發酵工程菌種保藏方法是什麼

『壹』 菌種的長期保存方法 菌種保藏

1、傳代培養保藏法：包括又有斜面培養、穿刺培養、皰肉培養基培養等，培養後於4-6℃冰箱內保存。其中斜面培養法是將菌種接種在適宜的固體斜面培養基上，待菌充分生長後，棉塞部分用油紙包紮好，移至2-8℃的冰箱中保藏。保藏時間依微生物的種類而有不同，黴菌、放線菌及有芽孢的細菌保存2-4個月，移種一次。酵母菌兩個月，細菌最好每月移種一次。此法為實驗室和工廠菌種室常用的保藏法，優點是操作簡單，使用方便，不需特殊設備，能隨時檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與污染雜菌等。缺點是容易變異，因為培養基的物理、化學特性不是嚴格恆定的，屢次傳代會使微生物的代謝改變，而影響微生物的性狀，污染雜菌的機會亦較多。

2、液體石蠟覆蓋保藏法：液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養的變相方法，能夠適當延長保藏時間，它是在斜面培養物和穿刺培養物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養基水分蒸發而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進入，以減弱代謝作用。本方法的原理是在長好的斜面菌上覆蓋滅菌的液體石蠟，達到菌體與空氣隔絕，使菌處於生長和代謝停止狀態，同時石蠟油還防止水分蒸發，在低溫下達到較長期的保藏菌種的目的。保藏溫度要求在-4-4℃下，液體石蠟法適用於不產孢子的菌種。此法實用而效果好。黴菌、放線菌、芽孢細菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1-2年，一般無芽孢細菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很難保藏的腦膜炎球菌，在37℃溫箱內，亦可保藏3個月之久。此法的優點是製作簡單，不需特殊設備，且不需經常移種。缺點是保存時必須直立放置，所佔位置較大，同時也不便攜帶。從液體石蠟下面取培養物移種後，接種環在火焰上燒灼時，培養物容易與殘留的液體石蠟一起飛濺，應特別注意。

3、載體保藏法：載體保藏法是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而後進行乾燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應用相當廣泛。

4、寄主保藏法：寄主保藏法用於尚不能在人工培養基上生長的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內感染並傳代，此法相當於一般微生物的傳代培養保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍乾燥保藏法進行保藏。冷凍保藏法可分低溫冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、乾冰酒精快速凍結（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

5、甘油管保存法：甘油管冷凍保藏法是利用微生物在甘油中生長和代謝受到抑制的原理達到保藏目的。其方法是將80%的甘油高壓蒸汽滅菌待用。將培養好的斜面菌種用無菌水製成高濃度的菌懸液。取1ml滅菌甘油放入與菌液充分混勻，使甘油濃度約為10%-30%，於-70℃下凍存。-20℃保存時間較短。或採用體積比為8：2的甘油-生理鹽水，加入新鮮培養的菌體肉湯，混合均勻後至-20℃冰箱保存。該方法適用於一般細菌的保存，同時也適用於鏈球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌種，適用范圍廣，操作簡便，效果好，無變異現象發生。甘油-生理鹽水保存液保存菌種優於甘油原液，其原因可能是加入生理鹽水適當降低了甘油的高滲作用，且有肉湯培養物適量增加保存液的營養成分，從而更好地保護了待保存的菌株。

6、冷凍乾燥保藏法：先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然後在減壓下利用升華現象除去水分（真空乾燥），其中真空冷凍乾燥法最常見。真空冷凍乾燥保藏法是兼具低溫、乾燥、除氧三方面菌種保藏的主要因素，除不宜於絲狀真菌的菌絲體外，對病毒、細菌、放線菌、酵母及絲狀菌孢子等各類微生物都適用，不宜用凍干法保存的微生物不到2%。真空冷凍乾燥法是在低溫下快速將細胞凍結，然後在真空條件下乾燥，使微生物的生長和酶活動停止。為了防止在冷凍和水分升華過程中對細胞的損害，要採用保護劑來制備細胞懸液，使菌在凍結和脫水過程中起到保護作用的溶質，通過氫鍵和離子鍵對水和細胞所產生的親和力來穩定細胞成分的構型。即是使樣品中的水分在冰凍狀態下，抽真空減壓，使凍結的冰直接升華為水蒸氣，使樣品達到乾燥。乾燥後的微生物在真空下封裝，與空氣隔絕，達到長期保藏的目的。

『貳』 菌種保藏的原理，菌種保藏方法

1、菌種保藏的原理：菌種保藏有多種方法，其原理大多大同小異，主要是人為創造條件盡量降低生物體內的代謝活動，以達到延長生命、減少變異的目的，其中低溫、乾燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素。2、菌種保藏方法：菌種保藏常用的方法有凍干保藏法、液氮保藏法、甘油管冷凍保藏法、傳代培養保藏法、寄主保藏法、載體保藏法等。

一、菌種保藏的原理

1、菌種保藏的原理是根據菌種的生理生化特性，人為創造條件盡量降低生物體內的代謝活動，以達到延長生命、減少變異的目的。在保藏過程中，必須使微生物的代謝處於最不活躍或相對靜止的狀態，才能在一定的時間內使其不發生變異而又保持生活能力。

2、低溫、乾燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，因此菌種保藏方法雖多，但都是根據這三個因素而設計的。其中低溫可減緩機體細胞的酶活，降低新陳代謝，達到保藏菌種的目的，同時會導致菌體誘發菌絲自溶機制。

二、菌種保藏方法

常用的方法有凍干保藏法、液氮保藏法、甘油管冷凍保藏法、傳代培養保藏法、寄主保藏法、載體保藏法等。

1、凍干保藏法

凍干保藏法是最有效的方法之一，具體為：先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然後在減壓下利用升華現象除去水分（真空乾燥），其中真空冷凍乾燥法最常見。

2、液氮保藏法

液氮保藏法，又稱為超低溫保藏法，主要利用微生物在低於-130°C的低溫下新陳代謝趨於停止的原理，在液氮中（-196°C的超低溫下）有效地進行菌種保藏的方法。該方法一般可保藏15年以上，是公認的菌種長期保藏技術之一。

3、甘油管冷凍保藏法

甘油管冷凍保藏法，利用微生物在甘油中生長和代謝受到抑制的原理達到保藏目的。該方法適用於一般細菌的保存，同時也適用於鏈球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌種，適用范圍廣，操作簡便，效果好，無變異現象發生。

4、傳代培養保藏法

傳代培養保藏法，又稱定期移植保藏法，包括斜面培養、穿刺培養、皰肉培養基培養等，是指將菌種接種於適宜的培養基中，最適條件下培養，待菌種生長完全後，通常置於4℃-6℃進行保存並間隔一定時間進行移植培養的菌種保藏方法。

5、寄主保藏法

寄主保藏法相當於一般微生物的傳代培養保藏法，必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內感染並傳代，尚不能用於在人工培養基上生長的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等。

6、載體保藏法

載體保藏法，將微生物吸附在適當的載體如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而後進行乾燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應用相當廣泛。

『叄』 菌種保存的方法有哪些，菌種傳代操作規程

二、菌種傳代操作規程

1、點燃酒精燈，在火焰旁的上方灼燒接種環。

2、將原有的菌種斜面培養基（菌種管）和待接種的新斜面培養基（接種管）用左手的拇指、食指和中指夾住，菌種管在前，接種管在後，然後斜持試管（45°），讓試管內斜面向上，兩個試管的口子平齊。

3、右手在火焰旁邊轉動兩管的棉塞，然後右手拿著接種環的柄端，垂直將接種環在火焰上灼燒，頂端的環必須燒紅，而且凡是接種時進入試管的部分，均應通過火焰灼燒。

4、使用右手的小指和手掌之間以及無名指和小指之間，將兩管的棉塞拔出，拿住，然後將試管在火焰上通過。

5、將接種環插入菌種管內，接觸無菌苔生長的培養基，待冷後，從斜面上挑取少許菌苔，然後迅速插入接種管，在斜面上輕輕劃線接種（由下而上劃直線，然後由下往上劃曲線）。

6、接種完畢後，將管口通過火焰滅菌，並將棉塞塞上。

『肆』 菌種保存三種主要方法 菌種保存的方法有哪些

1、斜面低溫保藏法：將菌種接種到適合的固體斜面培養基上，等到菌種充分生長過後，使用油紙將棉塞部分包紮好，然後轉移至2-8℃的冰箱中進行保存。如果是黴菌、放線菌及有芽孢的細菌，一般可以保存2-4個月左右，需要移種一次。如果是酵母菌，一般可以保存2個月左右，需要每個月移種一次。

2、液體石蠟覆蓋保藏法：將液體石蠟裝在三角燒瓶中，並使用棉塞塞好，用牛皮紙進行包紮，然後在0.1MPa，121.3℃的環境下滅菌30分鍾左右，接著將其放置在40℃的溫箱之中，將水汽蒸發掉。將需要保藏的菌種，用適合的斜面培養基進行培養，得到健壯的孢子或者是菌體。使用滅菌過的吸管將液體石蠟吸出，注入斜面上，用量為高出斜面頂端1cm左右為宜。將試管直立，放置在低溫或者是室溫之下進行保存。黴菌、放線菌、芽孢細菌可以保藏2年以上不死，酵母菌可以保藏1-2年，一般無芽孢細菌可以保藏1年，腦膜炎球菌可以保藏3個月左右（37℃環境下）。

3、濾紙保藏法：准備好濾紙條（0.5×1.2cm），安瓿管（0.6×8cm），然後每個安瓿管放置1-2張濾紙條，塞上棉塞，在0.1MPa，121℃的環境下滅菌30分鍾左右。將菌種在適合的斜面培養基上培養，得到健壯的菌體。在滅菌培養皿中滴加1-2ml的滅菌脫脂牛乳，並取數環菌苔在牛乳內混合均勻，製成濃懸液，然後使用鑷子從安瓿管中取出濾紙條，浸入菌懸液中，吸飽後，放回安瓿管中，塞上棉塞。將安瓿管放入乾燥器中（內有五氧化二磷作吸水劑），並用真空泵抽氣至干。將棉花塞入管內，用火焰熔封，然後放置在低溫環境下保存。

『伍』 微生物菌種保藏的方法有哪些 完整點,是道簡答題.分值很大.

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1、低溫定期移植保藏法.將需要保藏的菌種接種在適宜的斜面培養基上,適溫培養,當菌絲健壯地長滿斜面時取出,放在3-5℃低溫乾燥處或4℃冰箱、冰櫃中保藏,每隔4-6個月時間移植轉管一次,具體應根據菌種特性決定.保藏時要注意環境溫度不能太高,以防黴菌通過棉塞進入管內.因此,若用棉塞,可用干凈的硫酸紙或牛皮紙包紮棉塞,即可減少污染的機會,也可防止培養基乾燥.除草菇菌種外,其他食用菌菌種都能採用此法保藏.
2、液體石蠟保藏法.取化學純液體石蠟(要求不含水分、不霉變)裝於三角瓶中加棉塞並包紙,在1公斤/平方厘米壓力下滅菌1小時,再放入40℃恆溫箱中數天,以蒸發其中水分,至石蠟油完全透明為止.將處理好的石蠟油移接在空白斜面上,28-30℃下培養2-3天,證明無雜菌生長方可使用.然後用無菌操作的方法把液體石蠟注入待保藏的斜面試管中.注入量以高出培養基斜面1-1.5厘米,塞上橡皮塞,用固體石蠟封口,直立於低溫乾燥處保藏.保藏時間在一年以上,在低溫下,保藏時間還可延長.
3、沙土管保藏法.取河沙用水浸泡洗滌數次,過60目篩除去粗粒,再用10%鹽酸浸泡2-4小時,除去其中有機物質,再用水沖洗至流水的ph達到中性,烘乾備用.同時取貧脊土或菜園土用水浸泡,使呈中性,沉澱後棄去上清液,烘乾碾細,用100目篩子過篩,將處理好的沙與土以(2-4):1混勻,用磁鐵吸出其中的鐵質,然後分裝小試管或安瓿內,每管裝量0.5-2克,塞棉塞,用紙包紮滅菌(1.5公斤/平方厘米,1小時),再乾熱滅菌(160℃,2-3小時)1-2次,進行無菌檢驗,合格後使用.將已形成孢子的斜面菌種,在無菌條件下注入無菌水3-5毫升,刮菌苔,製成菌懸液,再用無菌吸管吸取菌液滴入砂土管中,以浸透砂土為止.將接種後的沙土管放入盛有乾燥劑的真空乾燥器內,接上真空泵抽氣數小時,至沙土乾燥為止.真空乾燥操作需在孢子接入後48小時內完成,以免孢子發芽.制備好的沙土管用石蠟封口,在低溫下可保藏2-10年.
4、濾紙片保藏法.取白色(收集深色孢子)或黑色(收集白色孢子)濾紙,剪成4×0.8厘米的小紙條,平鋪在培養皿中用紙包裹進行滅菌(1公斤/平方厘米,30分鍾).採用鉤懸法收集孢子,讓孢子落在濾紙條上.將載有孢子的濾紙條放入保藏試管中,再將保藏試管放入乾燥器中1-2天,除去濾紙水分,使濾紙水分含量達2%左右,然後低溫保藏.
5、自然基質保藏法
⑴麥粒保藏法：取無癟粒、無雜質的小麥淘洗干凈,浸泡12-15小時,加水煮沸15分鍾,繼續熱浸15分鍾,使麥粒脹而不破,瀝干水分攤開晾曬,使麥粒的含水量在25%左右.將碳酸鈣、石膏拌入熟麥粒中(麥粒、碳酸鈣、石膏比例為10公斤:133克:33克),拌和均勻後裝入試管中,每管約2-3克,然後清洗試管,塞棉塞,滅菌1.5(1.5公斤/平方厘米,2小時),經無菌檢查合格後備用,試管基質冷卻後接種,適溫培養,待菌絲長滿基質後用石蠟塗封棉塞,放低溫保藏.2年左右轉接一次.
⑵麩曲保藏法.取新鮮麩皮,過60目篩除去粗粒.將麩皮和自來水按1:1拌勻,裝入小試管,每管約裝1/3高度,加棉塞用紙包紮,高壓滅菌(1.5公斤/平方厘米,30分鍾),經無菌檢查合格後備用,將生長在斜面培養基上的健壯菌種,移種至無菌麩曲管中,移種時注意盡管搗勻小試管中的麩皮,呈疏鬆狀態,在適溫下培養至菌絲長滿麩皮為止,將麩曲小管置乾燥器中,在低溫或適溫下保藏.
6、生理鹽水保藏法.取純氯化鈉0.7-0.9克,放入100%毫升蒸餾水中,攪拌均勻分裝試管,每管5-10毫升,進行滅菌(1公斤/平方厘米,30分鍾),經無菌檢查合格後備用,將待保藏的菌種接入馬鈴薯葡萄糖液體培養基中適溫振盪培養5-7天.無菌操作吸取少許培養菌種注入經檢驗合格的生理鹽水試管中,塞上無菌橡皮塞,用石蠟塗封,在室溫或低溫保藏.
7、冷凍真空乾燥法.將已培養、生長豐富的菌體或孢子懸浮於滅菌的血清、卵白、脫脂奶製成菌懸液,將懸液以無菌操作分裝於滅菌的玻璃安瓿瓶中,每管約0.3-0.5毫升,然後用耐壓橡皮管與冷凍乾燥裝置連接,安瓿瓶放在冷凍槽中於-30℃至-40℃迅速冷凍,並在冷凍狀態下抽空乾燥,並在真空狀態下熔封安瓿,在-20℃保存,一般可保存十年以上,但成本較高.
8、液氮超低溫保藏法.首先將要保藏的菌種製成菌懸液備用；其次,准備安瓿瓶,每瓶加入0.8毫升冷凍保護劑10%(體積比)甘油蒸餾水溶液,塞棉塞滅菌(1公斤/平方厘米,5分鍾).無菌檢查後,接入要保藏的菌種,火焰熔封瓶口,檢查是否漏氣,將封好口的安瓿瓶放在凍結器內,以每分鍾下降1℃的速度緩慢降溫,使保藏品逐步均勻地凍結,直至-35℃,以後凍結速度就不需控制,安瓿凍結後立即放入液氮罐內,在-150至-196℃保藏,該法只有少數科研院所使用.

『陸』 保藏菌種的方法有哪些

1、傳代培養保藏法：包括又有斜面培養、穿刺培養、皰肉培養基培養等，培養後於4-6℃冰箱內保存。

2、液體石蠟覆蓋保藏法：液體石蠟覆蓋保藏法是傳代培養的變相方法，能夠適當延長保藏時間。

3、載體保藏法：載體保藏法是將微生物吸附在適當的載體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而後進行乾燥的保藏法。

4、寄主保藏法：寄主保藏法用於目前尚不能在人工培養基上生長的微生物。

5、冷凍乾燥保藏法：先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然後在減壓下利用升華現象除去水分（真空乾燥），其中真空冷凍乾燥法最常見。

(6)發酵工程菌種保藏方法是什麼擴展閱讀

菌種保藏的原理：

菌種保藏有多種方法，其原理大多大同小異，主要是運用一些方式盡量降低生物體內的代謝，達到延長生命，減少變異的目的。通常採用的方法為低溫、缺氧、乾燥。

低溫主要對菌種產生兩方面的影響，首先，較低的溫度可以減緩機體細胞的酶活，降低新陳代謝，達到保藏菌種的目的。其次，低溫同時會導致菌體誘發菌絲自溶機制，如果降溫過程失誤，同樣會造成機體的機械損傷和溶質損傷。

『柒』 常見的保存菌種的方法 常見的保存菌種的方法介紹

1、斜面傳代保藏法。此法是把菌種接種到所需要的斜面培養基上，在最適溫度下培養，長出豐滿的菌體細胞或孢子後，置於4℃冰箱或冷庫保藏。此法方法簡單，存活率高，適用於各類菌株的保藏。但保藏時間不長，需定期傳代，傳代過程中易退化污染，只適用於短期保藏。

2、甘油管冷凍保藏法。甘油管保藏法是將富集培養後的菌液與已滅好的甘油充分混合，使終濃度控制在20-30%之間，分裝至甘油管中，最後置於-70℃冰箱或液氮罐保藏。此法相比斜面傳代保藏時間更長，溫度越低，保藏時間越久。

3、液體石蠟保藏法。液體石蠟保藏是在斜面培養或穿刺培養上加一層液體石蠟，液體石蠟可以防止失水乾燥，隔絕空氣，降低菌種細胞代謝速率。此法更適用於細菌和酵母菌。

4、沙土管保藏法。沙土管保藏法是把微生物附著在砂質載體上，目的是為了將微生物賴以生存的水分蒸發掉，使細胞處於休眠和代謝停滯狀態，從而達到較長保藏的目的。此法適用於黴菌和放線菌。

5、真空冷凍乾燥保藏法。該法集中了菌種保藏中低溫、缺氧、乾燥和添加保護劑等多種有利條件，使微生物的代謝處於相對靜止狀態。同時該法可用於細菌、放線菌、絲狀真菌、酵母菌及病毒的保藏。因而具有保藏菌種范圍廣、時間長（10-20年）、存活率高等特點，是目前最有效的菌株保藏方法之一。

『捌』 菌種保藏的常用方法及特點

（1）斜面低溫保藏。是一種最常用、最簡便的菌種保藏方法。首先將需要保藏的菌種接到斜面培養基上，在適宜的溫度條下培養，當菌絲健壯地長滿斜面時，即將此試管菌種取出，放置於4 ℃的冰箱中保藏。特點：
①簡單易行，適用於各類菇類菌種保藏，是目前生產及科研普遍採用的一種方法；②保藏時間短，需6個月轉接一次，轉管次數多菌絲變異的可能性大；③如改用橡皮塞並用石蠟扣，可保藏1年～3年。
（2）液體石蠟保藏。液體石蠟保藏也稱為礦油保藏，即用礦油覆蓋試管斜面試管保藏的方法。礦油是指無色、透明、黏稠、性質穩定、不易被微生物分解的石蠟油和液體石蠟，將其覆蓋在斜面菌種之上，可以隔絕空氣，防治培養基水分蒸發，抑制微生物的代謝活動，推遲細胞老化，從而達到長期保藏菌種的目的。特點：
①方法簡便易行，保藏條件不嚴格，保藏時間長，可作為長期保藏菌種的方法；②菌種必須垂直放，放置不方便。
（3）濾紙保藏。濾紙保藏是一種以無菌濾紙作為食用菌孢子吸附載體長期保藏菌種的方法，又稱濾紙孢子保藏法。特點：技術要求高，設備費用大，菌種不易衰老退化，菌種保藏時間長很少變異。
（4）自然基質保藏。自然基質保藏就是以不含毒性、刺激性和抑菌性而富含營養的自然生長的基質作培養基來保藏菌種的方法。自然基質很多，食用菌常用的自然基質有發酵的糞草、木屑及枝條基質等，取材方便，製作方法簡便，保藏時間也較長。使用時，只需取一塊、一粒或一條培養物放在新鮮的培養基上，並在適溫下培養即可。特點：方法簡便易行，保藏時間長。

『玖』 菌種保存 長期保存菌種的方法

1、液體石蠟保存法。液體石蠟保存法就是在斜面菌種或穿刺菌種表面覆蓋一層液體石蠟，從而隔絕空氣，減少菌種及培養物水分揮發，保藏溫度要求在4℃下即可。將培養好的菌種斜面，緩慢倒入無菌的液體石蠟，使石蠟高出斜面頂端1厘米，直立放置，低溫保存就可以，黴菌、放線菌、芽孢細菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1-2年。

2、沙土保存法。沙土保藏法是將菌種吸附在適當的載體上，而後進行乾燥的保藏。將培養好的菌種接入沙土管內，用真空泵抽氣至干。細菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌甚至可保藏14-17年之久。

3、甘油管保存法。甘油管保存是利用微生物在甘油中生長和代謝受到抑制的原理達到保藏目的。配置30%濃度的無菌甘油，將培養好的菌種與甘油充分混合均勻，放入-20℃保存。

4、冷凍乾燥保藏法。冷凍乾燥保存法就是將菌種與保護劑混合均勻後，快速冷凍，然後在減壓下利用升華現象除去水分，兼具低溫、乾燥、除氧三方。乾燥後的菌種在真空環境下可長期保存。