免疫分析方法類型

㈠ 化學發光免疫分析法的原理

1、直接化學發光，標記物為吖啶酯（雅培）或者abei（新產業）
2、酶促化學發光，標記物為鹼性磷酸酶（廈門波生）或者辣根過氧化物酶（強生）
3、電化學發光，標記物為三聯吡啶釕（羅氏）
括弧內為代表廠家

㈡ 獸葯殘留主要檢測那些物質

（1）按照分離或者檢測原理分類①理化分析方法，包括波譜法、色譜法及其聯用技術，如高效液相色譜（HPLC）、氣相色譜法（GC）、液相色譜串聯質譜法（LC-MS/MS）、氣相色譜-質譜法（CC-MS）、薄層色譜法（TLC）、毛細管電泳（CE）等。

②免疫分析法，如放射免疫測定法（RIA）、酶免疫測定法（EIA、ELISA）、熒光免疫測定法（FIA）等。

③生物測定法，如微生物學測定法（microbiologyassays）、放射受體測定法（radioreceptorassays）等。

（2）按照被測組分數量分類單組分殘留分析法（singleresieanalysis）、多組分殘留分析法（multi-resieanalysis）。

（3）按分析目的分類①篩選分析方法（screeningmethods）：一般提供被測組分是否存在或者濃度是否超過最高殘留限量的初步信息。對篩選分析方法只要求具備半定量和一定的定性能力，但必須靈敏度高、過程簡單、分析速度快。

②常規分析方法（routinemethods）：要求具有準確的定量分析能力，但不一定具有準確的定性能力。

③確證分析方法（confirmatorymethods）：不僅要求高的靈敏度，而且特別要求具有準確的定性分析（給出被測組分的結構信息）和定量分析能力。殘留組分絕對量極小的測定只能用色-質聯用確證方法。

㈢ 食品中常見農葯與獸葯殘留速測技術有哪些

免疫分析法

免疫分析法（IA）以抗體作為生物化學檢測器對化合物、酶或蛋白質等物質進行定性和定量檢測。免疫技術是 90 年代優先研究開發和利用的農葯殘留分離技術，這是一種基於抗原抗體特異性識別和結合性反應為基礎的分析方法。它在測定的高度靈敏度和抗性物質的痕量檢測方面取得了很大的成就。

通過對抗原或抗體進行標記（酶、熒光物質、放射性同位素標記等），利用標記物的生物或物理或化學放大作用，與現代測試技術相結合，對樣品中特定的農葯殘留物進行定性定量檢測。如酶聯免疫法，該技術在國外已經商品化。它快速簡便，僅需要很少的儀器設備和專業培訓，主要用於初篩、測定致癌物和一些劇毒農葯，對污染事故的污染物檢測具有十分重要的意義。

酶抑製法

酶抑製法是一種可對部分農葯進行快速殘留檢測的技術，其適用於有機磷與氨基甲酸酯類農葯。它利用這類農葯可特異性地抑制昆蟲中樞和周圍神經系統仲乙醯膽鹼酯酶的活性，破壞其神經的正常傳導，從而使昆蟲中毒致死。將乙醯膽鹼酯酶與樣品反應，根據乙醯膽鹼酯酶活性受到抑制的情況，可判斷出樣品中是否含有有機磷與氨基甲酸酯類農葯。
河南冠宇儀器有限公司生產的新一代智能型農葯殘留檢測儀；GY-NC10農葯殘留檢測儀是根據農業標准方法（NY/T 448-2001）和國標（GB/T5009.199-2003）中的酶抑制率法，嚴格遵循《GB/T5009.199-2003蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農葯殘留快速檢測方法標准》中的規定對蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯類農葯殘留的快速檢測。可廣泛應用於各級政府蔬菜檢測中心、農貿市場、超市、環保機構、蔬菜種植基地、飯店、車載及實驗室等食品安全檢測與監控場所等單位對果蔬中農葯殘留的檢測。
生物感測器技術
生物感測器是利用生物活性物質（如酶、抗原、抗體、細胞、組織等）作為感測器的識別元件，與樣品中的待測物質發生特異性反應（如發光、發熱、顏色變化、形成復合物等），利用轉換器檢測到這些變化並將其轉化為電信號，再通過檢測裝置的分析處理，即可對待測物質進行定性和定量檢測。
獸葯殘留檢測方法
ELISA酶聯免疫技術
Enzyme Linked Immunosorbent Assay(簡寫ELISA)
指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，進行免疫反應的定性和定量方法。
具有靈敏、特異、簡單、快速、穩定及易於自動化操作等特點。
這一方法的基本原理是：
①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，並保持其免疫活性。
②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開，最後結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物後，底物被酶催化變為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據顏色反應的深淺刊物定性或定量分析。由於酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。
免疫膠體金技術
Immune colloidal gold technique
指以膠體金作為示蹤標志物應用於抗原抗體的一種新型的免疫標記技術。
具有操作便捷、安全，檢測快速、准確，成本低等優點。
免疫層析法 (Immunochromatography)是一種基於免疫膠體金技術的快速診斷技術，實質上是蛋白質等高分子被吸附到納米金顆粒表面的包被過程。
吸附機理可能是納米金顆粒表面負電荷，與蛋白質的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結合，而且吸附後不會使生物分子變性，由於金顆粒具有高電子密度的特性，在金標蛋白結合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當這些標記物在相應的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點，因而用於定性或半定量的快速免疫檢測方法中。
由於球形的納米金粒子對蛋白質有很強的吸附功能，可以與葡萄球菌A 蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白等非共價結合，因而在基礎研究和實驗中成為非常有用的工具。
免疫層析是以NC膜為載體，利用微孔膜的毛細管作用，使滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移，如同層析一般。金磁微粒復合物乾片粘連在近NC膜條下端(C)，膜條測試區(T)包有特異抗體，當試紙條下端進入液體標本樣中，下端吸水材料吸取液體向上端移動，流經C處時，使乾片上的金磁微粒復合物復溶，並帶動其向膜條滲移，若標本有特異性抗原時，可與金磁微粒復合物的抗體結合，形成的金標抗原—抗體復合物流至測試區，被固相抗體所捕獲，形成抗體—抗原—金標抗體復合物，在膜上T處出現紅色控制線。

㈣ 化學發光免疫分析法有哪三類

1、化學發光免疫分析，是用化學發光劑直接標記抗體或抗原的一類免疫測定方法。目前常見的標記物主要為魯米諾類和吖啶酯類化學發光劑。標記物為吖啶酯（雅培）或者ABEI（新產業）；

2、化學發光酶免疫分析，是以酶標記生物活性物質進行免疫反應，免疫反應復合物上的酶再作用於發光底物，在信號試劑作用下發光，用發光信號測定儀進行發光測定。目前常用的標記酶為辣根過氧化物酶（HRP ）和鹼性磷酸酶（ALP ），它們有各自的發光底物。HRP 最常用發光底物是魯米諾及其衍生物 。標記物為鹼性磷酸酶（廈門波生）或者辣根過氧化物酶（強生）；

3、電化學發光免疫分析，電化學發光是指由電化學反應引起的化學發光過程。標記物為三聯吡啶釕（羅氏）。

㈤ 體內葯物分析常用的分析方法有

葯學專業知識（一）第六章生物葯劑學，是研究葯物吸收、分布、代謝與排泄過程，闡明葯物制劑劑型因素，生物因素與葯效關系。下面小編總結了葯物在體內的各過程：

體內過程示意圖
了解完葯物在體內的過程示意圖，接著我們來掌握執業葯師考試中涉及的相關考點：

1. 需要掌握的幾個概念

2. 葯物的跨膜轉運

【相關考題】

1.大部分口服葯物的胃腸道中最主要的吸收部分是

A.胃

B.小腸

C.盲腸

D.結腸

E.直腸

2.藉助載體或酶促系統，消耗機體能量，從膜的低濃度一側向高濃度一側轉運的方式是

A.濾過

B.簡單擴散

C.易化擴散

D.主動轉運

E.膜動轉運

答案：B D

㈥ 簡述農葯殘留檢測前處理步驟及檢測方法

檢測前處理程序

經典的農葯殘留分析步驟通常是:水溶性溶劑提取- 非水溶性溶劑再分配- 固相吸附柱凈化- 氣相或液相色譜檢測。其中提取和凈化是前處理部分,樣品前處理不僅要求盡可能完全提取其中的待測組分,還要盡可能除去與目標物同時存在的雜質,避免對色譜柱和檢測器等的污染,減少對檢測結果的干擾,提高檢測的靈敏度和准確性。

農葯殘留檢測技術

農葯殘留量檢測是微量或痕量分析,必須採用高靈敏度的檢測技術才能實現。自20世紀50年代,各國科學家就開始研究農葯殘留的檢測方法。常規檢測的分析方法有光譜法、酶抑製法和色譜法。

1、光譜法

光譜法是根據有機磷農葯中的某些官能團或水解、還原產物與特殊的顯色劑在特定的環境下發生氧化、磺酸化、絡合等化學反應,產生特定波長的顏色反應來進行定性或定量測定。檢出限在微克級。它可直接檢測固體、液體及氣體樣品,對樣品前處理要求低、環境污染小,分析速度快。

但是,光譜法只能檢測一種或具有相同基團的一類有機磷農葯,靈敏度不高,一般只能作為定性方法。

2、酶抑製法

酶抑製法是根據有機磷和氨基甲酸酯類農葯能抑制昆蟲中樞和周圍神經系統中乙醯膽鹼的活性,造成神經傳導介質乙醯膽鹼的積累,影響正常神經傳導,使昆蟲中毒致死這一昆蟲毒理學原理進行檢測的。

3、色譜法

色譜法是農葯殘留分析的常用方法之一,它根據分析物質在固定相和流動相之間的分配系數的不同達到分離目的,並將分析物質的濃度轉換成易被測量的電信號(電壓、電流等) ,然後送到記錄儀記錄下來的方法。主要有薄層色譜法、氣相色譜法和高效液相色譜法。

4、快速檢測技術

常見的有化學速測法、免疫分析法、酶抑製法和活體檢測法等。

化學速測法，主要根據氧化還原反應，水解產物與檢測液作用變色，用於有機磷農葯的快速檢測，但是靈敏度低，使用局限性，且易受還原性物質干擾。

免疫分析法，主要有放射免疫分析和酶免疫分析，最常用的是酶聯免疫分析（ELISA），基於抗原和抗體的特異性識別和結合反應，對於小分子量農葯需要制備人工抗原，才能進行免疫分析。

酶抑製法，是研究最成熟、應用最廣泛的快速農殘檢測技術，主要根據有機磷和氨基甲酸酯類農葯對乙醯膽鹼酶的特異性抑制反應。

活體檢測法，主要利用活體生物對農葯殘留的敏感反應，例如給家蠅餵食樣品，觀察死亡率來判定農殘量。該方法操作簡單，但定性粗糙、准確度低，對農葯的適用范圍窄。

㈦ 化學發光免疫分析原理是什麼

化學發光免疫分析包含兩個部分，即免疫反應系統和化學發光分析系統。化學發光分析系統是利用化學發光物質經催化劑的催化和氧化劑的氧化，形成一個激發態的中間體，當這種激發態中間體回到穩定的基態時，同時發射出光子(hM)，利用發光信號測量儀器測量光量子產額。免疫反應系統是將發光物質(在反應劑激發下生成激發態中間體)直接標記在抗原(化學發光免疫分析)或抗體(免疫化學發光分析)上，或酶作用於發光底物。
化學發光免疫分析根據其所採用的標記物的不同可分為發光物標記、酶標記和元素標記化學發光免疫分析三大類。發光物標記的CLIA是以發光物質代替放射性核素或酶作為標記物(如吖啶酯)，在反應體系中發光物質在鹼性介質中氧化時釋放大量自由能，產生激發態的中問體，該激發態的中間體由最低振動能級回到穩定的基態，各個振動能級產生輻射時，同時產生能量，多餘的能量即為發射光子，從而產生發光現象。利用發光信號的測量儀器，分析接收的光量子產額，通過計算機系統轉換成被測物質的濃度單位。在此系統中包含兩個部分，化學發光反應系統和免疫反應系統，即在抗原一抗體特異性反應過程中，伴隨有化學反應過程而產生光的發射現象。化學反應系統中以化學反應為基礎，化學發光的首要條件是吸收了化學能而處於激發態的分子或原子必須能釋放出光子或者能將能量轉移到另一個物質的分子上並使這種分子激發，當這種分子回到基態時釋放出光子。
化學發光與熒光的根本區別是形成激發態分子的激發能原理不同。熒光是發光物質吸收了激發光後使分子產生發射光；化學發光是化學反應過程中所產生的化學能使分子激發產生的發射光。因此，化學發光反應過程必須產生足夠的激發能是產生發光效應的重要條件。化學發光反應可在氣相、液相或固相反應體系中發生，以液相發光在免疫學檢測中最常應用。

㈧ 免疫分析方法有哪些

（1）放射免疫分析法（radioimmunoassay，RIA）。RIA技術是使用以放射性同位素（如125I、32P、3H等）作標記的抗原或抗體，用γ－射線探測儀或液體閃爍計數器測定γ－射線或β－射線的放射性強度，來測定抗體或抗原量的技術。它包括以標記抗原為特點的放射免疫分析和以標記抗體為特點的免疫放射分析（immunoradiometricassay，IRMA）。前者以液相競爭結合法居多，既測大分子抗原又測小分子抗原；後者以固相法測大分子抗原為主。

RIA在早期建立的農葯免疫分析方法中佔了很大比重，建立了狄氏劑、艾氏劑、2，4－D和2，4，5－T、對硫磷和百草枯等農葯的放射免疫分析法。盡管該方法靈敏度非常敏銳（RIA通常為10-9g、10-12g，甚至10-15g），應用范圍廣，但進行RIA需使用昂貴的計數器，也存在放射線輻射和污染等問題，因此在農葯殘留檢測領域的應用和發展受到了一定的限制，並逐步為其他免疫分析方法所取代。

（2）酶免疫分析法（enzymeimmunoassay，EIA）。EIA是繼RIA之後發展起來的一項免疫分析技術。其檢測原理與放射免疫法類似，但所用的標記物為酶，它將抗原、抗體的特異性免疫反應和酶的高效催化作用有機結合起來，通過測定結合於固相的酶的活力來測定被測定物的量。用做標記物的酶有辣根過氧化物酶（horseradishperoxidase，HRP）和鹼性磷酸酶（alkalinephosphatase，AKP）、葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase，GO）、脲酶（urease）等。酶標記反應的固相支持物有聚苯乙烯塑料管、膜等。目前大多數採用96孔酶標板（MTP）作為固相支持物。這種板的檢測容量大，樣本數量多，只需有台簡單的酶標儀就可得出准確的檢測數據。也有學者採用磁珠作為固相材料進行EIA研究，其原理是將高分子材料（聚苯乙烯、聚氯乙烯等）包裹到金屬小顆粒（Fe2O3，Fe3O4）外面，再通過化學方法鍵合上氨基（－NH2）、羧基（－COOH）、羥基（－OH）等活性基團，再與抗體或抗原耦聯，製成免疫性微珠。該方法的優點是微珠比表面積大，吸附能力強，能懸浮在液相中快速均勻的捕獲樣品中的待測物，通過外加磁場後能夠實現微珠與樣品液的快速分離，從而減少檢測時間、提高檢測靈敏度。

由於酶標試劑制備容易、穩定、價廉，酶免疫分析的靈敏度接近放射免疫技術，故近年來EIA技術發展很快，已開發了多種EIA方法。其中酶聯免疫法（，ELISA）是目前農葯殘留檢測中應用最廣泛的酶免疫分析技術。

（3）熒光免疫分析法（fluorescenceimmunoassay，FIA）。FIA檢測的基本原理是將抗原抗體的高度特異性與熒光的敏感可測性有機地結合，以熒光物質作為示蹤劑標記抗體、抗原或半抗原分子，制備高質量的特異性熒光試劑。當抗原抗體結合物中的熒光物質受到紫外光或藍光照射時，能夠吸收光能進入激發態。當其從激發態回復基態時，能以電磁輻射形式放射出所吸收的光能，產生熒光。繪制農葯濃度－熒光強度曲線，可以定性、定量檢測樣品中的農葯殘留量。

適用於抗體、抗原或半抗原分子標記的熒光素須符合要求：①應具有能與蛋白質分子形成穩定共價鍵的化學基團，或易轉變成這類反應形式而不破壞其熒光結構；②標記後，熒光素與抗體或抗原各自的化學結構和性質均不發生改變；③熒光效率高，與蛋白質結合的需要量很少；④熒光素與蛋白質結合的過程簡單、快速，游離的熒光素及其降解產物容易除去；⑤結合物在一般儲存條件下性能穩定，可保存使用較長時間。

（4）化學發光免疫分析法（luminescentimmunoassay，LCIA）。LCIA又可分為化學發光免疫測定（chemiluminescentimmunoassay，CLCIA）和生物發光免疫測定（bio-luminescentImmunoassay，BLCIA）。

1976年，Shroeder首先用生物素（B）－親和素（A）系統建立了均相化學發光免疫測定技術，爾後Halman和Velan又將其引伸到非均相體系，現已滲入到生物學研究的各個領域。其原理是以發光指示抗原與抗體的結合，當發游標記物與相應的抗體或抗原結合後，底物與酶作用，或與發光劑產生氧化還原反應，或使熒光物質（例如紅熒烯等）激發，釋放光能。最後用光度計測定其發光強度，進行定量分析。常用發游標記物有辣根過氧化物酶（HRP）、魯米諾（luminol）、異魯米諾（isoluminol）、咯粉鹼（lophine）、光澤精（lucigen）、雙（2、4、6－三氯苯）草酸酯、聯苯三酚和6[N-（4－二氨基丁基）－N－乙基]－氨基-2，3－二氫吩嗪-1，4－二酮（ABEI）等。用上述發游標記物標記的抗體（或抗原）在一定的pH緩沖溶液中與相應的抗原（或抗體）結合時，在協同因子（例如H2O2等）的作用下發光，其發光強度與被測物的濃度成正比，故可以用於定量分析。

發光免疫測定具有特異性強、靈敏度高（檢測限量達10-15mol/L）、快速（1～3h）、發光材料易得等優點。但其發光過程和強度常受到發光物質本身的化學結構、介質的pH、協同發光物質和金屬離子雜質等影響。

（5）金免疫層析分析法（goldimmuno-chromatographyassay，GICA）。GICA檢測原理是將配體（抗體或抗原）以線狀包被固化於硝酸纖維素膜等微孔薄膜上，膠體金標記另以配體或其他物質並以干態固定在吸水材料上，通過毛細作用，使樣品溶液在層析條上泳動，當泳動至膠體金標記物處時，如樣品中含有待檢受體，則發生第一步高度特異性的免疫反應，形成的免疫復合物繼續泳動至線狀包被區時，發生第二步高度特異性的免疫反應，形成的免疫復合物被截留在包被的線狀區，通過標記的膠體金而顯紅色條帶（檢測帶），而游離的標記物則越過檢測帶，與結合的標記物自動分離。通過檢測帶上顏色的有無或色澤深淺來實現定性或定量測定2。

2金標試紙條檢測

GICA法具有快速（5～20min）、廉價、結果明確、無需復雜操作技巧和特殊設備、攜帶方便等優點。但相對於其他免疫分析方法，該方法檢測靈敏度稍低，主要適合現場快速定性或半定量測定。目前該方法已被應用於醫學和生物學等眾多研究領域，尤其在發達國家已經得到了廣泛的應用。

（6）免疫分析與儀器分析技術的聯用技術。使用單一的IA技術進行農葯殘留分析獲得的信息量少，而理化分析方法的選擇性又比較差。Kramer等人將免疫分析法和液相色譜法（LC）聯合起來使用，從而簡化了分析方法，提高了檢測效率。LC-IA的聯用，將LC的高分離能力和IA的高靈敏性和高特異性融為一體。該分析法尤其適合多組分殘留分析和微量分析。免疫分析與氣相色譜/質譜（GC/MS）的聯用可減少結構相似的農葯或代謝產物分析中的交叉反應，以降低假陽性。

㈨ 清潔驗證有效成分殘留用什麼方法測

這個得根據門類不同而區別吧。

對於農葯，國際上通常兩大類：生化測定法和色譜檢測法。
但是傳統的GC/MS等農殘分析技術檢測成本高、時間長，這就給食品安全監管部門對農產品產前、產中、產後的監督工作帶來了許多不便，因此也催生出大量的快速農葯殘留的檢測技術，常見的有化學速測法、免疫分析法、酶抑製法和活體檢測法等。
（1）化學速測法，主要根據氧化還原反應，水解產物與檢測液作用變色，用於有機磷農葯的快速檢測，但是靈敏度低，使用局限性，且易受還原性物質干擾。
（2）免疫分析法，主要有放射免疫分析和酶免疫分析，最常用的是酶聯免疫分析（ELISA），基於抗原和抗體的特異性識別和結合反應，對於小分子量農葯需要制備人工抗原，才能進行免疫分析。
（3）酶抑製法，是研究最成熟、應用最廣泛的快速農殘檢測技術，主要根據有機磷和氨基甲酸酯類農葯對乙醯膽鹼酶的特異性抑制反應。
（4）活體檢測法，主要利用活體生物對農葯殘留的敏感反應，例如給家蠅餵食樣品，觀察死亡率來判定農殘量。該方法操作簡單，但定性粗糙、准確度低，對農葯的適用范圍窄。

對於殘留溶劑，早期用來測定葯品中殘留溶劑的方法是乾燥失重測定法。也就是通過加熱過程中，樣品的質量減失來測定殘留溶劑的含量。這種方法的最大缺點就是非專屬性。只能對其總量分析而無法對定性鑒別，而且水分也會干擾殘留溶劑的測定。
分光光度法也通常利用特定溶劑和特定化學試劑的反應測定葯品中的殘留溶劑，雖然專屬性尚可，但靈敏度較低。
目前，殘留溶劑方法被氣相色譜法所取代。氣相色譜法不但具有良好的分離能力和高靈敏度，特別是和葯品中殘留溶劑的復雜樣品的分析。推薦使用毛細管色譜柱-頂空進樣系統，當然也可以使用普通填充柱，溶液直接進樣方法。
對不宜採用氣相色譜法測定的含氮鹼性化合物，如N-甲基吡咯烷酮等可採用其它方法，如離子色譜法等。
測定殘留溶劑應從以下幾個方面考慮：確定被測的有機溶劑、選擇合適的色譜柱、制備供試品溶液和對照品溶液、選擇合適的進樣方法和滿足檢測靈敏度要求的檢測器。