乙腈1ml， 3-巰基丙酸125μl ，混勻 。
（5）FMOC溶液 取FMOC 40mg , 加乙腈8ml溶解。
對照品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
供試品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（4.6×150mm， 5μm）；柱溫為40℃；檢測波長為338nm（一級氨基酸），262nm（二級氨基酸）。各氨基酸峰間的分離度均應大於1.0。洗脫梯度及流速如下： 時間(min) 流動相A（%） 流動相B（%） 流速（ml/min） 0.0 100 0 1.0 17.0 50 50 1.0 45.0 0 100 1.0 45.1 0 100 1.5 50.0 0 100 1.5 50.1 100 0 1.0 53 100 0 1.0 測定法 精密量取對照品溶液50μl，置一1.5ml塑料離心管中， 精密加入0. 4 mol/L 硼酸鹽緩沖液(pH 10.2) 250μl，混勻，精密加OPA衍生劑50μl，混勻，放置30秒，精密加入FMOC衍生劑50μl，混勻，精密量取4μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密量取供試品溶液50μl，自「置一1.5ml塑料離心管中」起同法測定。
附註：1、由於OPA-氨基酸不穩定，因此衍生後應立即進行分離測定。
2、本方法的衍生過程也可由自動進樣器完成。 本法系根據氨基酸與2,4-二硝基氟苯（DNFB）反應，生成有紫外響應的二硝基苯-氨基酸（DNP-氨基酸），DNP-氨基酸經反相高效液相色譜分離後採用紫外檢測，在一定的范圍內其吸光值與氨基酸濃度成正比。本方法的線性響應范圍為30～140 pmol。本法所用的2，4－二硝基氟苯屬易爆、劇毒物質，有強致癌性，且該法對色譜柱要求較高，易損壞色譜柱，衍生試劑水解生成的2，4-二硝基苯易干擾絲氨酸的測定。除另有規定外，一般不宜採用本法。
試劑 （1）流動相A） 0.05mol/L醋酸鈉溶液(取 4.1g無水醋酸鈉，加水800ml溶解，加二甲基甲醯胺10ml，用稀醋酸調pH至6.4，用水稀釋至1000 ml)。
（2）流動相B 流動相A-乙腈（1：1）。
對照品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
供試品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
色譜條件與系統適用新試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（4.6×250mm， 5μm）；流速為每分鍾1.0ml；柱溫為40℃；檢測波長為360nm。各氨基酸峰間的分離度均應大於1.0。洗脫梯度如下： 時間(min) 流動相A（%） 流動相B（%） 0 75 25 6 75 25 6.1 65 35 11 59 41 14 59 41 14.1 50 50 22 45 55 32 10 90 37 10 90 39 75 25 50 75 25 測定法 精密量取氨基酸對照品溶液2ml，置一50ml量瓶中，加0.5mol/L碳酸氫鈉溶液2ml，2，4-二硝基氟苯衍生化試劑（量取2，4－二硝基氟苯1ml ，用乙腈稀釋至100ml）1ml，混勻，在60℃水浴中反應 1小時，取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密量取供試品溶液2ml，自「置一50ml量瓶中」起同法測定。 本法系根據氨基酸經陽離子交換色譜柱分離後，與茚三酮反應，一級氨基酸生成在570nm處具有最大吸收的紫色化合物，二級氨基酸（如脯氨酸）生成在440nm具有最大吸收的黃色化合物，分別在570nm和440nm下檢測上述反應產物，在一定的范圍內其吸光值與氨基酸濃度成正比。本方法的線性響應范圍為20～500 pmol。
試劑 （1）流動相A 取無水檸檬酸鈉1.7g，鹽酸1.5ml，加水溶解並稀釋至100ml，用鹽酸調pH至3.0。
（2）流動相B 取無水檸檬酸鈉1.7g，鹽酸0.7ml，加水溶解並稀釋至100ml，用鹽酸調pH至4.3。
（3）流動相C 取氯化鈉5g，無水檸檬酸鈉1.9g，苯酚0.1g，加水溶解並稀釋至100ml，用鹽酸調pH至6.0。
（4） 色譜柱再生溶液 取氫氧化鈉0.8g，加水溶解並稀釋至100ml，用鹽酸調pH至13。
（5）柱後衍生試劑 取茚三酮18g，茚氮蘭0.7g，加76.7%二甲基亞碸－0.7二水合醋酸鋰－0.1%醋酸溶液900ml使溶解，在氮氣下混合至少3小時。
（6）樣品緩沖液 2%無水檸檬酸鈉-1%鹽酸-0.5%硫代二乙醇－0.1%苯甲酸溶液。
對照品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
供試品溶液 按各品種項下規定的方法制備。
色譜條件與系統適用新試驗 用磺化苯乙烯－二乙烯苯共聚物為填充劑（4.0×120mm， 7.5μm）；流動相流速為每小時14.0ml；柱後衍生試劑得流速為每分鍾7ml，反應器溫度為135℃；檢測波長為440nm(一級氨基酸)，570nm（二級氨基酸）。各氨基酸峰間的分離度均應大於1.0。洗脫梯度如下：開始時用流動相A平衡色譜柱，在25分鍾流動相的組成變為100%流動相B，在37分鍾，流動相組成變為100%流動相C，在75min，最後一個氨基酸被洗脫後，用色譜柱再生溶液再生色譜柱1分鍾。柱溫程序如下：開始時柱溫48℃，11.5分鍾後，以每分鍾3℃的速率升至65℃，約35分鍾後，以每分鍾3℃的速率升至77℃，最後在約52分鍾後，以每分鍾3℃的速率降至77℃。
測定法 精密量取氨基酸對照品溶液適量，注入氨基酸分析儀，記錄色譜圖；另精密量取供試品溶液適量，同法測定。
附註：不同品牌的氨基酸分析儀，應根據儀器的要求，對流動相、色譜柱再生溶液、衍生試劑、緩沖液和洗脫梯度作適當調整。

10. 食品中氨基酸的測定分哪兩類常用分析方法為何各舉一實例

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