1. 流式細胞術分析細胞因子，結果圖分析，四個區域如何分析分別代表什麼
這種四個象限的圖，一般都是看兩種染色的關系（橫坐標和縱坐標）。
左下象限，是兩種目標抗原都沒有表達（染色陰性）。右上象限，是兩種都有表達（雙陽性）。
而左上象限則是縱坐標的那個抗原有表達（單陽性），但是橫坐標那個沒有表達（陰性）
右下象限是橫坐標那個抗原有表達（單陽性），但縱坐標那個沒有表達
這個圖沒有貼出來的是做實驗時候的陰性對照（全部在左下象限），這樣才能原來設置象限的位置。還有做代償的對照（compensation control），是設置機器，排除假陽性用的。
2. 細胞活性和細胞毒性檢測的實驗方法
細胞數量確定
1.將細胞懸浮液（100μL/孔）接種在96洞孔板中。將板在潮濕的培養箱中預孵育（例如，在37℃，5％CO2下）。
2.向板的每個孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入氣泡，因為它們會干擾O.D.讀數。
3.將培養板在培養箱中孵育1-4小時。
4.使用酶標儀測量450 nm處的吸光度。
細胞增殖和細胞毒性測定
1.將種子細胞以103-104個細胞/孔的密度在96孔板中在100μL培養基中培養。將細胞在CO2培養箱中於37℃培養24小時。
2.將不同濃度的待測物質加入板中。
3.將培養板在培養箱中孵育適當的時間（例如，6,12,24或48小時）。
4.使用重復移液器向板的每個孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入氣泡，因為它們會干擾O.D.讀數。
5.將培養板在培養箱中孵育1-4小時。
6.在讀取孔板之前，重要的是在軌道振動器上輕輕混合1分鍾，以確保顏色均勻分布。
7.使用酶標儀測量450 nm處的吸光度。
數據分析
統計分析有幾種方法，您可以選擇使用O.D.值或細胞數量，我們提供其中一種方法。
細胞存活率（％）= [（As-Ab）/（Ac-Ab）]×100
抑制率（％）= [（Ac-As）/（Ac-Ab）]×100
As =實驗孔吸光度（含有細胞，培養基，CCK-8和待測化合物的孔的吸光度）。
Ab =空白孔吸光度（含有培養基和CCK-8的孔的吸光度）。
Ac =對照孔吸光度（含有細胞，培養基和CCK-8的孔的吸光度）。
製作標准曲線
1. 細胞計數板計數細胞懸液中的細胞數。
2. 使用培養基，等比稀釋細胞懸液為一個濃度梯度，通常需要5-7個濃度梯度，每組幾個復孔。然後接種細胞。（注意每孔的細胞數量。如果您將細胞懸液稀釋在管中，在加入培養板的孔之前，請小心再次混勻細胞。每孔中細胞懸液的體積應該是一致的。）
3. 培養直至細胞貼壁（通常2-4小時），然後每100 μl培養基加入10 μl CCK-8。繼續孵育1-4小時，用酶標儀測量450nm處的吸光度。製作出一條以細胞數為X軸坐標，O.D.值為Y軸坐標的標准曲線。
可以基於該曲線確定待測樣品的細胞數。使用此標准曲線的先決條件是培養檢測條件相同。
注意事項
1. 確保葯物和CCK8均勻分布在培養基中。
2. 細胞增殖越多, 顏色越深; 細胞毒性越強，顏色越淺。
3. 對於貼壁細胞，每孔至少需要1000個細胞（100 μl培養基）。對於白細胞，由於靈敏度較低，每孔至少需要2500個細胞（100 μl培養基）。推薦的96孔板每孔最大細胞數為25000。如果使用24孔或6孔板進行該檢測，請計算相應的每孔的細胞數，並調整CCK-8的體積，使其為每孔總液體體積的10％。
4. 因為CCK8測定是基於活細胞中的脫氫酶活性，影響脫氫酶活性的條件或化學物質可能導致實際活細胞數與使用CCK-8測定活細胞數之間有差異。
5. WST-8可能與還原劑反應生成WST-8 formazan。如果使用還原劑 (例如一些抗氧化劑)會干擾檢測。如果待檢測體系中存在較多的還原劑，需設法去除。
6. 孵育2小時後，背景O.D.值一般為0.1-0.2單位。
7. 注意不要在孔中引入氣泡，因為它們會干擾O.D.值。
8. 如果您想對CCK8溶液進行滅菌，請使用0.2 μm的膜過濾溶液。
9. 孵育時間因孔中細胞的類型和數量而異。通常，白細胞著色較弱，因此可能需要較長的孵育時間（長達4小時）或大量細胞（~105細胞/孔）。
10. 如果細胞懸液中存在高濁度, 測量並減去樣品在600nm或更高波長的O.D值。
11. CCK8不能用於細胞染色。
12. 培養基中的酚紅不會影響實驗結果，酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。
13. CCK8的毒性非常低，在CCK8測定完成後，相同的細胞可用於其他細胞增殖測定，例如結晶紫測定，中性紅測定或DNA熒光測定。（除非細胞極為稀少，不推薦。）
14. 該試劑盒可用於大腸桿菌，但不能用於酵母細胞。
15. 在讀取平板之前，您可以在搖床上輕柔混勻。
16. 我們建議將細胞接種在靠近培養板中央的孔中，最外圍一圈孔中的培養基容易蒸發，可以用PBS，水或培養基填充這些孔。
17. 如果您沒有450nm濾光片。您也可以使用吸光度在430和490nm之間的濾光片, 450nm濾光片具有最佳靈敏度。
18. 測量450nm處的吸光度，如果您需要進行雙波長測定，作為參考波長可以測定650nm處的吸光度。
19. 葯物中金屬離子的存在可能會影響CCK8的靈敏度。終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制 5%、15%、 90% 的顯色反應，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話，將會100%抑制。
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推薦測試劑 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)
3. hochest33258法檢測細胞凋亡該怎麼分析
實驗方法
Hoechst-PI染色法檢測細胞凋亡
亞「G1 」峰方法簡便，但只是代表G0 /G1 期發生凋亡的細胞，S期和G2 期細胞凋亡發生於G1 峰後，無法觀察。此外，由於全部細胞均經固定，因此不能區別死細胞和活細胞。Hoechst-PI染色則可彌補上述不足。Hoechst 33258 可被活細胞攝取，與DNA結合在紫外光下呈藍色熒光。繼而PI使死細胞著染產生紅色熒光。因此在細胞二維直方圖上根據紅藍兩種熒光可分辨三種細胞：正常活細胞對染料有拒染性，藍色和紅色熒光均較少；凋亡細胞有膜通透性改變，主要攝取Hoechst染料，表現為強藍色熒光，弱紅色熒光；壞死細胞由於有很強的PI嗜染性並可覆蓋Hoechest染色，故呈弱藍色強紅色熒光。
【材料及試劑】
（1）碘化丙啶（PI）貯存液：100mg/ml，4℃避光保存。
（2）Hoechst 33258貯存液：100mg/ml，4℃避光保存。
（3）0.01mol/L PBS pH 7.0~7.2
【操作步驟】
（1）常規制備單細胞懸液；
（2）加入Hoechst 33258 溶液，使其終濃度為1mg/ml，37 ℃水溶，7分鍾；
（3）冰上冷卻， 離心棄染液， PBS重懸；
（4）加入PI染液，使其終濃度為5mg/ml，冰浴；
（5）離心棄染液，PBS洗一次，進行流式細胞儀進行分析，、直外激光檢測記錄400~500nm處藍色熒光和大於630nm處紅色熒光；
【結果判斷】
正常對照細胞呈弱藍色及弱紅色熒光；凋亡細胞呈藍色及弱紅色熒光，壞死細胞呈強紅色及弱藍色。
4. 怎麼對葯物與細胞作用實驗中mtt結果進行統計學分析
⒈選擇適當的細胞接種濃度。一般情況下，96孔培養板的一內貼壁細胞長滿時約有105個細胞。但由於不同細胞貼壁後面積差異很大，因此，在進行MTT試驗前，要進行預實驗檢測其貼壁率、倍增時間以及不同接種細胞數條件下的生長曲線，確定試驗中每孔的接種細胞數和培養時間，以保證培養終止致細胞過滿。這樣，才能保證MTT結晶形成數量與細胞數呈的線性關系。否則細胞數太多敏感性降低，太少觀察不到差異。
⒉葯物濃度的設定。一定要多看文獻，參考別人的結果再定個比較大的范圍先初篩。根據自己初篩的結果縮小濃度和時間范圍再細篩。切記！否則，可能你用的時間和濃度根本不是葯物的有效濃度和時間。
⒊
時間點的設定。在不同時間點的測定OD值，輸入excel表，最後得到不同時間點的抑制率變化情況，畫出變化的曲線，曲線什麼時候變得平坦了（到了平台期）那個時間點應該就是最好的時間點（因為這個時候的細胞增殖抑製表現的最明顯）。
⒋培養時間。200ul的培養液對於10的4～5次方的增殖期細胞來說，很難維持68h，如果營養不夠的話，細胞會由增殖期漸漸趨向G0期而趨於靜止，影響結果，我們是在48h換液的。
⒌MTT法只能測定細胞相對數和相對活力，不能測定細胞絕對數。做MTT時，盡量無菌操作，因為細菌也可以導致MTT比色OD值的升高。
⒍理論未必都是對的。要根據自己的實際情況調整。
⒎實驗時應設置調零孔，對照孔，加葯孔。調零孔加培養基、MTT、二甲基亞碸。對照孔和加葯孔都要加細胞、培養液、MTT、二甲基亞碸，不同的是對照孔加溶解葯物的介質，而加葯組加入不同濃度的葯物。
⒏避免血清干擾。用含15%胎牛血清培養液培養細胞時，高的血清物質會影響試驗孔的光吸收值。由於試驗本底增加，會試驗敏感性。因此，一般選小於10%胎牛血清的培養液進行。在呈色後，盡量吸凈培養孔內殘余培養液。
MTT
溶液的配製方法
5. 攝取實驗需要根據細胞在每個孔內的量的多少來分析其對葯物的攝取情況
博凌科為解答：細胞總蛋白質含量測定廣泛用於細胞生長實驗以及用作表示酶，受體及細胞外代謝產物特異性活性的度量單位，蛋白質含量測定最常用的方法是Lowry's法和 考馬斯亮藍測定法，後者比前者更敏感，細胞用量少，50-10000個細胞即可。具體方法請查閱司徒鎮強編寫的細胞培養P188-189。
6. 流式細胞術結果運用什麼統計方法來分析
要看具體實驗般原則先gate所需要細胞群再看染色流式檢測數情況都檢測相百比平均熒光強度同種熒光通道都陽性細胞比較熒光強度
7. 細胞的傳代培養結果分析
培養的細胞由於細胞增殖，數量增加，細胞難以繼續生長繁殖，需要進行分瓶培養，將培養的細胞分散，以1：2或1：3以上的比率轉移到另外的容器中進行培養，即為傳代培養，一般細胞可傳代10一50代2、細胞後貼壁過程3、培養細胞的一代生長過程（1）潛伏期：細胞從接種到貼壁生長繁殖的一段時間二倍體細胞系該段時間較長，大概為24一96h；連續細胞系時間短，大概10一30min（2）指數生長期：細胞增殖最旺盛時期，此時進行細胞實驗較佳指數生期持續3一5d後，隨細胞數量不斷增多，生長空間日趨減少，細胞相互接觸匯合成片，呈現接觸抑制。而惡性細胞則無接觸抑制現象；癌細胞則由於營養成分的消耗和細胞代謝產物的影響而發生密度抑制（3）停滯期：細胞數量達到飽和密度後，細胞與營養液的交換面積減少，代謝產物積累，pH下降細胞停止增殖，進入停滯期。此時應該進行細胞傳代，但是得傳1一2代細胞才能恢復。4、細胞傳代的一般步驟a、懸浮細胞可採用加入等量新鮮培養基後直接吹打分散進行傳代，或用離心法後，加入新培養基後再吹打分散進行傳代b、貼壁細胞（1）實驗准備，超凈台噴灑酒精，紫外照射30min。准備好培養瓶／皿離心管，10％DMEM，0.25%胰酶，D一hanks液等，帶上手套，口罩等（2）倒去舊培養基，用D一hanks液清洗一遍，去除沉積的死細胞等（3）加入2ml 0.25％胰蛋白酶消化液，消化2～3min，倒置顯微鏡下觀察，待細胞單層收縮突起出現空隙時，倒去酶液。8. 高中生物所有實驗的實驗過程，方法，結論總結
生物實驗總結
實驗一 觀察DNA和RNA在細胞中的分布
實驗原理：DNA 綠色，RNA 紅色
分布：真核生物DNA主要分布在細胞核中，線粒體和葉綠體內也含有少量的DNA；RNA主要分布在細胞質中。
實驗結果: 細胞核呈綠色,細胞質呈紅色.
實驗二 物質鑒定
還原糖 + 斐林試劑 磚紅色沉澱 脂 肪 + 蘇丹III 橘黃色
脂 肪 + 蘇丹IV 紅色 蛋白質 + 雙縮脲試劑 紫色反應
1、還原糖的檢測
（1）材料的選取：還原糖含量高，白色或近於白色，如蘋果，梨，白蘿卜。
（2）試劑：斐林試劑（甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液），現配現用。
（3）步驟：取樣液2mL於試管中→加入剛配的斐林試劑1mL（斐林試劑甲液和乙液等量混合均勻後再加入）→水浴加熱2min左右→觀察顏色變化（白色→淺藍色→磚紅色）
★模擬尿糖的檢測
1、取樣：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液
2、檢測方法：斐林試劑（水浴加熱）或班氏試劑或尿糖試紙
3、結果：（用斐林試劑檢測）試管內發生出現磚紅色沉澱的是糖尿病患者的尿液，未出現磚紅色沉澱的是正常人的尿液。
4、分析：因為糖尿病患者的尿液中含有還原糖，與斐林試劑發生反應產生磚紅色沉澱，而正常人尿液中無還原糖，所以沒有發生反應。
2、脂肪的檢測
（1）材料的選取：含脂肪量越高的組織越好，如花生的子葉。
（2）步驟： 製作切片（切片越薄越好）將最薄的花生切片放在載玻片中央
↓
染色（滴蘇丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min後吸去染液→滴體積分數50%的酒精洗去浮色→吸去多餘的酒精）
↓
製作裝片（滴1～2滴清水於材料切片上→蓋上蓋玻片）
↓
鏡檢鑒定（顯微鏡對光→低倍鏡觀察→高倍鏡觀察染成橘黃色的脂肪顆粒）
3、蛋白質的檢測
（1）試劑：雙縮脲試劑（A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL的CuSO4溶液）
（2）步驟：試管中加樣液2mL→加雙縮脲試劑A液1mL，搖勻→加雙縮尿試劑B液4滴，搖勻→觀察顏色變化(紫色)
考點提示：
（1）常見還原性糖與非還原性糖有哪些？
葡萄糖、果糖、麥芽糖都是還原性糖；澱粉、蔗糖、纖維素都是非還原性糖。
（2 )還原性糖植物組織取材條件？
含糖量較高、顏色為白色或近於白色，如：蘋果、梨、白色甘藍葉、白蘿卜等。
（3)研磨中為何要加石英砂？不加石英砂對實驗有何影響？
加石英砂是為了使研磨更充分。不加石英砂會使組織樣液中還原性糖減少，使鑒定時溶液顏色變化不明顯。
（4）斐林試劑甲、乙兩液的使用方法？混合的目的？為何要現混現用？
混合後使用；產生氫氧化銅；氫氧化銅不穩定。
（5)還原性糖中加入斐林試劑後，溶液顏色變化的順序為？ 淺藍色 棕色 磚紅色
（6）花生種子切片為何要薄？ 只有很薄的切片，才能透光，而用於顯微鏡的觀察。
（7）轉動細准焦螺旋時，若花生切片的細胞總有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什麼？
切片的厚薄不均勻。
（8）脂肪鑒定中乙醇作用？ 洗去浮色。
（9）雙縮脲試劑A、B兩液是否混合後用？先加A液的目的怎樣通過對比看顏色變化？
不能混合；先加A液的目的是使溶液呈鹼性；先留出一些大豆組織樣液做對比。
實驗三 觀察葉綠體和細胞質流動
1、材料：新鮮蘚類葉、黑藻葉或菠菜葉，口腔上皮細胞臨時裝片
2、原理：葉綠體在顯微鏡下觀察，綠色,球形或橢球形。
用健那綠染液染色後的口腔上皮細胞中線粒體成藍綠色,細胞質接近無色。
知識概要：
取材 製片 低倍觀察 高倍觀察
考點提示：
（1)為什麼可直接取用蘚類的小葉，而不能直接取用菠菜葉？
因為蘚類的小葉很薄，只有一層細胞組成，而菠菜葉由很多層細胞構成。
（2）取用菠菜葉的下表皮時，為何要稍帶些葉肉？
表皮細胞除保衛細胞外，一般不含葉綠體，而葉肉細胞含較多的葉綠體。
（3)怎樣加快黑藻細胞質的流動速度？最適溫度是多少？ 進行光照、提高水溫、切傷部分葉片；25℃左右。
（4）對黑藻什麼部位的細胞觀察，所觀察到的細胞質流動的現象最明顯？ 葉脈附近的細胞。
（5）若視野中某細胞中細胞質的流動方向為順時針，則在裝片中該細胞的細胞質的實際流動方向是怎樣的？ 仍為順時針。
（6）是否一般細胞的細胞質不流動，只有黑藻等少數植物的細胞質才流動？
否，活細胞的細胞質都是流動的。
（7）若觀察植物根毛細胞細胞質的流動，則對顯微鏡的視野亮度應如何調節？
視野應適當調暗一些，可用反光鏡的平面鏡來採光或縮小光圈。
（8）在強光照射下，葉綠體的向光面有何變化？葉綠體的受光面積較小有一面面向光源。
實驗四 觀察有絲分裂
1、材料：洋蔥根尖（蔥，蒜）
2、步驟：（一）洋蔥根尖的培養
（二）裝片的製作
製作流程：解離→漂洗→染色→製片
1. 解離: 葯液: 質量分數為15%的鹽酸,體積分數為95%的酒精(1 : 1混合液).
時間: 3~5min .目的: 使組織中的細胞相互分離開來.
2. 漂洗: 用清水漂洗約3min. 目的: 洗去葯液,防止解離過度,並有利於染色.
3. 染色: 用質量濃度為0.01g / mL或0.02g / mL的龍膽紫溶液(或醋酸洋紅液)染色3~ 5min
目的: 使染色體著色,利於觀察.
4. 製片: 將根尖放在載玻片上,加一滴清水,並用鑷子把根尖弄碎,蓋上蓋玻片,在蓋玻片上再加一片載玻片. 然後用拇指輕輕地按壓載玻片. 目的: 使細胞分散開來,有利於觀察.
（三）觀察
1、先在低倍鏡下找到根尖分生區細胞：細胞呈正方形，排列緊密,有的細胞正在分裂。
2、換高倍鏡下觀察：分裂中期→分裂前、後、末期→分裂間期。（注意各時期細胞內染色體形態和分布的特點）。其中，處於分裂間期的細胞數目最多。
考點提示：
（1)培養根尖時，為何要經常換水？ 增加水中的氧氣，防止根進行無氧呼吸造成根的腐爛。
（2）培養根尖時，應選用老洋
9. 細胞試驗的mtt數據應該怎麼分析
用什麼樣的數據統計主要看你的實驗要求。直接用OD值、細胞存活率、細胞抑制率都可以。文獻中上述幾種表示方法都有，你可以看看。自己繪制曲線完全可以，用EXCEL或SPSS都可以。我的方法：測得各組的OD值後，求每組的平均值，再用以下公式計算各組的細胞增殖率：細胞增殖率（%）＝（本組OD均值－調零組OD均值）/（未處理組OD均值－調零組OD均值）X100%公式的基本意義是：假設未處理組（或稱陰性對照組）的細胞增殖率為100%，調零組為0，各組計算後所得值為相對於對照組的一個相對增殖率。要計算細胞抑制率，用1減去所得到的增殖率即可。