廣東膠體金分析儀操作方法

A. 快速檢測所用的膠體金檢測卡在室溫下可重復使用對嗎

不可以。
膠體金快速檢測卡檢測基礎是基於抗原抗體的特異性結合反應。膠體金是由氯金酸在還原劑（如白磷，檸檬酸三鈉）的作用下，聚合成特定大小的金顆粒，並由靜電的作用成為一種穩定的膠體狀態。所以使用了一次之後已經作廢，不能在室溫下重復使用。
膠體金檢測卡的優勢，膠體金快速檢測卡使用方便，不需要儀器設備，對操作人員要求低，適合現場快速檢測或大批量樣品的初步快速篩查，保質期12個月，可長期保存。膠體金檢測卡檢測步驟，取出檢測卡平放於桌面上，用附帶滴管吸取樣品滴樣品孔2滴，3-5分鍾觀察顯色區判定結果。

B. 食品安全現場快速檢測儀器向什麼編寫化方向法

食品快速檢測的主要方法有：(1)試紙法：用試紙直接顯色來定性，根據顯色深淺來半定量。(2)試紙色譜法：用試紙層析顯色定性來作為限量指示，如蘇丹紅、瘦肉精等。(3)比色管比色法：與試劑反應後觀察比色管顏色來定性，根據顏色深淺來半定量，如亞硝酸鹽、甲醇、二氧化硫等，比色定量可以是目視，也可以用攜帶型光度計。(4)滴定法：用裝有標准溶液的滴瓶滴定樣品，根據消耗的滴數來判定被檢物質的含量，如酸鹼、氧化還原性物質等。(5)膠體金檢測卡法：用試紙層析後膠體金顯色來定性。(6)酶聯免疫吸附測定（ELISA)試劑盒法：抗原抗體之間發生特異結合反應，根據顯色深淺來定量分析。(7)攜帶型儀器法：如攜帶型甲醇速測儀、食品安全檢測儀(分光光度計）、ATP熒光檢測儀、酸度計、肉類水分測定儀、電導儀、溫濕度計、中心溫度計、食用油極性測定儀、輻照度計等。(8)其他一些形式的快速檢測方法。

C. 膠體金法檢測顯示的是黑色的還是白色的

膠體金法檢測顯示的是黑色的還是白色的？答：黑色液體就是毛發粉末加上特製葯水。 圓筒狀毛發試紙板 這又是一種試紙板。

D. 胃幽門螺旋桿菌檢測試紙的檢測胃幽門螺旋桿菌有哪些方法

一、膠體金法：。檢測抗原或抗體。抗原標本為糞便，抗體標本為血液、血清、指尖血。優點是方便、快捷、8分鍾可出結果，且不受條件的限制，特別適用與大型體檢，老人，孕婦，兒童等人群，已經逐漸變成主流檢測方法。如上海凱創生物生產的胃幽門螺旋桿菌尿素酶抗體檢測試劑盒
二、呼氣試驗碳13檢測試劑。
檢測須在空腹狀態或者餐後兩小時後進行，患者近一月內未服用抗生素、鉍制劑、質子泵抑制劑等 Hp 敏感葯物，否則會造成檢測結果假陰性。 需配套質譜儀且試劑成本昂貴、檢測耗時長。
三、呼氣試驗碳14檢測試劑。 碳14，不穩定同位素，具放射性，半衰期5769年。多用於考古斷代。應用於人體，可誘發細胞組織癌變。國外早20年即嚴禁醫用。我國國家食品葯品監督管理局也早已發布文件禁用此物進行醫學檢查。比碳13呼氣試驗檢測方便，耗時短。仍在一些中小型醫院使用。
註：碳14檢測對老年、嬰兒、孕婦及胎兒傷害很大。
四、胃粘液試紙
需胃部取材，具有創傷性，給病人帶來很大痛苦。需專業人士操作，容易受其它因素干擾。容易造成假陽性。為目前最少採用方法。但由於試劑成本低廉，仍有部分中小醫院使用。

E. 膠體金加速穩定性顯色降低明顯，怎麼提高其穩定性

膠體金與標記蛋白簡介
同原劑作用由氯金酸（HAuCL4）制備金顆粒直徑0.8-500nm膠體金制備膠體金保存間較4℃保存6月或室溫保存1-2月
膠體金做標記探針同用途選用膠體金直徑范圍同用於免疫快速檢測膠體金顆粒直徑范圍般3-40nm間
膠體金粒表面層AuC12—粒表面帶負電荷金顆粒表麵包層物（蛋白）穩定保護金顆粒維持膠體穩定防止外電解質影響使粒相互凝聚
膠體金粒蛋白吸附作用取決於溶液pH值蛋白氨基酸凈電荷取決於溶液pH值pH=pI蛋白溶液呈性pH=pI蛋白溶解度水化程度更容易吸附疏水金粒表面實際膠體金探針制備般膠體金調整pH=pI+0.5更利於結合更穩定
膠體金探針所用蛋白通三種機制於吸附於金顆粒表面：、金粒所帶負電荷與蛋白部鹼性氨基酸（賴氨酸精氨酸pH均於10）所帶陽性電荷初相互吸引；二、蛋白通某些疏水性氨基酸殘基（包括色氨酸）與金粒表面間疏水吸附作用；三、蛋白半胱氨酸或甲硫氨酸硫基與金粒間電共用共價鍵結合
用於制備膠體金探針蛋白需要進行前處理才能與金顆粒更結合未經處理蛋白質般說均含較高濃度鹽高濃度鹽往往干擾蛋白與膠體金吸附結合或導致膠體金粒凝聚所首先要除蛋白質溶液鹽凍干蛋白或高濃度蛋白溶液蛋白凝聚聚同與膠體金粒結合影響探針靈敏度散蛋白單體蛋白前處理重要項處理標記使其蛋白具適量蛋白量（30kD）形蛋白復合體往往穩定量蛋白與其蛋白（BSA牛血清蛋白等）結合能制備穩定性更佳探針量影響探針靈敏度已知蛋白結構與性前提除性影響結構部提高標記靈敏度
二、免疫膠體金產品原理及應用
膠體金探針用單克隆抗體標記應用免疫層析制快速診斷產品具較高特異性且相穩定性高檢測般5-10min讀結相比其(ELISA需1-2hPCR需要間更)縮短檢測間檢測(組織液、血清、尿液、糞便等)需做非簡單處理或做前處理即進行檢測結顏色變化讀取需要特別儀器設備
免疫膠體金快速檢測試紙利用層析原理、雙抗體夾或免疫競爭或間接應用檢測物質特異性能與其發特異反應抗原或抗體並金顆粒顯色劑達快速檢測目
使用快速檢測產品卡加孔加入待測利用層析原理斷向另端層析隨著層析進行本待測固定於測試線（T線）並顏色變化顯示並照線（即控制線C線）確保檢測效性

F. 膠體金法怎麼用

膠體金與標記蛋白簡介
在不同還原劑的作用下，由氯金酸（HAuCL4）可以制備出金顆粒直徑在0.8-500nm的膠體金。制備好的膠體金保存時間較長，可在4℃保存6個月以上，或在室溫下可保存1-2個月。
膠體金在做為標記探針時，不同用途選用的膠體金的直徑范圍也不同，用於免疫快速檢測的膠體金顆粒直徑范圍一般在3-40nm間。
膠體金粒子表面為一層AuC12—，粒子表面帶有負電荷金顆粒表麵包被一層生物大分子（如蛋白）可以穩定和保護金顆粒，維持膠體的穩定，可防止外來電解質的影響使粒子相互凝聚。
膠體金粒子對蛋白的吸附作用取決於溶液的pH值，這是因為蛋白中氨基酸的凈電荷取決於溶液的pH值，在pH=pI時蛋白溶液呈中性。在pH=pI時蛋白溶解度最小，水化程度最小，更容易吸附到疏水的金粒子表面。但在實際的膠體金探針制備中，一般膠體金調整為pH=pI+0.5，這樣更有利於結合更穩定。
膠體金探針所用的蛋白通過三種機制於吸附於金顆粒的表面：一、金粒子所帶負電荷與蛋白部分鹼性氨基酸（如賴氨酸，精氨酸，pH均大於10）所帶陽性電荷的最初的相互吸引；二、蛋白通過某些疏水性氨基酸殘基（包括色氨酸）與金粒子表面之間的疏水吸附作用；三、蛋白中的半胱氨酸或甲硫氨酸的硫基與金粒子間的電子對的共用以共價鍵結合。
用於制備膠體金探針的蛋白需要進行前處理後才能與金顆粒更好的結合。未經處理的蛋白質一般來說均含有較高濃度的鹽分，而高濃度的鹽分往往干擾蛋白與膠體金的吸附結合，或導致膠體金粒子的凝聚，所以首先要去除蛋白質溶液中的鹽分。凍干蛋白或高濃度蛋白溶液中蛋白分子常凝聚為多聚大分子，可同時與多個膠體金粒子結合，影響探針的靈敏度，分散蛋白分子為單體也是蛋白前處理的重要一項。處理標記的使其蛋白具有適當的分子量，如果蛋白分子量過小（30kD），形成的蛋白復合體往往是不穩定。把分子量過小的蛋白與其它蛋白（如BSA，牛血清蛋白等）結合後，能制備出穩定性更佳的探針。分子量過大時，影響探針的靈敏度，在已知蛋白的結構與活性中心的前提下，去除對活性無影響的結構部分可提高標記的靈敏度。
二、免疫膠體金產品原理及應用
膠體金探針大多用單克隆抗體標記，應用免疫層析法製成快速診斷產品，具有較高的特異性，而且相對穩定性很高。檢測一般在5-10min就可以讀出結果，相比其它方法(如ELISA需1-2h，PCR需要時間更長)大大的縮短了檢測時間。檢測樣(可以是組織液、血清、尿液、糞便等)只需做非常簡單的處理或不做前處理即可進行檢測。結果以顏色的變化讀取，不需要特別儀器設備。
免疫膠體金法快速檢測試紙利用層析原理、雙抗體夾心法或免疫競爭法或間接法，應用被檢測物質的特異性和能與其發生特異反應的抗原或抗體，並以金顆粒為顯色劑達到快速檢測目的。
使用快速檢測產品時，在卡的加樣孔加入待測樣，利用層析原理不斷的向另一端層析，隨著層析的進行，樣本中的待測成分固定於測試線（T線）並以顏色變化顯示，並以對照線（即控制線，C線）確保檢測的有效性。

G. 流感新城疫抗原膠體金試紙的使用方法

  提要：本文主要介紹禽流感新城疫抗原膠體金試紙的使用方法，並就具體操用、判定認知和試紙本身檢測等生產實際中常用的一些問題進行了探討。

  關鍵詞：禽流感新城疫膠體金試紙  操作野毒  疫苗毒  檢測

禽用禽流感新城疫抗原膠體金快速診斷試紙相比於傳統的診斷方法具有很多優點，一經推出便受到了較好的應用。其准確及時的診斷能為疾病的防疫和控制爭取了到寶貴的時間，許多養殖場、種禽場也因此避免了因無法及時確診疾病所帶來的不應有的損失。試紙條的主要優點如下：

1、快速。十幾分鍾就能快速捕捉相關病毒，確定疾病。而酶聯反應法（ELISA法）和基因擴增法（PCR法）則需要幾個小時以上。

2、靈敏。好的產品靈敏度最低值是3×103EID50/ml，而感染禽流感或新城疫的家禽排毒量常在108EID50/ml以上。所以完全可以滿足廣大基層生產和診斷實際需要。

補：通俗地說，一般試紙的靈敏度高於0.25個血凝單位。其中使用的單克隆抗體對不同的毒株會有不同的結合度，比如對於KR1的流感毒株的靈敏度就是0.031個血凝單位，而對於分型的毒株的單克隆抗體，其靈敏度就是0.062個血凝單位。不分型的單抗是針對核衣殼蛋白的，而分型用的單抗則是對於血凝素上的某個位點的。對於野毒來說，大部分的靈敏度仍高於0.25個血凝單位，分型的試紙高於0.5個血凝單位。

有許多朋友問這個東西准不準，實際上它與早孕試紙使用差不多，沒有幾個人懷疑早孕試紙的准確性。這個試紙主要的問題在於研發時的難度比早孕試紙大，使用起來差不多。

3、及時。由於是捕捉病毒，所以不但在疾病前驅期和症狀明顯期能夠測到，在潛伏期排毒時就能檢測。能將診斷疾病的時間大大提前。而抗體測定則要晚幾天到十幾天，才能測到抗體的變化。這對快速發病的高致病力禽流感和強毒株新城疫病來說就太晚了。而且由於禽流感毒株的變異，常使新的毒株能夠避開疫苗產生的抗體的攻擊（免疫逃逸）而使家禽養殖場在疫苗抗體很高很好時遭受巨大的損失，而這一變化在抗體測定上常反映不出來。

4、簡便。攜帶方便操作簡單，田間野外也可進行操作，且不需要專門的儀器。不象ELISA和PCR方法需要價格不菲的儀器、專門的實驗室和專業的培訓。

5、價廉。成本低廉，從幾元到幾十元不等。一棟5000隻的雞舍一般使用一兩條即可。

6、穩定。試紙2～30℃常溫保存一般在一年半以上。好的產品保存期長達兩年以上。

7、面廣。雞、鴨、鵝、鴿、火雞、孔雀、鵪鶉等大部分家禽都能測定。可採集的樣本有氣管液體、腸道內容物、泄殖腔內容物和經處理的臟器組織等。

但是試紙作為新出現的高科技產品在使用過程中，仍有一些需要注意的問題。下面從具體操作、判定及判定認知和試紙本身檢測三個方面就遇到一些問題進行探討，以期達到拋磚引玉的作用。

一、    試紙具體操作上的一些問題

（一）、正常操作步驟

目前一套完整的試紙常分兩種：一種是一條試紙、一個含病毒洗脫液瓶的洗液瓶、一個吸液管、一個棉簽；另一種其它一樣，只是在功能上將洗液瓶和吸液管合並成一個可以做滴液瓶的組合洗液瓶，其瓶蓋上有一個可折的下部中空的小桿，打開後反轉洗液瓶即可做滴管。正常的操作步驟如下：

1、用棉簽在合適的地方（氣管、腸道、泄殖腔等處）取樣。

2、將樣本插到裝有洗脫液瓶中並加以攪拌。蓋好瓶蓋並加以搖晃，使病毒盡量從樣本中釋放到洗脫液中。

3、用吸管吸取上部較清液體，滴到試紙的滴孔處。陸續滴4～5滴。如果是可作滴管的組合洗液瓶，則掰開瓶蓋上的小桿，露出小孔反轉小瓶作滴管用。

4、30分鍾內觀測結果。

（二）具體使用中的一些技巧

1、采樣要求

鑒於家禽排毒量與日齡常呈正相關，日齡越小排毒量相對越少。所以建議六十天以下的小雞剖檢取樣，六十天以上雞可以通過泄殖腔采樣。從已死亡的家禽身上取樣時要注意，氣管采樣不取痰，只在氣管清亮處或病變部位采就行。在十二指腸、小腸中段卵黃蒂周圍取樣時，要用剪子輕刮一下打開的腸道面，在暴露出的腸道淋巴濾泡腫脹、出血和潰瘍的部位取樣就行。

因為試紙本身是捕捉病毒的，所以只取眼觀發病或病死家禽就行，不用象測抗體那樣，按比例隨機抓家禽。試紙初始設計是一條試紙測一隻家禽，實際應用中可以一條試紙測3～5隻家禽的樣本，這樣既擴大采樣量增加了准確率，又能大幅降低使用成本。就是要注意多次使用的棉簽，注意每次采樣後要盡量將含棉球部分沿洗脫液瓶轉著擠一下，讓樣本液盡量多留到洗脫液中，又能使棉球再具一定的吸水力以便再采樣有效。同時要注意多次采樣時，所采樣本不要過於粘稠，這樣不利於金標在試紙上的流動。如果在滴液過程中發現因此原因而致金標流動不暢，可以在試紙滴孔上加一滴未用過的洗脫液助其流動，同時也可用棉簽的另一端在滴孔處輕輕攪幾下助樣本液滲透。

2、加液要求

一般洗脫液要求加滴4～5滴，不要少加或多加。加少了，金標有時會跑不到試紙的未端；加多了，金標會飄浮，也不利於金標的流動。同時要注意試紙條放置要盡量水平。

3、金標流動

要讓金標跑完後再下結論，因為試紙檢測上噴塗有捕捉病毒用的單克隆抗體，其本身在硝酸纖維膜上有個高度，會對流動的金標有個阻擋作用，所以不要在金標流動中下結論。既使紅色的金標液沒有跑完，如有相應的病毒，檢測線上會呈現一條直線。不是金標本身流動中頭部產生的彎月形的曲線。

現在最新一代的金標試紙採用紫金技術，不再有現行紅金技術的紅霧和紅彎曲線的干擾了。請廣大使用者注意技術上的進步情況。

4、病毒量與檢測線顏色的關系

檢測線上的顯示的病毒顏色與病毒的量成正比。色越深病毒越多，色越淺病毒越少。在生產實際中，隨著發病家禽經防疫控制後再整體檢測病毒，如果抗體上升較好，檢測線上的顏色會從最初的較深逐漸變淺，直至消失，即病毒沒有了或低於檢測最低值了。這時家禽整體狀態也會出現很好的恢復。

5、洗脫液與洗液瓶的問題

洗脫液之間配方稍有不同，可以混用，但最好專用。有些獸醫想用生理鹽水來代替洗脫液，這種想法不行。因為生理鹽水洗脫病毒功能較差且沒有洗脫液專有的緩沖系統作用和消泡等作用。

采樣要求用專配的洗瓶瓶和吸管進行。盡量不要用其它代用品，因為已多次發現有的試驗室的器具被病毒污染，盡管多次洗滌和消毒但仍能測到病毒（包括死病毒）的存在，應用這樣器具就會出現不應有的假陽性。

6、試紙保存

試紙要求在2～30℃保存，禁止冷凍。

二、試紙結果判定與判定認知

膠體金試紙盡管操作簡單，但也有個從不熟悉到熟練的過程。而試紙使用中更主要的問題表現在實驗室結果與傳統眼觀和剖檢經驗之間的沖突。這類沖突在認知上的解決和整合對獸醫診療水平的提高具有極大的意義。對於獸醫適應養殖業升級的內在要求也有很大價值。

（一）、初期使用

剛開始使用試紙建議用標准抗原或活疫苗來熟悉和觀察金標如何捕捉病毒並顯色，同時與無病毒對照多次使用直到熟練為至。這種鍛煉一是檢測試紙靈敏度並建立對產品的信心，二是對後面的田間操作是個很好的基礎。

有一部分使用者拿到試紙後直接用於田間測定，結果與通過眼觀和剖檢預判很一致。很快就能進行熟練掌握試紙的使用和相關的判定工作。但另外許多基層獸醫使用者卻沒有這樣幸運，主要問題有以下幾種情況：

1、自己認為是新城疫或禽流感，或者眼觀與剖檢預判「確診」是這些病時，用試紙檢測卻什麼也測不到；而當自己認為只是輕微呼吸道不會是什麼大病時，用試紙卻能測到大量的新城疫病毒或禽流感病毒。

2、再一種情況是，與自己的經驗嚴重不符。自己認為是新城疫，結果測出來是禽流感；或者自己認為是禽流感，卻只能測到新城疫病毒。

如果連續出現幾次這種情況，使用者就會出現兩種認識傾向：一是產品根本不準，二是自己平時的診斷是否有問題，甚至懷疑「平時看的此類病例是不是半數都不對？」從本質上說，膠體金試紙實際上屬於實驗室用產品，出現上述情況是實驗室結果與眼觀和剖檢的經驗之間的沖突。如何解決這些沖突呢？

（二）、引起認識混亂的原因與解決方法

造成前述混亂情況有以下幾種原因：

1、試紙操作不熟練。這可以通過多練習、多對比、多總結來解決。一般獸醫人員經過幾次練習就能熟練掌握操作要領。

2、所采樣本不合適，沒有抓到發病家禽或排毒家禽。這可以通過多抓幾只家禽和多測幾次來減少失誤率。畢竟給家禽看病，是通過幾個個體的檢測來給群體定病的。

3、至於「自己」通過眼觀和剖檢所「確診」的疾病，而試紙檢測結果與「確診」內容不符的情況。首先，確診疾病是用實驗室手段如病毒捕捉、基因測定、病毒分離等手段來驗證，而不是反過來，眼觀或剖檢叫「確診」。這也是一些「好獸醫」心理深處不願接受的。但這一關過不了。高新產品反而會成為這些獸醫斷病的一個障礙。

造成此種情況的另一個原因就是，眼見病症明顯或家禽處於疾病轉歸期時，排毒量反而很少或不排毒了，盡管是禽流感或新城疫引起的，但卻可能檢測不到病毒。一般患症家禽是在疾病的潛伏期、前驅期和證狀明顯期三個階段排毒較多，過了這些階段的家禽排毒反而少了。另外一個情況就是目前家禽都大量做新城疫和禽流感疫苗，其產生的抗體對病毒的繁殖也會有程度不同的抑製作用。但這些可能通過多采患病家禽樣本多用幾條試紙檢測來解決。

還有一個深層次的原因，就是養殖戶認為「拿葯出錢檢測免費」，而獸醫門市也不願多貼錢。雙方都不願為確診疾病而投入，這就導致實際操作中也不多病例采樣本也不搞多次檢測，使得檢測沒有深入進行。這種「重治不重防」的情況在種禽場也大量存在。這也說明我們疾病控制從「重治」轉化「重防」不光是資金問題，還有深層次上心理認識和觀念認識上的問題。

（三）、解決相關判定認知的意義

我國家禽養殖場已經越過生產與消費正反饋相互促進增長的階段，進入相對飽和的狀態。當前家禽業特別是肉雞和蛋雞養殖業已進入「祖代種雞多、父母代種雞多、商品代雞多、消費量反而減少」的「三多一少」階段，家禽養殖業就要擺脫「小規模大群體」進入「小群體大規模」的升級狀態，其對獸醫的要求也要大大提高。光憑眼觀看病或「一把剪子闖天下」的時代就要結束了，所以積極引進膠體金試紙等新技術提高診療水平也是獸醫和養殖場技術工作者的一個內在需求了。這也是下一步更激烈競爭的一個重要要求。

（四）、一些數據和問題

從使用試紙檢測統計上的數據來看，在近幾年檢測到的近5000例新城疫與禽流感病例中，70%是新城疫、25%是禽流感H9、5%是禽流感H5。其中極少一部分是禽流感與新城疫混合感染。當然在某一階段某一種疾病可能佔主要數量。

由於家禽大量應用疫苗，就是發現新城疫和禽流感野毒也不一定嚴重發病，而且在一些抗體正常的種禽場或養殖場仍能檢測到新城疫野毒和禽流感野毒的存在。變異病毒一旦出現免疫逃逸常會使養殖業造成極大的損失。

一些養殖場常在感染禽流感時習慣性地做新城疫疫苗，往往造成較大損失。也有一些門診獸醫將禽流感當新城疫「治」，讓養殖戶打Ⅰ系苗，結果造成大量死亡，引起較大的「醫患糾紛」。

在實際檢測中發現，禽流感無論是H9還是H5，與新城疫混合感染時，（在防止針頭傳播的前提下）做新城疫苗者均有較大損失。建議做二者的滅活苗。

還有一個發現就是，能在有的種雞場種雞發病時所用種蛋的孵化死胚中測到H5病毒和新城疫病毒，說明最少在種禽發生新城疫和禽流感時應停用種蛋，新城疫與禽流感能否垂直傳播還要待科研人員研究。

（五）、關於野毒與疫苗毒的問題

試紙本身並不能分出野毒和疫苗毒。但我國目前只有注射用的禽流感油乳劑滅活苗，且這些滅活的病毒不會出現在試紙樣本採集的氣管和腸道部位。所以只要試紙檢測到病毒，它就是野毒。

我國的實驗室曾研發成功禽流感新城疫基因重組苗。這個病毒是在新城疫病毒上表達一個H5血疑素蛋白，所以在試紙測量中，能測到新城疫病毒，通用型禽流感試紙測不到禽流感病毒，但禽流感H5試紙會檢測到H5病毒（實際上是捕獲了新城疫病毒上的禽流感H5的血疑素）。不過這一疫苗未在市場上流通。

新城疫油苗也不會被試紙檢測到。但在活疫苗免疫後一周內，有可能測到疫苗毒。如果家禽群免疫應答正常時，一周後於測到疫苗毒的概率就大大降低了。但有一點還可以來幫助鑒別疫苗毒和野毒。一般情況下，疫苗毒不會引起家禽群出現大批發病情況。也就是疫苗毒不會出現眼觀症狀和剖檢病變。從做苗時間、試紙測量和眼觀剖檢情況綜合考慮也不難做出正確的判斷。

            三、試紙本身的檢測

試紙的靈敏度可以用標准抗原來測定，其中新城疫試紙還可以用活疫苗來檢測。當然，試紙也能測量疫苗有沒有病毒、病毒的大致含量。試紙不能直接檢測油乳劑滅活苗，經處理去油後的滅活尿囊液是可以測定的。

H. 抗體檢測怎麼檢測（核酸、抗原、抗體檢測）

自 2020 年新冠疫情爆發以來，「核酸檢測」作為一項檢測是否感染的重要指標，開始反復出現在我們的生活中。2022 年 3 月 10 日，國務院應對新型冠狀病毒肺炎疫情聯防聯控機制綜合組發布通知，決定推進「抗原篩查、核酸診斷」的檢測模式，在核酸檢測基礎上增加抗原檢測作為補充。

抗原檢測是什麼？和其他的檢測手段有什麼不同？這篇文章，我們以新型冠狀病毒為例，講講常見的快速篩查手段，聊聊相關的原理以及適用范圍。

當我們做篩查時，能查的究竟有什麼

想要對一種疾病或是一種物質進行篩查，我們首先要弄清楚的就是「從何下手」的問題，其次是「如何檢測」，讓微觀世界的變化反映到我們眼前，幫助我們作出判斷。

從何下手

我們面對的是病毒。根據大家耳熟能詳的中學生物課知識，病毒是一類由遺傳物質和蛋白質外殼組成的類生命體 。如果想對病毒的感染情況進行探測，就需要從它的組分下手。接下來的內容，希望大家帶著自己中學的生物知識閱讀。

以目前正在困擾我們的 SARS-CoV-2 為例。它屬於冠狀病毒科下，冠狀病毒亞科的乙型冠狀病毒屬，是已知的第七種能夠感染人類的冠狀病毒。所有的冠狀病毒都是具有 包膜 的 正義單鏈 RNA 病毒 ，也就是說，它們的遺傳物質是一條單獨的 RNA 鏈，並且這條 RNA 鏈可以直接作為 mRNA（信使 RNA）參與翻譯，指導蛋白質的合成。

編號為NPRC 2020.00002的毒種，圖片由國家病原微生物資源庫（中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所）提供。

我們現在的目的是檢測標本中是否存在這種病毒，無論是檢測它本身，還是檢測病毒帶來的產物，能夠下手的方向也就是兩種：蛋白質外殼（包膜）、遺傳物質。

如何檢測

順著這個邏輯，那最顯而易見的方法就是檢查它「能不能看到」，但病毒本體小得很，SARS-CoV-2 的直徑在 80-120 nm，要想每個標本都拿電鏡過一遍是不現實的，人力物力和財力都撐不住。那麼更經濟實惠的方法，就是通過某些措施，讓 病毒的組分 ，或是因為病毒而出現的 某些特殊物質 積攢到一定數量級後發光、變色，出現 宏觀表現 。

那麼我們的問題就轉化成了，選擇一種可以觀察到宏觀尺度變化的方法，和病毒的組分、病毒引發的某種物質產生關聯。我們能選擇的物質也擺在檯面上：病毒的遺傳物質，在這里是它的 RNA；病毒的包膜，也就是蛋白質外殼；以及，如果你還記得一些基礎的生物知識，人體的免疫系統會在感染病毒之後產生抗體以抵抗入侵，它也是不錯的選材。

我們目前採用的幾種檢測方式，也就從這些物質（以及它們的相關物質）脫胎而來，分別為針對遺傳物質的核酸檢測，針對包膜的抗原檢測，以及針對抗體的血清抗體檢測。

核酸檢測

作為病毒的遺傳物質，核酸序列載寫了能夠鑒定病毒為某一特定種的基因特徵，因此核酸陽性，也就意味著病毒在體內存在過。

我們目前進行的「核酸檢測」其實分為兩個部分。平常我們進行的「捅鼻子」「捅嗓子」取樣和後續的定性是第一部分。在取得標本之後，因為病毒量太少，樣本會在實驗室中進行一定次數的擴增，並根據熒光反應結果來判定陽性陰性。

第二部分，確定為陽性的樣本，還需要通過基因測序，確定樣本病毒的分型，以便溯源。這一步已經不屬於日常篩查的范疇，但在流行病學調查上具有重大意義，如果有興趣了解，可以參看 Wikipedia 簡要了解。

我們平常參與的作為 篩查 工具的核酸檢測，指的就是採集到定性的第一部分。

在感染了 SARS-CoV-2 之後，咽拭子、痰、下呼吸道分泌物、血液等標本中均可發現病毒核酸。不同部分標本核酸檢測的陽性率有一定差異，隨著病程進展，各個部位的檢出率也會發生變化。

我們習慣稱呼的「鼻拭子」與「咽拭子」，其實都是採集咽腔後壁的分泌物與組織，前者採集鼻咽，後者採集口咽。也有採用其他標準的，比如唾液等亦可作為檢測標本，本質上也是不同地區規定有差異

鼻（咽）拭子與（口）咽拭子已經是綜合了陽性率與便利程度的考量。糞便和尿液等其實也可以作為標本採集的對象。而且根據一項對 31 例患者的研究，肛拭子的准確率要高於鼻咽與口咽采樣，尤其病程後期，肛拭子確診病例的鼻拭子陽性率不到 30%。 4 但顯然，由於操作的限制，它無法作為早期篩查的首選手段。

接下來的工作，就是從獲取的那一點點標本中提取核酸。由於樣本中病毒的數量級很小，不足以拿來分析，還需要將其擴增並標記。需要用到的同樣是高中學過的知識：聚合酶鏈式反應（PCR）——這一步看起來麻煩，但由於它的原理和工序已經研究成熟，實際操作中只需要加好試劑送機器，整個核酸檢測的過程里最麻煩的還是讓待測者安安分分弄來標本（笑）。

各地疾控機構或檢測中心會采購合適的核酸 提取試劑盒 與核酸 檢測試劑盒 。提取試劑盒負責將 RNA 從混雜的樣本（細胞碎屑、分泌物、灰塵等雜質）中提取出來，常見的有磁珠法、離心柱法和釋放劑法，不同提取方法可能對後期檢測的准確度略有影響 。之後，提純出的 RNA 就會移交給檢測試劑盒（也有一些試劑盒將兩者合一），進行之後的工序。

檢測試劑盒帶著樣本在機器中進行的過程，就是這個檢測中最主要的反應：RT-qPCR（實時定量逆轉錄聚合酶鏈反應）。

接下來需要你撿起高中生物的知識。一般的 PCR 反應有以下幾步：

加熱：讓雙鏈 DNA 解旋變形，成為兩條單鏈； 退火：讓混合的單鏈 DNA 與根據需要復制的片段而設計好的引物結合； 延伸：調整溫度，讓 DNA 聚合酶順著引物開始工作，復制出新鏈，形成新的雙鏈。

在對病毒的探測中，我們要做的工作也無非上面幾步，只是需要多出兩樣東西：

在第一次反應之前，使用 逆轉錄酶 （依賴 RNA 的 DNA 聚合酶），合成病毒單鏈 RNA 的互補鏈，組合成 cDNA ； 在退火與延伸的階段，除了引物和所需的酶外，還需要 TaqMan 探針 。

你可以把 TaqMan 探針這樣理解：它的主體部分是一段寡核苷酸鏈，被設計成能和一小部分需要復制的基因片段配對成雙鏈的樣子；它一端接了一個熒光分子，另一端接了一個開關（淬滅基團），兩者和探針相連時，熒光就會被淬滅基團壓制，探測不到。退火時，這個探針會和引物一起結合在要復制的單鏈片段上。在延伸的過程中，DNA 聚合酶會把擋在面前的障礙物切碎，其中就包括這段探針，淬滅基團和熒光分子就這樣分離，熒光就表現出來。

隨著循環數的增多，擴增的 DNA 片段和熒光也越來越多。對比每個循環的熒光亮度和前若干次循環的基準亮度，我們就能得出目前的 DNA 片段量，也可以直接用循環數和熒光亮度做定性的判斷。

那麼具體復制哪一部分呢？既然要探測病毒，那我們就選取最有代表性的核酸片段。現行的標准中，ORF 基因與 N 基因是常用的檢測位點。

檢測試劑盒負責的就是將提取出的 RNA（樣本）投入後，根據試劑盒上的程序說明，設定對應的 PCR 溫度與時長，由機器控制完成擴增過程，在固定的環節收集熒光信號，記錄對應的循環數（Ct 值）。判斷陰性陽性 / 是否還具有傳染力的標准，就是看熒光信號達到閾值時，目前循環數是多少。根據目前現行的《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第九版）》，解除隔離管理的標准為 Ct 值 ≥ 35 。和此前通行的 ≥40 標准相比，出院與解除隔離的時間會大大縮短 。

免疫測定

經 RT-PCR 的核酸檢測到現在都是確診的金標准，因為它在方法學的角度看來，（理論上）可以做到 100% 准確。但核酸檢測耗時長、對環境與操作人員要求高，在環境條件達不到標准、物資與儀器不齊全等情況下，大批量的核酸檢測會帶來巨大人力與財力消耗。

在本次疫情中，我們採用的免疫測定包括了快速抗原檢測與抗體檢測，它以 抗原-抗體反應 為基本原理，旨在通過抗原與抗體快速的中和效應，以較少的時間成本探測樣本中是否存在待測物。兩者都屬於免疫層析法的范疇。

以盒裝方式出現、可以自行操作的抗原檢測就很適合作為物資不足、自我測定等情況下的補充。

抗原檢測

核酸檢測檢查的是病毒的（標志性）遺傳物質，是病毒的「內里」。那麼（快速）抗原檢測檢查的就是病毒的「外在」，直接檢查完整的病毒顆粒。目前通過審批的抗原檢測試劑盒包括三種類型：膠體金法、乳膠法、熒光免疫層析法。三者內在原理一致。但其中熒光免疫層析法試劑盒仍然需要專用的檢測儀或紫外線手電筒，不適合家庭自測；膠體金法和乳膠法則都是將檢查結果轉化成肉眼可見的條帶，差別在於用於標記上色的物質不同。

當然，抗原檢測自然有它的劣勢在，它的 假陰性率 （是陽性但顯示陰性）要更高，可能導致漏檢錯檢。但放在一杯茶就能出結果的時間優勢面前，准確性上的差距在某些特定情況下可以暫時讓步。

圖源：How the SARS-CoV-2 EUA Antigen Tests Work | ASM.org

和核酸檢測相比，抗原檢測增加了「鼻拭子」這一采樣途徑，降低了個人自測的難度。拭子上的樣本在緩沖液中洗脫，取液體滴加在加樣孔後，液體會因為毛細作用，帶著潛在的抗原，經過一片預載了抗體的區域（結合墊，conjugate pad）。

這片區域上的抗體，是抗目標抗原（SARS-CoV-2）的單克隆抗體，每一個抗體分子都和特別的標記結合，它們與樣本中的抗原發生反應，形成抗原-抗體復合物，並隨著毛細作用向下一條帶流去。

緊接著經過的是檢測線（T 線，test line），在檢測線上附著的同樣是抗目標抗原的單克隆抗體，你可以理解成這里的東西和結合墊上的一樣，只是沒帶標記。此時，如果受測者已經感染了 SARS-CoV-2，他留在樣本中的抗原形成的抗原-抗體復合物，會在此處與固定在線上的抗體再次結合。在這里，這些帶著標記的復合物不斷沉積，最終會顯示出一條或深或淺的條帶。條帶的顏色來源，就是之前結合墊上的抗體分子附著的標記，在膠體金法中是膠體狀態的金顆粒，在乳膠法中是上色的乳膠滴，在熒光法中是熒光分子。所以你在使用這類試紙時，會發現剛剛加樣結束，液體剛開始擴散的時候，擴散的最前端會有一點點很淡的顏色不斷推移，這就是還沒有固定沉積的標記的顏色。

接下來，液體繼續擴散，經過質控線（C 線，control line），在質控線上附著的是另一種抗體——『抗「抗目標抗原的單克隆 抗體 」 的 單克隆 抗體 』，簡稱「 二抗 」。這種新的抗體是讓上一種抗體在另一種動物的免疫系統中反應得來的，比如結合墊的抗體來自兔，那這里的抗體就來自羊，是羊抗兔的單克隆抗體。也就是說， 二抗的抗原是 之前在 結合墊上的抗體 。這條線就是為了檢測液體有沒有正常擴散、結合墊上的抗體有沒有失效等等而存在的。此時，液體中剩餘的大量來自結合墊的抗體就會作為抗原，與質控線上的二抗發生抗原抗體反應，形成復合物，顯出一條明顯的條帶。

由於結合墊上的抗體非常充裕，這條質控線條帶會出現得非常快、非常顯色，而檢測線由於抗原（病毒）數量不一定，顯色速度會有差別，但一般在 15 分鍾內就足夠判斷結果。所以不要看 C 線很明顯，T 線隱隱約約就覺得「沒事了」， T 線不管深淺，只要有，就是陽性 。

具體操作方面，可以參考醫政醫管局發布的 教學視頻。目前國家也在逐步推廣抗原自測試劑盒，在一定程度上可以減輕未來醫療與街道的壓力。

血清抗體檢測

除了前兩種檢測手段外，還有一種使用不太多，但同樣重要的檢測方法，就是同屬免疫測定方法的「血清抗體檢測」。

抗體檢測採用的試劑盒與抗原檢測非常接近，但標本的限制更大——由於檢測的對象變成了抗體，標本就必須是明確有抗體存在的血液（或血漿、血清）。而且人體在初次感染病毒後，並不會第一時間內產生抗體。抗體能夠明確達到被檢測的數量級，一般是在初次感染（或接種疫苗）的一到兩周之後。這些條件限制了抗體檢測不能作為確診性質的檢查。目前，血清抗體檢測僅作為一定情況下檢查疫苗是否生效，或查驗受測者近期是否感染過新冠病毒的方法。

在人體中有五種抗體，分別是 IgA、IgD、IgE、IgG 和 IgM。IgA 主要負責黏膜免疫。IgD 與免疫反應激活有關。IgE 抵禦寄生蟲，同時也參與過敏反應。剩下的 IgG 與 IgM 就是對抗病原體的過程中，免疫系統派出的主力軍。

SARS-CoV-2 作為病原體，人體經刺激主要分泌的就是 IgG 與 IgM 兩種。現有的抗體檢測試劑盒，主要也是針對人體對 SARS-CoV-2 的 N 蛋白（核衣殼蛋白）或 S 蛋白（刺突蛋白）產生的 IgG 與 IgM。

抗體試劑盒的檢測裝置外觀和抗原檢測別無二致。二者的差別就是上文中提到的結合墊、檢測線、質控線上附著的物質。

這次，加樣孔中滴入的樣本可能有對 SARS-CoV-2 的抗體。因此，結合墊上就應當是帶了標記物的抗原——當然不可能放活病毒上來。一般這里使用的都是設計檢測的抗原蛋白，比如前文提到的 N 蛋白或 S 蛋白，或是重組病毒，無論是哪種，它都必須包含受體結合域（RBD）作為抗體結合的靶點。在檢測線上，附著的就是抗 IgM 或抗 IgG 抗體，以捕獲結合了抗原的抗體蛋白。最後，質控線上附著抗原的特異性抗體，捕獲剩餘的游離抗原。

小結

總的說來，三種檢測方式針對的是不同的需求，互有優勢，互相補充。核酸檢測作為金標准，直接查驗病毒的 RNA，負責看被檢者帶不帶病毒；抗原檢測作為快速檢測方法，查的是病毒的蛋白質，但准確度不如核酸檢測，對傳染力強的感染者更有效；抗體檢測查的是疫苗有沒有生效、人近期有沒有感染過病毒。

近期，新冠疫情在各地卷土重來。Omicron 變種與此前流行的 Delta 變種相比，雖然病死率與重症率明顯下降，但潛伏期更短，病毒復制速度更快，傳染力明顯增強。希望大家在這樣的環境中保持健康。

I. 膠體金試紙條的測試原理是什麼

膠體金是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，並由於靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，形成帶負電的疏水膠溶液，由於靜電作用而成為穩定的膠體狀態，故稱膠體金。膠體金在弱鹼環境下帶負電荷，可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合，由於這種結合是靜電結合，所以不影響蛋白質的生物特性。

膠體金除了與蛋白質結合以外，還可以與許多其它生物大分子結合，如SPA、PHA、ConA等。根據膠體金的一些物理性狀，如高電子密度、顆粒大小、形狀及顏色反應，加上結合物的免疫和生物學特性，因而使膠體金廣泛地應用於免疫學、組織學、病理學和細胞生物學等領域。

膠體金標記，實質上是蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機理可能是膠體金顆粒表面負電荷，與蛋白質的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合。用還原法可以方便地從氯金酸制備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。

這種球形的粒子對蛋白質有很強的吸附功能，可以與葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非共價結合，因而在基礎研究和臨床實驗中成為非常有用的工具。

(9)廣東膠體金分析儀操作方法擴展閱讀

常用的免疫膠體金檢測技術：

（1）免疫膠體金光鏡染色法 細胞懸液塗片或組織切片，可用膠體金標記的抗體進行染色，也可在膠體金標記的基礎上，以銀顯影液增強標記，使被還原的銀原子沉積於已標記的金顆粒表面，可明顯增強膠體金標記的敏感性。

（2）免疫膠體金電鏡染色法 可用膠體金標記的抗體或抗抗體與負染病毒樣本或組織超薄切片結合，然後進行負染。可用於病毒形態的觀察和病毒檢測。

（3）斑點免疫金滲濾法 應用微孔濾膜（如膜）作載體，先將抗原或抗體點於膜上，封閉後加待檢樣本，洗滌後用膠體金標記的抗體檢測相應的抗原或抗體。

（4）膠體金免疫層析法 將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結合墊上，當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上後，通過毛細作用向前移動，溶解結合墊上的膠體金標記試劑後相互反應；

當移動至固定的抗原或抗體的區域時，待檢物與金標試劑的結合物又與之發生特異性結合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結果。該法現已發展成為診斷試紙條，使用十分方便。

乳膠法和膠體金法的區別

1、原理不同：

普通聚苯乙烯乳膠和抗體的結合是無選擇性的物理靜電吸附，抗體很難結合到乳膠表面，即使致敏上的抗體也容易從乳膠微球上脫落或者變性失活，而使用多肽縮合劑或交聯劑則操作過程繁瑣、耗時。

膠體金法是由氯金酸(HAuCl4)在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，並由於靜電作用成為一種穩定的膠體狀態，形成帶負電的疏水膠溶液，由於靜電作用而成為穩定的膠體狀態，故稱膠體金。

2、應用不同：

膠體金也是免疫電鏡技術中較為理想的免疫標記物。膠體金技術具有方便快捷、特異敏感、穩定性強、不需要特殊設備和試劑、結果判斷直觀等優點, 因而特別適合於廣大基層檢驗人員以及大批量檢測和大面積普查等, 具有巨大的發展潛力和廣闊的應用前景。

乳膠凝集法具有獨特優點: 不需要特殊儀器、肉眼判斷、操作簡便、不需要專門培訓；檢測時間短，一般為 2 min；價格低廉，檢測單份血清樣品的成本比其它血清學和病原學方法低得多；適於現場檢測等，在臨床檢驗中被廣泛應用。