熒光分光光度法定性定量分析方法

❶ 在分光光度法中，定量的方法有哪些

1、標准管法

將待測溶液與已知濃度的標准溶液在相同條件下分別測定A值，然後按下式求得待測溶液中物質的含量。

CT=（AT/AS）*CS

2、標准曲線法

先配製一系列濃度由小到大的標准溶液，分別測定出它們的A值，以A值為橫坐標，濃度為縱坐標，作標准曲線（A~c工作曲線），可以求出標准曲線的回歸方程。在測定待測溶液時，操作條件應與製作標准曲線時相同，以待測液的A值從標准曲線上查出（得到）該樣品的相應濃度。

3、吸光系數法

當某物質溶液的濃度為1mol/L，厚度為1cm時，溶液對某波長的吸光度稱為該物質的摩爾吸光系數，以ε表示。ε值可通過實驗測得，也可由手冊中查出。

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分光光度法中標准曲線的影響因素

1、分析法自身的精密度：如顯色反應靈敏度不高時，被測物質低於某一濃度就不能顯色，當顯色溶液中的掩蔽劑或緩沖液能夠絡和少量被測離子，就會使標准曲線線性關系不好。

2、測定用儀器（包括量具）的精密度：在分光光度法中要求在最大吸收峰處測定吸光度，分光光度計有效譜帶寬度越窄越好，有利於獲得純度高的單色光，當單色光的純度不夠時，測定的吸光度就會偏低。

3、易揮發溶劑所引起的測定溶液濃度改變：如用亞甲藍分光光度法測定陰離子合成洗滌劑時用四氯化碳、氯仿溶劑，因溶劑揮發性及實驗時間的延長，會使測定的溶液濃度增大，導致吸光度重現性較差。

4、污染：製作標准曲線的操作步驟中，當存在損失或沾污時，會造成相關系數達不到實驗要求。

5、空白值：空白值影響測定方法的檢出限，也影響測定結果重現性，特別是對低濃度樣品的測定，因此應引起足夠重視，影響空白值主要因素有：純水的純度、操作過程中的沾污、實驗條件的異常變化等。

❷ 分光光度法中定量分析常用的方法有哪些

分光光度法中定量分析常用的方法有：標准曲線法和標准加入法。

❸ 紫外分光光度法和熒光分析法的區別和各自的優缺點

1、原理不同：

（1）紫外分光光度計，就是根據物質的吸收光譜研究物質的成分、結構和物質間相互作用的有效手段。

（2）熒光分光光度法是根據物質的熒光譜線位置及其強度進行物質鑒定和含量測定。可根據不同的物質其組成與結構調整所吸收的紫外-可見光波長和發射光的波長。

2、應用范圍不同：

（1）紫外分光光度計主要用於實驗室。例如：鑒定物質：根據吸收光譜圖上的一些特徵吸收，特別是最大吸收波長λmax和摩爾吸收系數ε是檢定物質的常用物理參數。這在葯物分析上就有著很廣泛的應用。與標准物及標准圖譜對照等。

（2）熒光分光光度法的靈敏度通常比分光光度法高2〜3個數量級。在衛生檢驗、環境及食品分析、葯物分析、生化和臨床檢測等方面有著廣泛的應用。

3、所用燈不同：

（1）紫外光區通常用氫燈或氘燈。

（2）熒光分光光度法通常用鎢燈或鹵鎢燈。

4、優缺點：

（1）紫外分光光度計高自動化程度，維護方便、操作簡便、效率高。

（2）熒光分光光度法具有檢測靈敏度高、專屬性較強和使用簡便等特點，常用於微量甚至痕量毒物的定量分析。

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紫外-可見分光光度計的結構與功能：

由光源、單色器、吸收池、檢測器和信號顯示系統五大部分組成。

（1）光源：是提供符合要求的入射光的裝置，有熱輻射光源和氣體放電光源兩類。熱輻射光源用於可見光區，一般為鎢燈和鹵鎢燈，波長范圍是350~1000nm；氣體放電光源用於紫外光區，一般為氫燈和氘燈，連續波長范圍是180~360nm。

（2）單色器：功能是將光源產生的復合光分解為單色光和分出所需的單色光束，它是分光光度計的心臟部分。

（3）吸收池：又稱比色皿，供盛放試液進行吸光度測量之用，其底及兩側為毛玻璃，另兩面為光學透光面，為減少光的反射損失，吸收池的光學面必須完全垂直於光束方向。根據材質可分為玻璃池和石英池兩種，前者用於可見光光區測定，後者用於紫外光區。

（4）檢測器：是將光信號轉變為電信號的裝置，測量吸光度時，並非直接測量透過吸收池的光強度，而是將光強度轉換為電流信號進行測試，這種光電轉換器件稱為檢測器。

（5）信號顯示系統：是將檢測器輸出的信號放大，並顯示出來的裝置。

❹ 熒光分光光度法定性,定量分析的依據是什麼

定量的根據是朗伯比爾定律，定性的依據是吸收曲線的特徵值以及整個吸收曲線的形狀

❺ 影響熒光分光光度法定量測定的主要因素有哪些

影響熒光分光光度法定量測定的主要因素

1．激發光照射

有一些熒光物質若受到強光照射，會發生分解而導致F↓。所以，熒光分光光度計通常在激發光單色器後裝配有光閘，在測定時才打開光閘讓激發光照射樣品池。

2．溫度

溫度↑，熒光效率下降，F↓。因為，溫度↑，增加分子間碰撞機會而使能量消耗掉。

3．pH值

pH值能改變某些熒光物質的電子構型從而影響熒光強度。

4．溶劑

有些溶劑會使熒光效率下降，也可能帶來干擾熒光。

❻ 光學分析法是根據什麼建立起來的分析方法 所涉及的方法都可以進行怎樣分類

光化學分析法是主要根據物質發射，吸收電磁輻射以及物質與電磁輻射的相互作用來進行分析的一類重要的儀器分析法。
光學分析法是基於物質對光的吸收或激發後光的發射所建立起來的一類方法，比如紫外-可見分光光度法，紅外及拉曼光譜法，原子發射與原子吸收光譜法，原子和分子熒光光譜法，核磁共振波譜法，質譜法等。
主要分為三類：
一、紫外-可見分光光度法
紫外-可見光區一般指波長200nm至760nm范國內的電磁波。根據物質分子對此光區電磁波的吸收特性進行定性和定量分析的方法稱為紫外-可見分光光度法。紫外分光光度法使用的輻射波長范圍是200~400nm，主要是引起分子中的外層價電子的能級躍遷。分子吸收此區域的紫外線後，在發生價電子能級躍遷的同時，也伴隨著分子的振動和轉動能級的躍遷，故形成帶狀紫外吸收光譜。據此可進行某些類型的有機物的定性、定量和結構分析：可見分光光度法使用的輻射波長范圍是400~760nm，具有長共軛結構的有機物或有色無機物吸收一定波長的可見光後，發生價電子能級躍遷，並伴隨振動和轉動能級的躍遷，其吸收光譜也是帶狀光譜。通常紫外分光先度計都有可見光波段，因此常將兩者一起稱為紫外-可見分光光度法。
二、熒光分析法
熒光分析法是一種利用某些物質的熒光光譜特性來進行定性、定量的分析方法。一般所說的熒光分析法，是指以紫外或可見光作為激發光源，所發射的熒先波長較激發光波長要長的分子熒充分析法。
三、紅外分光光度法
紅外光譜是由於樣品分子吸收電磁輻射導致振動-轉動能級的躍遷而形成的分子吸收光譜，中紅外區使用的輻射波長是2.5—50μm。分子吸收紅外輻射必須滿足兩個條件；即只有當電磁輻射的能量與分子的振-轉能級之間的躍遷所需要的能量相當時，分子才吸收這部分輻射；其二是被紅外輻射作用的分子必須要有偶極矩的變化，也就是只有發生偶極據變化的振動，才能引起紅外吸收譜帶，這種振動才是紅外活性的。

❼ 紫外可見分光光度法的定性,定量分析的依據是什麼

1，定性分析的依據：紫外光波長具有一定的范圍，不同的物質最大吸收波長不一樣，比如甲物質在紫外的a和b波長處有吸收現象，而且在a處達到最大吸收，則甲物質的紫外最大吸收波長是a。不同的物質的這種波長不一樣。

2，定量分析依據：根據朗伯-比爾定律，物質濃度和吸收波長的強度成正比關系。

紫外-可見分光光度法是在190～800nm波長范圍內測定物質的吸光度，用於鑒別、雜質檢查和定量測定的方法。

當光穿過被測物質溶液時，物質對光的吸收程度隨光的波長不同而變化。因此，通過測定物質在不同波長處的吸光度，並繪制其吸光度與波長的關系圖即得被測物質的吸收光譜。

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紫外分光光度計注意事項：

1，開機前將樣品室內的乾燥劑取出，儀器自檢過程中禁止打開樣品室蓋。

2，比色皿內溶液以皿高的2/3～4/5為宜，不可過滿以防液體溢出腐蝕儀器。測定時應保持比色皿清潔，池壁上液滴應用擦鏡紙擦乾，切勿用手捏透光面。測定紫外波長時，需選用石英比色皿。

3，測定時，禁止將試劑或液體物質放在儀器的表面上，如有溶液溢出或其它原因將樣品槽弄臟，要盡可能及時清理干凈。

4，實驗結束後將比色皿中的溶液倒盡，然後用蒸餾水或有機溶劑沖洗比色皿至干凈，倒立晾乾。關電源將乾燥劑放入樣品室內，蓋上防塵罩，做好使用登記，得到管理老師認可方可離開。

❽ 求問分光光度法原理

分光光度法
分光光度法是通過測定被測物質在特定波長處或一定波長范圍內光的吸光度或發光強度，對該物質進行定性和定量分析的方法。
在分光光度計中，將不同波長的光連續地照射到一定濃度的樣品溶液時，便可得到與眾不同波長相對應的吸收強度。如以波長（λ）為橫坐標，吸收強度（A）為縱坐標，就可繪出該物質的吸收光譜曲線。利用該曲線進行物質定性、定量的分析方法，稱為分光光度法，也稱為吸收光譜法。用紫外光源測定無色物質的方法，稱為紫外分光光度法；用可見光光源測定有色物質的方法，稱為可見光光度法。它們與比色法一樣，都以Beer-Lambert定律為基礎。
上述的紫外光區與可見光區是常用的。但分光光度法的應用光區包括紫外光區，可見光區，紅外光區。
波長范圍
(1)200～400nm的紫外光區，(2)400～760nm的可見光區，
(3)2.5～25μm(按波數計為4000cm<-1>～400cm<-1>)的紅外光區。
儀器
紫外分光光度計，可見分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和准確度，所有儀器應按照國家計量檢定規程或本附錄規定，定期進行校正檢定。
編輯本段基本原理
當一束強度為I0的單色光垂直照射某物質的溶液後,由於一部分光被體系吸收,因此透射光的強度降至I,則溶液的透光率T為:
根據朗伯(Lambert)-比爾(Beer)定律:
A=abc
式中A為吸光度，b為溶液層厚度（cm），c為溶液的濃度（g/dm^3)，
a為吸光系數。其中吸光系數
與溶液的本性、溫度以及波長等因素有關。溶液中其他組分（如溶劑等）對光的吸收可用空白液扣除。
由上式可知，當固定溶液層厚度l和吸光系數a時，吸光度A與溶液的濃度成線性關系。在定量分析時，首先需要測定溶液對不同波長光的吸收情況（吸收光譜），從中確定最大吸收波長
，然後以此波長
的光為光源，測定一系列已知濃度c溶液的吸光度A，作出A~c工作曲線。在分析未知溶液時，根據測量的吸光度A，查工作曲線即可確定出相應的濃度。這便是分光光度法測量濃度的基本原理。
(參考網路)

❾ 分子熒光分光光度法

分子熒光分光光度法是根據物質的熒光譜線位置及其強度進行物質鑒定和含量測定的方法。

由於不同的物質其組成與結構不同，所吸收的紫外-可見光波長和發射光的波長也不同，同一種物質應具有相同的激發光譜和熒光光譜，將未知物的激發光譜和熒光光譜圖的形狀、位置與標准物質的光譜圖進行比較，即可對其進行定性分析。

熒光分光光度計是最常見的實驗儀器，主要用於對經光源激發後產生熒光的物質或經化學處理後產生熒光的物質成份分析。在檢測食品安全、自然環境污染等重要的人類課題上，發揮積極的作用。

熒光分光光度計是用於掃描液相熒游標記物所發出的熒光光譜的一種儀器，有濾光片熒光計、濾光片-單色器熒光計等，通常均由以下四個部分組成：激發光源、用於選擇激發光波長和熒光波長的單色器、樣品池及測量熒光的檢測器。