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用電泳方法分析核酸

發布時間:2023-02-06 04:54:22

如何通過分析電泳圖譜評判核酸的相對分子質量

如何通過分析電泳圖譜評判核酸的相對分子質量:先找到上面的一個相應的酶切位點,這個酶在這個質粒上只有一個識別域。把質粒完全切開後再跑瓊脂糖凝膠電泳,配合適當的marker就可以准確的判斷質粒的分子量。

❷ 常見的電泳方法

實驗室中常見的電泳方法有以下幾種:
一、紙電泳
指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是最早使用的區帶電泳。
將濾紙條水平地架設在兩個裝有緩沖溶液的容器之間,樣品點於濾紙中央。當濾紙條被緩沖液潤濕後,再蓋上絕緣密封罩,即可由電泳電源輸入直流電壓(100V~1000V)進行電泳。
二、醋酸纖維素薄膜電泳
電泳時經過膜的預處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點是分離速度快、電泳時間短、樣品用量少。因此特別適合於病理情況下微量異常蛋白的檢測。
三、凝膠電泳
由區帶電泳中派生出的一種用凝膠物質作支持物進行電泳的方式。
凝膠電泳中的瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯醯胺凝膠電泳是普通電泳中應用最多的兩種形式。
目前,這種辦法被廣泛用來分析蛋白質和核酸。
四、等電聚焦電泳
1.等電聚焦電泳過程
一種利用有pH值梯度的介質,分離等電點不同的蛋白質的電泳技術。
在一個穩定連續的線性pH梯度的溶液(兩性載體電解質)中進行分離,每一種被分離的兩性物質都移向與它的等電點相一致的pH位置,在那裡不再移動(稱為聚焦)。
2.等電聚焦電泳的特點
使用兩性載體電解質,在電極之間形成穩定、連續、線性的pH梯度;
由於「聚焦效應」,即使很小的樣品也能獲得清晰、鮮明的區帶界面;
電泳速度快;解析度高;
加入樣品的位置可任意選擇;
可用於測定蛋白質類物質的等電點;
適用於中、大分子量(如蛋白質、肽類、同工酶等)生物組分的分離分析。
五、等速電泳
採用兩種不同濃度的電解質,一種為前導電解質,充滿整個毛細管柱;另一種為尾隨電解質,置於一端的電泳槽中。前導電解質的遷移率高於任何樣品組分,尾隨電解質則低於任何樣品組分,被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間,在強電場的作用下,各被分離組分在前導電解質與尾隨電解質之間的空隙中移動,實現分離。
六、雙向凝膠電泳(二維電泳)
第一向採用等電聚焦 根據復雜的蛋白質成分中各個蛋白質的PI的不同,將蛋白質進行分離。
第二向採用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯醯胺凝膠電泳 (SDS-PAGE)就是按蛋白質分子量的大小使其在垂直方向進行分離。其結果不再是條帶狀,而是呈現為斑點狀。
七、免疫電泳
免疫電泳是瓊脂平板電泳和雙相免疫擴散兩種方法的結合。將抗原樣品在瓊脂平板上先進行電泳,使其中的各種成分因電泳遷移率的不同而彼此分開;然後加入抗體做雙相免疫擴散,把已分離的各抗原成分與抗體在瓊脂中擴散而相遇,在二者比例適當的地方,形成肉眼可見的沉澱弧。

❸ 核酸分析技術有哪些

總的來說包括了核酸的分離、提純,核酸的擴增,檢測,定性與定量分析等。下面以DNA為例說一下相關的概念。

1、DNA的分離提純就那些試劑,那些步驟,網上一大堆視頻的,自己去找吧。

2、擴增一般指的是PCR,需提供引物(引物具有特異性,比如說乙肝病毒基因的引物只能擴增乙肝病毒基因)、酶、底物等,三個流程一個循環:變性、復性、延長。

3、檢測一般有紫外分光光度法,電泳分析,雜交分析。

(1)紫外分光光度法:此法的原理涉及到一些光學的知識,可以查詢相關書籍以能更好的理解,可以做定量分析,分為單組份分析和多組分分析。

單組份分析有:

1)標准曲線法:用不通濃度的標准溶液,同一條件下測定吸光度A,以吸光度A為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標准曲線,根據測得的待測樣品吸光度,從標准曲線中便可知溶液濃度。

2)標准對照法:標准溶液濃度a,吸光度A,待測樣品吸光度B,則根據朗-比定律有待測樣品濃度為:B*a/A。

3)吸光系數法:吸光系數K,測得待測樣品吸光度A,溶液的厚度d,根據朗-比定律,則待測樣品的濃度為:A/(K*d)。

多組分分析沒研究過了,自己查查相關資料吧。

(2)電泳分析是根據DNA的分子量和結構不同而在電場中的移動速度不同的原理,電泳的時候需要加MARKER或者已知的基因的片段進行測量。說說MARKER的概念吧,MARKER是由一些列一定梯度的基因片段組成的基因混合物,梯度一般有100bp,200bp,500bp等,MARKER電泳過後便形成很多條距離相等的條帶,每兩條條帶之間的距離為前面提到的梯度值,MARKER用來做標准參考,具有標尺的作用

❹ 核酸電泳方法

帶電荷的物質在電場中的趨向運動稱為電泳。核酸電泳是進行核酸研究的重要手段,是核酸探針、核酸擴增和序列分析等技術所不可或缺的組成部分。核酸電泳通常在瓊脂糖凝膠或聚丙烯醯胺凝膠中進行,濃度不同的瓊脂糖和聚丙烯醯胺可形成分子篩網孔大小不同的凝膠,可用於分離不同分子量的核酸片段。

中文名
核酸電泳
外文名
Nucleic Acid Electrophoresis
學科
分子生物學
概念簡介

凝膠電泳操作簡便、快速,可以分辨用其它方法(如密度梯度離心)所無法分離的核酸片段,是分離、鑒定和純化核酸的一種常用方法

分類
瓊脂糖凝膠電泳

1.原理瓊脂糖是從海藻中提取出來的一種線狀高聚物。將瓊脂糖在所需緩沖液中加熱熔化成清澈、透明的溶膠,然後倒入膠模中,凝固後將形成一種固體基質,其密度取決於瓊脂糖的濃度。

將凝膠置電場中,在中性pH值下帶電荷的核酸通過凝膠網孔向陽極遷移,遷移速率受到核酸的分子大小、構象、瓊脂糖濃度、所加電壓、電場、電泳緩沖液、嵌入染料的量等因素影響。在不同條件下電泳適當時間後,大小、構象不同的核酸片段將處在凝膠不同位置上,從而達到分離的目的。瓊脂糖凝膠的分離范圍較廣,用各種濃度的瓊脂糖凝膠可分離長度為200bp至50kb的DNA。

2.瓊脂糖凝膠電泳的儀器及試劑儀器設備應包括水平凝膠電泳槽及其配套電泳梳、穩壓電泳儀、微波爐或普通電爐。同時配備紫外線檢測儀和照相系統。

試劑包括瓊脂糖、電泳緩沖液、溴化乙錠溶液、凝膠加樣緩沖液。

電泳緩沖液常用TBE(1 000ml中含5.4g Tris,2.75g硼酸,2ml 0.5 mol/L EDTA,pH8.0)。

溴化乙錠(ethidium bromide,EB)是一種熒光染料,它可以嵌入核酸雙鏈的配對鹼基之間,在電泳過程中隨核酸片段遷移,將凝膠置紫外光下,插入核酸鏈中的EB在紫外線激發下產生紅色熒光,可清楚顯示各核酸片段的遷移。EB見光易分解,應存棕色試劑瓶中於4℃下保存。由於 EB是一種強的誘變劑並有中度毒性,使用時必須戴手套操作

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